周以華

(江蘇省鹽城市大豐人民醫(yī)院檢驗(yàn)科　224100)

?

·臨床研究·

HIV抗體初篩試驗(yàn)陽性結(jié)果分析

周以華

(江蘇省鹽城市大豐人民醫(yī)院檢驗(yàn)科224100)

目的通過對(duì)獲得性免疫缺陷病毒(HIV)抗體初篩試驗(yàn)陽性結(jié)果分析,探討其影響因素，以提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。方法對(duì)56例HIV抗體初篩試驗(yàn)陽性血清標(biāo)本,分別使用廈門新創(chuàng)試劑和上?？迫A試劑進(jìn)行檢測(cè),如兩種試劑均呈陽性或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。結(jié)果56例初篩陽性血清標(biāo)本,經(jīng)兩種試劑復(fù)檢,均為陰性2例,均為陽性52例。廈門新創(chuàng)試劑與上海科華試劑陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.51,P>0.05)。54例復(fù)檢陽性標(biāo)本經(jīng)送上級(jí)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室最終確認(rèn),陽性49例,陰性5例。結(jié)論HIV抗體初篩試驗(yàn)陽性結(jié)果影響因素較多,主要與試劑的敏感度和特異度有關(guān),操作中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行質(zhì)量控制,才能把HIV檢測(cè)工作做得更好。

HIV抗體;敏感度;特異度

艾滋病是由獲得性免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一種嚴(yán)重傳染性疾病，迄今仍無有效治療方法,除了行為干預(yù)等社會(huì)手段外，對(duì)住院就診患者進(jìn)行HIV抗體篩查，及時(shí)發(fā)現(xiàn)HIV感染者是目前控制疫情的重要技術(shù)手段[1]。本文對(duì)2013年1月至2015年12月本院住院患者56例HIV抗體初篩陽性結(jié)果進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料56例HIV抗體初篩陽性結(jié)果標(biāo)本均來自2013年1月至2015年12月本院住院患者，在輸血前四項(xiàng)常規(guī)例行檢查中發(fā)現(xiàn)，其中男44例，女12例，年齡18～63歲，中位年齡40.5歲。

1.2儀器與試劑廈門新創(chuàng)試劑和上?？迫A試劑均經(jīng)過國(guó)家藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)，批檢合格，且在有效期內(nèi)，儀器為伯樂酶標(biāo)儀及上海新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的EFFICUTA全自動(dòng)樣本前處理系統(tǒng)。

1.3方法根據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2009年修訂版)》要求，對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑重復(fù)檢測(cè)，陰性標(biāo)本可以不復(fù)檢。初篩試驗(yàn)采用廈門新創(chuàng)試劑檢測(cè),對(duì)初篩試驗(yàn)陽性血清標(biāo)本用廈門新創(chuàng)試劑和上?？迫A試劑重復(fù)檢測(cè)。如兩種試劑復(fù)檢均為陰性,則報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng),或一陰一陽,則需送上級(jí)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)[2]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

56例初篩陽性血清標(biāo)本,經(jīng)兩種試劑復(fù)檢,均為陰性2例,均為陽性52例，廈門新創(chuàng)試劑陽性且上?？迫A試劑陰性2例，廈門新創(chuàng)試劑陰性且上?？迫A試劑陽性0例。廈門新創(chuàng)試劑與上?？迫A試劑陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.51,P>0.05)，見表1。54例復(fù)檢陽性標(biāo)本經(jīng)送上級(jí)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室做免疫印跡法最終確認(rèn)，陽性49例,陽性率為90.7%,陰性5例,陰性率為9.3%。

3　討　　論

目前，國(guó)內(nèi)艾滋病初篩試驗(yàn)室HIV抗體的檢測(cè)方法主要是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，此法具有敏感度高、特異度強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，其試劑性能穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果易判斷，可以適用于大規(guī)模篩查試驗(yàn)，但試驗(yàn)過程中影響因素較多[3]。表1結(jié)果顯示，56例初篩陽性血清標(biāo)本,用兩種試劑重復(fù)檢測(cè)，均為陰性有2例。后經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，1例假陽性結(jié)果是由于血清標(biāo)本溶血引起。溶血對(duì)ELISA的檢測(cè)結(jié)果有直接影響，溶血標(biāo)本的血清中含有血紅素基團(tuán)，具有過氧化物的活性，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中，如果血清中的血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色[4]，臨床工作中，標(biāo)本采集操作不規(guī)范、送檢時(shí)間延遲、強(qiáng)力振蕩和分離血細(xì)胞操作不慎等易造成溶血現(xiàn)象，當(dāng)血漿游離血紅蛋白≥10 g/L時(shí)會(huì)出現(xiàn)HIV抗體假陽性[5]。因此，在日常工作中，對(duì)于溶血標(biāo)本，應(yīng)加強(qiáng)與臨床科室聯(lián)系，分析溶血原因，必要時(shí)建議重新采集標(biāo)本送檢，或在報(bào)告單上注明溶血程度，以防止不必要的糾紛，同時(shí)對(duì)采血人員加強(qiáng)技能培訓(xùn)，對(duì)送檢人員進(jìn)行崗前培訓(xùn)，以避免溶血。另1例是由于洗板不徹底導(dǎo)致非特異蛋白物質(zhì)吸附于微孔內(nèi)而造成假陽性結(jié)果。標(biāo)本采集后應(yīng)在室溫下放置1～2 h，待血液凝固后以3 000 r/min離心10 min，使血清中纖維蛋白原充分分離，因?yàn)槔w維蛋白原對(duì)微反應(yīng)板孔有一定的吸附作用，易造成假陽性結(jié)果。分離后的血清標(biāo)本應(yīng)及時(shí)測(cè)定，對(duì)于無法立即測(cè)定的標(biāo)本，需在2～8 ℃保存，超過1周以上，血清標(biāo)本需保存在-20 ℃，以防止細(xì)菌污染(因細(xì)菌分泌的過氧化物酶可導(dǎo)致假陽性結(jié)果)。

ELISA操作中，洗板是最主要的關(guān)鍵技術(shù)，血清中殘留的纖蛋白原，或洗滌液析出的結(jié)晶使洗板機(jī)兩排針孔全阻塞或半阻塞狀態(tài)，造成未結(jié)合標(biāo)記酶洗脫不徹底，易產(chǎn)生假陽性[6-7]。本室使用的是上海新波生物技術(shù)有限公司EFFICUTA全自動(dòng)樣本前處理系統(tǒng)，它使血清標(biāo)本的加樣、孵育及顯色等一系列操作因素得以自動(dòng)化，降低了差錯(cuò)率。在日常工作中，每天應(yīng)保持儀器的洗板頭清潔，管道通暢，清洗液定時(shí)更換，才能保證儀器的正常運(yùn)行。因此，實(shí)驗(yàn)室必須具有完善的質(zhì)量控制程序，對(duì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的諸多因素進(jìn)行控制，才能獲得準(zhǔn)確的檢測(cè)報(bào)告[8]。

隨著國(guó)家對(duì)艾滋病的監(jiān)測(cè)越來越重視，對(duì)艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)HIV抗體的敏感度和特異度的要求也越來越高[9]，HIV抗體檢測(cè)適用于HIV感染窗口期后至艾滋病患者死亡的整個(gè)過程，ELISA檢測(cè)HIV抗體是最常用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。自從1985年第一代ELISA試劑使用純化的裂解HIV作為包被抗原，存在較多的假陽性，其敏感性和特異性分別為97.2%和70.0%，窗口期為6～12周[10]。1990年第二代試劑產(chǎn)生，采用基因工程的重組或人工合成肽為包被抗原，主要包被gp24、gp36、gp41、gp120,能同時(shí)檢測(cè)HIV-1和HIV-2，特異性明顯提高。1994年，美國(guó)研制出使用雙抗原夾心法的第三代試劑，由于能同時(shí)檢測(cè)IgM抗體，因此可以縮短檢測(cè)窗口期4～5 d，同時(shí)敏感性也有所提高[11]。第四代試劑則在第三代的基礎(chǔ)上增加了P24抗原的檢測(cè)，用HIV抗原和抗P24抗體同時(shí)包被反應(yīng)板，檢測(cè)血清中的HIV抗體和P24抗原，進(jìn)一步縮短了窗口期，時(shí)間為4～5 d，但由于同時(shí)把抗原和抗體包被在反應(yīng)板上，存在互相干擾的可能，出現(xiàn)了第二窗口期[12]。

目前，由于試劑檢測(cè)成本原因，本室所用兩種不同廠家的ELISA檢測(cè)試劑均屬于雙抗原夾心法(第三代試劑)，不同廠家生產(chǎn)的試劑之間存在一定的差異，選擇時(shí)主要考慮它的敏感度和特異度，在更換試劑廠家時(shí)必須對(duì)新試劑進(jìn)行評(píng)估，更換試劑批號(hào)時(shí)需重新制作質(zhì)控圖。表1結(jié)果顯示,兩組試劑陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明二者在檢測(cè)HIV抗體方面程度一致性好，故廈門新創(chuàng)試劑和上海科華試劑均可作為初篩試劑，由于廈門新創(chuàng)試劑比上海科華試劑檢測(cè)的HIV抗體陽性數(shù)多2例，故選擇廈門新創(chuàng)試劑作為初篩試劑比選上海科華試劑更合適，可以減少漏診。其原因可能為不同廠家生產(chǎn)的試劑盒，由于包被抗原或抗體純度及生產(chǎn)工藝不同，導(dǎo)致結(jié)果不同。而把上?？迫A試劑作為另外一種復(fù)檢試劑，也是合適的，可以相對(duì)增加其特異度。54例復(fù)檢陽性標(biāo)本經(jīng)送上級(jí)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室最終確認(rèn)陽性49例,陰性5例。造成假陽性結(jié)果的原因多數(shù)尚不清楚，一些含有針對(duì)HLA抗原的抗體和患有自身免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕病),寄生蟲病及某些病毒性肝炎患者的血清標(biāo)本容易出現(xiàn)假陽性[13-14]。因此，根據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2009年修訂版)》要求，對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑重復(fù)檢測(cè)，以增加敏感度，提高特異度，減少漏診和降低費(fèi)用。

綜上所述，本研究通過對(duì)56例初篩陽性血清標(biāo)本的回顧性分析，探討了HIV抗體在檢測(cè)過程中的諸多影響因素。在選擇初篩診斷試劑時(shí)，既要保證其敏感度高，又要兼顧特異度,工作中要加強(qiáng)質(zhì)量控制，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，才能減少假陽性結(jié)果的發(fā)生，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1]楊曉莉，鮑作義，劉永健，等．中國(guó)HIV抗體檢測(cè)策略的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]．中華流行病學(xué)雜志，2010，31(7)：776-780．

[2]董雪,趙曦,里天初,等.中國(guó)三版艾滋病檢測(cè)技術(shù)工作規(guī)范的對(duì)比分析[J].中國(guó)艾滋病性病,2010，15(6):595-598.

[3]張京海，陳世敏，崔海榮，等．HIV感染病人的血清學(xué)診斷及結(jié)果分析[J]．放射免疫學(xué)雜志，2007，20(2)：179-180．

[4]郭德華．全國(guó)臨床免疫和臨床免疫檢驗(yàn)學(xué)術(shù)會(huì)紀(jì)要[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，1999，16(4)：256．

[5]岳展伊．溶血對(duì)ELISA法檢測(cè)HIV抗體影響的臨床分析[J]．中外醫(yī)療，2010，29(2)：34．

[6] 于振喜,李連潔.用ELISA法檢測(cè)HIV抗體時(shí)如何避免“花板”[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2006,3(23)：56.

[7]王靜．ELISA快速法檢測(cè)HBsAg時(shí)手工洗板和洗板機(jī)洗板的結(jié)果比較[J]．中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7(9)：69．

[8]張惠芳，張宇艷，楊詠梅，等．HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控分析[J]．中華臨床醫(yī)學(xué)衛(wèi)生雜志，2006，4(10)：76-77．

[9]陳云鈺．ELISA法檢測(cè)HIV抗體需注意的影響因素[J]．中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21(6)：1564-1565．

[10]代麗麗，吳昊．人免疫缺陷病毒感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)概況[J]．中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2008，3(4)：312-314．

[11]Barbé F,Klein M,Badonnel Y.Early detection of antibodies to human immunodeficiency virus 1 by a third-generation enzyme immunoassay.A comparative study with the results of second-generation immunoassays and western blot[J].Ann Biol Clin(Paris),1994,52(5):341-345.

[12]吳忠華，羅鵬，呂沁風(fēng)．HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及其研究進(jìn)展[J]．中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志，2009，32(4)：285-292．

[13]陳奕賢，陳秋玉．不同試劑檢測(cè)艾滋病抗體結(jié)果觀察[J]．中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010，4(12)：108-109．

[14]阮樂幸，袁國(guó)平，余明華．HIV抗體假陽性結(jié)果分析[J]．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，32(12)：1763．

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.051

A

1673-4130(2016)17-2475-02

2016-03-03

2016-05-10)