林娜，陳靜，張萬科，易博

(1.中國人民解放軍第一八七醫(yī)院藥劑科，海南 ?？?571159；2.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 海口 571199)

海南產(chǎn)沉香揮發(fā)油成分研究

林娜1，陳靜1，張萬科2，易博1

(1.中國人民解放軍第一八七醫(yī)院藥劑科，海南 ?？?571159；2.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 ?？?571199)

目的 對海南產(chǎn)沉香揮發(fā)油的成分進(jìn)行研究。方法采用低溫-動態(tài)-微波法及氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)，以固相微萃取頂空進(jìn)樣，提取并分析國產(chǎn)沉香揮發(fā)油中的化學(xué)成分。結(jié)果從海南產(chǎn)沉香樣品揮發(fā)油中檢出54種化合物，占總峰面積的43.23%，主要為倍半萜類、芳香族和脂肪酸類化合物。其中倍半萜類化合物檢出26個，相對總含量達(dá)36.87%，尤以β-瑟林烯和沉香螺旋醇含量較高，分別為6.47%和4.63%。結(jié)論海南產(chǎn)沉香揮發(fā)油中的倍半萜成分豐富，可為進(jìn)一步質(zhì)量控制研究提供參考。

沉香；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；固相微萃取

沉香(Lignum Aquilariae Resinatum)為中醫(yī)臨床常用的一味藥材，來源于瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg含樹脂的木材，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘之功效，用于胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔吐呃逆、腎虛氣逆喘急[1]。白木香作為國產(chǎn)正品中藥沉香的唯一植物來源，主產(chǎn)于海南、廣東、廣西、云南、福建和臺灣等地，自然條件下在刀砍、蟲蛀、自然界傷害等刺激或損傷后，植物體進(jìn)行自我修復(fù)時，開放性傷口被真菌入侵寄生，菌體分泌的酶與白木香薄壁細(xì)胞發(fā)生作用，致使薄壁細(xì)胞內(nèi)的淀粉發(fā)生一系列化學(xué)變化，分泌樹脂凝結(jié)于木材內(nèi)，經(jīng)多年沉積形成沉香[2-5]。沉香作為中藥材，最早記載于梁代《名醫(yī)別錄》，五代時期李珣所著《海藥本草》就已對其藥用價值進(jìn)行了明確闡述，歷史上認(rèn)為，海南產(chǎn)沉香品質(zhì)上乘，有“冠絕天下”之美譽[6-7]。近年來，生態(tài)環(huán)境遭受破壞，天然更新能力弱，導(dǎo)致野生資源不斷減少，并且基于沉香產(chǎn)生的特性：因結(jié)香時間長短和產(chǎn)地不同，其所含揮發(fā)性化學(xué)成分的種類及含量也會產(chǎn)生差異，與沉香品質(zhì)和功效密切相關(guān)。因此市場上高品質(zhì)野生沉香資源稀缺，其價格不斷上揚，質(zhì)量也難以保障[8-9]。本研究對海南產(chǎn)沉香樣品，采用低溫-動態(tài)-微波法提取獲得沉香揮發(fā)油，采用GC-MS技術(shù)和相關(guān)輔助數(shù)據(jù)庫[10]，對其揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，為海南產(chǎn)沉香資源的開發(fā)利用和質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試藥 沉香樣品購自海南仙島沉香有限公司，產(chǎn)地為海南澄邁，經(jīng)筆者鑒定為白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg含樹脂的木質(zhì)部；95%食品級乙醇。

1.2 儀器 低溫-動態(tài)-微波連續(xù)提取及分離設(shè)備(自行組裝設(shè)計)；Voyager型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)，(美國Finnigan公司)；固相微萃取裝置(美國Supelco公司)。

1.3 揮發(fā)油提取 稱取沉香粉末適量，以低溫-動態(tài)-微波法用95%食用級乙醇進(jìn)行提取，提取液適當(dāng)濃縮，置冰箱-18℃冷凍過夜，低溫抽濾，進(jìn)一步濃縮濾液，加入一定量的吸附劑除去膠質(zhì)，獲得沉香揮發(fā)油。

1.4 取樣方法 固相微萃取頂空法(SPME)：選用100 μm，PDMS纖維頭。每次進(jìn)樣時，分別取1.0 μL揮發(fā)油樣品，加入頂空瓶中，用固相微萃取器，80℃萃取30 min，并且置于220℃進(jìn)行解吸附。

1.5 GC-MS分析條件 色譜條件：固相微萃取熱解吸附分流進(jìn)樣，接口溫度為230℃；進(jìn)樣口溫度為220℃；進(jìn)樣量為1 μL；分流比設(shè)置為80:1；氣相色譜采用DB-5石英毛細(xì)管柱(長度：30 m，直徑：0.25 mm，膜厚：0.25 μm)；載氣：高純氦氣，載氣流速：1 mL/min；升溫程序：初始溫度60℃，持續(xù)3 min，然后以6℃/min升溫至130℃，再以2℃/min升溫至180℃，最后以10℃/min升溫至270℃。質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度為220℃，電子能量70 eV；檢測電壓380 V；檢測離子質(zhì)荷比(m/z)范圍為33～450 u；譜庫檢索數(shù)據(jù)庫為NIST庫[10]。

2 結(jié) 果

按照“1.3”方法提取揮發(fā)油，采用固相微萃取頂空進(jìn)樣法，GC-MS技術(shù)，對樣品沉香中的揮發(fā)性成分進(jìn)行檢測，得質(zhì)譜總離子圖(圖1)；通過GC-MS-DS色譜計算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)檢索標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)庫(NIST)，在樣品中鑒定了54個化合物；以峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，計算各種揮發(fā)性化學(xué)成分的相對百分含量為43.23%，將所檢出化合物按保留時間先后次序列表如表1所示。

圖1 海南沉香的揮發(fā)油總離子流圖

海南產(chǎn)沉香樣品揮發(fā)油中主要以倍半萜類化合物居多，共檢出26個倍半萜類化合物，相對總含量達(dá)到36.87%，其次為芳香族類化合物，相對總含量為4.21%。揮發(fā)油相對含量在1%以上的有β-欖香烯、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚、α-慕蘿烯、β-瑟林烯、α-姜黃烯、α-瑟林烯、沉香螺旋醇、α-沉香呋喃、β-馬欖烯、馬兜鈴烯、α-木香醇、白木香醛、鄰苯二甲酸二異丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯，其中β-瑟林烯和沉香螺旋醇含量較高，分別為6.47%和4.63%。

表1 沉香樣品的揮發(fā)油化學(xué)成分

3 討 論

本研究所用樣品為海南產(chǎn)天然沉香，采用固相微萃取頂空進(jìn)樣與GC-MS聯(lián)用的方法，快速且所需樣品量少，適合于揮發(fā)性珍貴藥材的成分分析及鑒定。沉香揮發(fā)油采用低溫-動態(tài)-微波法提取，在低溫狀態(tài)動態(tài)提取，較好的保證了揮發(fā)油的質(zhì)量，避免高溫破壞，在研究結(jié)果中檢出倍半萜成分達(dá)26個，較以前文獻(xiàn)報道豐富[12-13]。倍半萜類及其含氧衍生物多具有較強的香味和生物活性，海南產(chǎn)沉香的品質(zhì)歷來被認(rèn)為是最好，與其揮發(fā)油中富含倍半萜類成分不無關(guān)系。楊峻山等[14]報道，沉香倍半萜成分對神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的生理活性，其中主要成分之一的沉香螺旋醇有報道顯示其有氯丙嗪樣的鎮(zhèn)靜作用[15]。倍半萜成分被認(rèn)為是沉香的主要藥理活性成分[16]。本研究為進(jìn)一步監(jiān)測沉香中倍半萜成分的富集過程和制定沉香的藥材質(zhì)量控制體系提供了參考。

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Study on volatile oil components from Lignum Aquilariae Resinatum produced in Hainan.

LIN Na1,CHEN Jing1, ZHANG Wan-ke2,YI Bo1.1.Department of Pharmacy,the 187thGeneral Hospital of People's Liberation Army,Haikou 571159,Hainan,CHINA;2.Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

ObjectiveTo analyze the volatile oil components from Lignum Aquilariae Resinatum produced in Hainan.MethodsThe volatile components were extracted by low temperature-dynamic microwave method and gas chromatography-mass spectrometry(GC-MS)technique,with solid-phase microextraction(SPME)for head-space injection.The constituents in volatile oil were analyzed.ResultsFifty-four compounds were detected and identified from the agarwood sample,representing 43.23%of the total volatile oil.The compounds mainly included ingredients like esquiterpenes,benzene compounds and fatty acids.Twenty-six esquiterpenes have been identified and the total relative contents accounted for 36.87%,mainly β-selinene(6.47%)and agarospirod(4.63%).ConclusionThe volatile oil of agarwood sample produced in Hainan contains rich esquiterpenes.

Lignum Aquilariae Resinatum;Volatile oil;Gas chromatography-mass spectrometry(GC-MS);Solid-phase microextraction(SPME)

R282.71

A

1003—6350（2016）09—1383—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.09.003

2016-01-12)

海南省社會發(fā)展科技專項（編號：SF201315）；海南省中藥現(xiàn)代化專項基金（編號：ZY201328）

易博。E-mail：boyicn@126.com