黃吉生，孫君鑫，郭藝，王勇，楊衛(wèi)麗

(海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 ?？?571199)

正交試驗(yàn)法優(yōu)選飛機(jī)草地上部分總黃酮提取工藝研究

黃吉生，孫君鑫，郭藝，王勇，楊衛(wèi)麗

(海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 ?？?571199)

目的 優(yōu)選飛機(jī)草地上部分總黃酮的提取工藝。方法以飛機(jī)草地上部分總黃酮含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)，以乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比和提取次數(shù)為考察因素，優(yōu)化飛機(jī)草中總黃酮的提取工藝。結(jié)果蘆丁對(duì)照品的濃度與吸光度在8.8～30.8μg/ml范圍內(nèi)線性良好(r=1)。提取工藝為70%乙醇溶液提取，料液比1:70，超聲提取2次，每次50 min。結(jié)論該提取工藝合理，方法簡(jiǎn)便，可為飛機(jī)草中總黃酮提取工藝的確定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

飛機(jī)草；總黃酮；提取工藝

飛機(jī)草(Chromolaena odorata L.)為菊科澤蘭屬植物，主產(chǎn)華南、西南等地，是我國(guó)民間中草藥，性溫，味微酸，具有散瘀消腫，解毒和止血功效，主要用于跌打腫痛、瘡瘍腫毒、皮炎和外傷出血[1]。藥理學(xué)研究表明飛機(jī)草葉的提取物具有抗糖尿病、抗白內(nèi)障以及促進(jìn)傷口愈合的作用[2-3]。黃酮類化合物對(duì)多種腫瘤具有預(yù)防、治療或化療增敏作用[4-5]；還具有降血糖、降血脂、降壓、鎮(zhèn)痛和抗炎[6]。故本文采用正交試驗(yàn)法，以總黃酮為考察指標(biāo)，研究飛機(jī)草中總黃酮的提取工藝，為該藥材的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)和參考。

1 材料與儀器

1.1 材料 飛機(jī)草地上部分采于海南省?？谑行阌^(qū)，經(jīng)鑒定為菊科澤蘭屬植物飛機(jī)草的干燥地上部分；蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100080-200707，純度：92.5%)；三氯化鋁、無(wú)水乙醇均為分析純。

1.2 儀器 UV-1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海鳳凰光學(xué)科儀有限公司)；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；AL104電子天平(梅特勒-托利多(上海)儀器公司)；XS Dualrange分析天平(梅特勒-托利多儀器公司)；SY-180型超聲波清洗器(上海寧商超聲波儀器有限公司)；HC-150TZ型高速多功能粉碎機(jī)(永康市綠可食品機(jī)械有限公司)； GZX-9240ME型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱得蘆丁對(duì)照品11.00 mg，置50 ml容量瓶中，70%乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，得0.220 mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液0.0 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5 ml、3.0 ml、3.5 ml于25 ml容量瓶中，各加入5%AlCl3乙醇溶液1.5 ml，混勻，70%乙醇溶液定容，放置10 min，在波長(zhǎng)405 nm處測(cè)定吸光度值。以吸光度A為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=0.0254X+ 0.0399，R2=1(n=6)，線性范圍為8.8～30.8μg/ml。

2.3 提取方法預(yù)實(shí)驗(yàn) 進(jìn)行正交試驗(yàn)之前，采用單因素試驗(yàn)對(duì)提取方法、乙醇濃度、超聲提取時(shí)間等因素進(jìn)行了初步考察，見(jiàn)表1、圖1及圖2。由結(jié)果可知超聲波提取優(yōu)于浸提，所以初步確定了超聲波提取為方法，以乙醇濃度(50%、60%、70%)，超聲提取時(shí)間(30 min、40 min、50 min)等進(jìn)行正交試驗(yàn)。

表1 飛機(jī)草中總黃酮提取方法考察

圖1 乙醇濃度的單因素結(jié)果

圖2 提取時(shí)間的單因素結(jié)果

2.4 正交試驗(yàn)優(yōu)選 在預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，取飛機(jī)草藥材粉末1.0 g，精密稱定，以總黃酮含量為指標(biāo)，對(duì)乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比和提取次數(shù)進(jìn)行正交試驗(yàn)，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，按L934正交設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)。因素水平見(jiàn)表2，L934正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表3。由表3的極差分析結(jié)果可以看出，RA＞RC＞RD＞RB，4個(gè)因素對(duì)飛機(jī)草中總黃酮提取率的影響大小依次為：乙醇濃度(A)＞提取時(shí)間(C)＞提取次數(shù)(D)＞料液比(B)。四因素中，乙醇濃度的提取作用最為顯著，料液比提取作用較不顯著。在試驗(yàn)設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，優(yōu)化飛機(jī)草中總黃酮的最佳條件為A3B3C3D2即乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、料液比1:70、提取時(shí)間50 min、提取2次。

表2 飛機(jī)草中總黃酮提取工藝因素水平表

2.5 結(jié)果 為確定該工藝的穩(wěn)定性與優(yōu)劣，在上述正交試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，按照飛機(jī)草中總黃酮的最佳提取工藝，進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。精密稱取適量的飛機(jī)草，按正交試驗(yàn)優(yōu)化的最佳工藝條件提取，即乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、料液比1:70、提取時(shí)間50 min、提取2次，測(cè)定含量，見(jiàn)表4。由A3B3C3D2工藝條件提取的飛機(jī)草總黃酮含量平均為1.13%，高于其他條件提取所得的總黃酮含量，故證明正交試驗(yàn)優(yōu)選的A3B3C3D2為最佳提取工藝。

表3 飛機(jī)草中總黃酮提取工藝正交表L934試驗(yàn)安排和結(jié)果

表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

從直觀分析結(jié)果可知，序號(hào)7的結(jié)果與最佳提取工藝A3B3C3D2所測(cè)得的結(jié)果相近，如進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)或大規(guī)模提取，從節(jié)約成本的角度考慮可采用A3B1C3D2的工藝條件組合，即為乙醇濃度70%、料液比1:50、提取時(shí)間50 min、提取2次。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，超聲技術(shù)已應(yīng)用于提取植物中生物堿、黃酮類、多糖類、皂苷類等成分[7]，成為天然產(chǎn)物提取研究的一個(gè)常用方法[8]。本試驗(yàn)首先采用單因素試驗(yàn)考察了提取方法，結(jié)果超聲波提取操作簡(jiǎn)便、提取率較高，故選擇超聲波方法進(jìn)行提取。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局.中華本草(第7分冊(cè))[M].上海:上?？萍汲霭嫔?1999:841-842.

[2]Onkaramurthy M,Veerapur VP,Thippeswamy BS,et al.Anti-diabetic and anti-cataract effects of Chromolaena odorata Linn,in streptozotocin-induced diabetic rats[J].Journal of Ethnobiology,2013,145 (1):363-372.

[3]Pandith H,Thongpraditchote S,Wongkrajang Y,et al.In vivo and in vitro hemostatic activity of Chromolaena odorata leaf extract[J].Pharmaceutical Biology,2012,50(9):1073-1077.

[4]Wu DG,Yu P,Li JW,et al.Apigenin potentiates the growth inhibitory effects by IKK-β-mediated NF-κ B activation in pancreatic cancer cells[J].Toxicology Letters,2014,224(1):157-164.

[5]胡太平,陳偉強(qiáng),曹建國(guó).芹菜素對(duì)人急性髓性白血病細(xì)胞化療敏感性的增強(qiáng)作用[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,42(3):515-517.

[6]譚秦莉,劉冬,李玉寶,等.總黃酮化合物藥理作用研究進(jìn)展[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,28(3):62-64.

[7]薛峰,李春娜,李朋收,等.超聲提取在中藥化學(xué)成分提取中的應(yīng)用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(18):231-234.

[8]鄔方寧.超聲提取技術(shù)在現(xiàn)代中藥中的應(yīng)用[J].中草藥,2007,38 (2):315-316.

Optimal extraction process of total flavonoids in the aerial parts of Chromolaena odorata L.by orthogonal experiment.

HUANG Ji-sheng,SUN Jun-xin,GUO Yi,WANG Yong,YANG Wei-li.School of Pharmacy,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

ObjectiveTo optimize the extraction process of total flavonoids in the aerial parts of Chromolaena odorata L..MethodsThe content of total flavonoids was observed to evaluate the extraction technology.Parameters affecting the extraction percentage of total flavonoids were ethanol concentration,the extraction times,the solid-liquid ratio,time of ultrasonic extraction by orthogonal experiment.ResultsThe standard curve was linear in the concentration ranges of 8.8～30.8μg/ml(r=1).The best extraction condition of total flavonoids was extracting 2 times,50 min each time,with 70%ethanol as the solvent and solid to liquid ratio of 1:70.ConclusionIt is proved that the method is reasonable and simple,which can provide a reference for the extraction of Chromolaena odorata L..

Chromolaena odorata L.;Total flavonoids;Extraction process

R93

A

1003—6350（2016）04—0524—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.04.003

2015-10-23)

海南省教育廳高等學(xué)?？茖W(xué)研究資助項(xiàng)目(編號(hào)：Hjkj2013-35)；海南省級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：20140105)；海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：hyydc2013007)

楊衛(wèi)麗。 E-mail:weili-yang@126.com