冀保妍，陳蓉，李海燕，李淼，郭燕，南敏

(1.青海省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，青海 西寧 810000；2.青海大學附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，青海 西寧 810016；3.青海省腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，青海 西寧 810007；4.青海省人民醫(yī)院病理科，青海 西寧 810000；5.西京醫(yī)院體檢中心，陜西 西安 710032)

非小細胞肺癌患者LRIG1及Fascin-1的表達及其臨床意義

冀保妍1，陳蓉2，李海燕1，李淼3，郭燕4，南敏5

(1.青海省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，青海 西寧 810000；2.青海大學附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，青海 西寧 810016；3.青海省腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，青海 西寧 810007；4.青海省人民醫(yī)院病理科，青海 西寧 810000；5.西京醫(yī)院體檢中心，陜西 西安 710032)

目的 探討多亮氨酸重復區(qū)免疫球蛋白樣蛋白1(LRIG1)和成束蛋白1(Fascin-1)在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達及其臨床意義。方法采用免疫組織化學法檢測青海省人民醫(yī)院2013年2月至2015年12月手術切除的86例癌組織標本和部分配對的42例癌旁正常肺組織中LRIG1及Fascin-1蛋白的表達水平，探討LRIG1及Fascin-1表達與患者臨床病理特征的關系。結(jié)果Fascin-1在癌組織和癌旁組織中陽性表達率分別為73.2%和14.3%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；LRIG1在癌組織和癌旁組織中陽性表達率分別為55.8%和86.0%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；Fascin-1陽性與陰性患者在腫瘤直徑和縱膈淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；LRIG1陽性與陰性患者在病理類型、臨床分期和縱膈淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較差異也有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論LRIG1及Fascin-1在肺癌組織和癌旁正常肺組織存在差異表達，并與NSCLC的發(fā)生發(fā)展及淋巴轉(zhuǎn)移有關。

非小細胞肺癌；多亮氨酸重復區(qū)免疫球蛋白樣蛋白1；成束蛋白1；免疫組化；臨床病理

肺癌是全世界范圍內(nèi)最為常見的惡性腫瘤，流行病學資料顯示，2013年北美肺癌發(fā)患者數(shù)22萬人，死亡人數(shù)為15萬人[1]。2008年衛(wèi)生部公布的報告顯示，肺癌已成為我國腫瘤致死的第一位原因。但肺癌的發(fā)病原因目前仍未完全明了。肺癌發(fā)生的機制十分復雜，機理仍不完全明了。因此，探尋肺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移的分子機制，為進肺癌進一步治療提供新的思路和新的靶點成為研究熱點[2]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年4月至2015年8月我院收治并手術治療的非小細胞肺癌患者86例為研究對象，采用免疫組織化學法檢測86例癌組織標本和42例癌旁正常肺組織表中LRIG1及Fascin-1蛋白的表達水平。86例非小細胞肺癌患者平均年齡(63.6± 17.0)歲，男性51例，女性35例，Ⅰ/Ⅱ期70例，Ⅲ期16例，腺癌43例，鱗癌36例，大細胞4例，腺鱗癌3例。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑與儀器 石蠟切片機(德國徠卡公司生產(chǎn))、顯微鏡(日本奧林巴斯公司生產(chǎn))、電熱恒溫箱(上海建恒儀器有限公司生產(chǎn))、微波爐，低速離心機(美國貝克曼公司)。鼠抗人LRIG1單克隆抗體(Ab36704)，英國Abcam公司；即用型免疫組織化學法試劑盒，擬購自生工生物工程(上海)股份有限公司；DAB顯示試劑盒，擬購自北京索萊寶科技有限公司。羊抗兔IgG，Santa Cruz公司。

1.2.2 免疫組化檢測 石蠟切片脫蠟水化，蒸餾水浸泡沖洗后行抗原修復，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗后滴加動物非免疫血清，室溫孵育10 min后傾去。滴加一抗，室溫孵育60 min，陰性對照用PBS代替。PBS沖洗干凈后滴加鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液，室溫孵育30 min。PBS沖洗，DAB顯色劑顯色，中性樹膠封片。

1.2.3 陽性結(jié)果判定 Fascin-1蛋白主要定位于細胞胞質(zhì)或胞膜上，呈黃色顆粒狀；LRIG1主要表達于細胞核，棕黃色顆粒。顯微鏡下每張載玻片計數(shù)10個視野，計數(shù)每個視野中細胞總數(shù)及陽性的細胞數(shù)。陽性細胞的百分比判斷標準：0%～5%之間為陰性表達；6%～25%為弱陽性；26%～75%為中度陽性；大于76%為強陽性，弱陽性、中度陽性和強陽性定義為陽性結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SAS12.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 免疫組化結(jié)果 免疫組化染色顯示，F(xiàn)ascin-1蛋白主要定位于細胞胞質(zhì)或胞膜上，呈局灶性或彌漫性黃色顆粒狀(圖1a、1b)。癌組織和癌旁組織中Fascin-1陽性表達率分別為73.2%和14.3%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；LRIG1主要表達于細胞核，棕黃色顆粒，呈彌漫性分布(圖1c、1d)。癌組織和癌旁組織中LRIG1陽性表達率分別為55.8%和86.0%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.2 LRIG1及Fascin-1表達與臨床病理特征的關系 Fascin-1陽性與陰性患者在腫瘤直徑和縱膈淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；LRIG1陽性與陰性患者在病理類型、臨床分期和縱膈淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較差異也有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 LRIG1及Fascin-1表達與臨床病理特征的關系[例(%)]

圖1 Fascin-1和LRIG1在肺癌組織中的表達(×40)

3 討 論

隨著新一代測序技術的發(fā)展及蛋白組學的研究技術的進步，越來越多的生物功能相關蛋白分子被發(fā)現(xiàn)并且被證實其水平與患者個體化特征及預后存在相關性。近年來研究發(fā)現(xiàn)Fascin-1在多種實體腫瘤中呈現(xiàn)高表達或過度表達，如肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等，并與患者個體化特征存在相關性[3-5]。編碼Fascin蛋白的基因定位于人染色體7p22，F(xiàn)ascin-1蛋白是一種細胞骨架蛋白[6]。近年來的研究顯示Fascin-1在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達。Zhang等[7]采用免疫組織化學方法研究Fascin-1在食管癌中的表達，發(fā)現(xiàn)Fascin-1在腫瘤組織中的表達遠高于其在正常食管上皮中的表達，研究者認為Fascin-1的表達程度可以用來幫助判斷正常食管上皮組織向腫瘤組織轉(zhuǎn)變的趨勢。汪睿等[8]檢測了84例肺癌患者Fascin-1表達情況，認為Fascin-表達與年齡、淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期相關。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)Fascin-1蛋白主要定位于細胞胞質(zhì)或胞膜上，呈局灶性或彌漫性黃色顆粒狀。癌組織和癌旁組織中陽性表達率分別為73.2%和14.3%，癌組織陽性率顯著高于癌旁組織，與汪睿等[8]結(jié)果一致。因此，我們認為Fascin-1可能參與了非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展與淋巴轉(zhuǎn)移等病理過程。

LRIG在哺乳動物體內(nèi)廣泛存在，并與多種實體腫瘤發(fā)生有關。葉飛等[9]在膠質(zhì)瘤H4細胞株中過表達LRIG1后發(fā)現(xiàn)，LRIG1能夠明顯降低細胞的增殖能力，提高細胞凋亡比例，降低細胞的穿透人工基底膜的能力。

但關于LRIG1在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義的文獻報道較少，我們采用免疫組合對肺癌組織和癌旁組織中LRIG1蛋白表達水平進行了檢測，結(jié)果顯示癌組織中LRIG1表達水平明顯低于癌旁組織，且癌組織低表達患者臨床分期較晚，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例較高，提示LRIG1可能作為抑癌基因參與了肺癌的發(fā)生和淋巴轉(zhuǎn)移過程。

綜上所述，LRIG1及Fascin-1在肺癌組織和癌旁正常肺組織存在差異表達，并與非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展及淋巴轉(zhuǎn)移有關。進一步對上述蛋白及其表達調(diào)控機制進行深入研究，有望為開發(fā)非小細胞肺癌的靶向治療提供新的靶點。

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[8]汪睿,虞紅珍,王弦,等.Fascin-1在肺癌中的表達及其臨床意義[J].安徽醫(yī)科大學學報,2014,49(5):658-661.

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Clinical significance of LRIG1 and Fascin-1 expression in patients with non-small cell lung cancer.

JI Bao-yan1, CHEN Rong2,LI Hai-Yan1,LI Miao3,GUO Yan4,NAN Min5.1.Department of Oncology,Qinghai Provincial People's Hospital,Xining 810000,Qinghai,CHINA;2.Department of Oncology,Qinghai University Affiliated Hospital,Xining 810016,Qinghai,CHINA;3.Department of Oncology,Qinaghai Cancer Hospital,Xining 810017,Qinghai,CHINA;4. Department of Pathology,Qinghai Provincial People's Hospital,Xining 810000,Qinghai,CHINA;5.Medical Examination Center,Xijing Hospital,Xi'an 710032,Shaanxi,CHINA

ObjectiveTo evaluate the clincial significance of leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1 (LRIG1)and Fascin-1 expression in patients with non-small cell lung cancer(NSCLC).MethodsImmunohistochemical method was used to detect the expression of LRIG1 and Fascin-1 in 86 cases of NSCLC cancer tissue and 42 cases of normal lung tissue from surgical resection in Qinghai Provincial People's Hospital from Feb.2013 to Dec.2015.The relationships between the expression of LRIG1,Fascin-1 and the clinicopathological characteristics of the patients were evaluated.ResultsThe positive expression rate of Fascin-1 in cancer tissue and normal tissue were respectively 73.2% and 14.3%,with statistically significant difference(P＜0.05).The positive expression rate of LRIG1 in cancer tissue and normal tissue were 55.8%and 86.0%,with statistically significant difference(P＜0.05).There were significant differences in tumor diameter and mediastinal lymph node metastasis between Fascin 1 positive and negative patients(P＜0.05). There were significant differences in pathology type,clincial stage and mediastinal lymph node metastasis between LRIG1 positive and negative patients(P＜0.05).ConclusionLRIG1 and Fascin-1 are differentially expressed in lung cancer tissues and adjacent normal lung tissues,which are related to the occurrence and development of NSCLC and lymph node metastasis.

Non-small cell lung cancer;Leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1(LRIG1);Fascin-1; Immuno histochemistry;Clinical pathology

R734.2

A

1003—6350（2016）23—3825—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.23.013

2016-05-19)

李海燕。E-mail：jibaoyan_qh@163.com