趙軻

200例乙型肝炎感染者的HBV耐藥分析

趙軻

目的研究分析醫(yī)院內(nèi)使用核苷(酸)類藥物抗病毒治療乙型肝炎患者體內(nèi)乙型肝炎病毒(HBV)基因耐藥位點變異情況。方法采用焦磷酸測序法分別對100例經(jīng)核苷(酸)類藥物治療1年以上的患者和100例未使用過核苷(酸)類藥物治療的HBV攜帶者進行HBV-DNA P基因區(qū)9個NAS相關(guān)耐藥突變位點進行檢測,分析其耐藥變異檢出率并回顧性分析不同核苷(酸)類藥物的耐藥突變形式,分析HBV逆轉(zhuǎn)錄酶基因變異的發(fā)生率。結(jié)果100例HBV攜帶患者中檢出5例出現(xiàn)耐藥變異,占5%；100例乙型肝炎患者中檢出52例耐藥變異,占52%,檢測結(jié)果顯示乙型肝炎患者的耐藥檢測陽性率明顯高于HBV攜帶患者(P<0.05)。所檢測出的耐藥圖表位點有rtM250V/L、rtN236T、rtA181V/T、rtM/V207I、rtS202G、rtM204I/V、rtT184A/L、rtL180M。所檢出的57例耐藥變異當中,其中有8個位點上的耐藥變異檢出率各不相同,重要的原發(fā)性耐藥位點的rtM204的檢出率最高,高達60%,剩下位點的檢出率分別為rtL180(23/57),rtA181(18/57),rtN236(2/57),rtT184(1/57),rtS202(1/57),rtM250(1/57),rtM/V207(11/57)。結(jié)論隨著乙型肝炎患者治療時間的延長,HBV耐藥又越來越高的情況,52例HBV基因耐藥變異的檢出率與患者的性別、年齡、病毒基因型均無明顯相關(guān)。臨床醫(yī)生應根據(jù)實驗室檢測結(jié)果合理應用核苷(酸)類藥物。

乙型肝炎；核苷(酸)類藥物；耐藥變異

在為慢性乙型肝炎患者開展治療的過程中,國際防治指南建議使用閬中抗病毒治療方法,其中一種是應用聚乙二醇干擾素α-2a、α-2b或普通干擾素開展治療；另外一種是應用核苷酸類與核苷類藥物開展治療,拉米夫定在為患者開展治療的過程中出現(xiàn)了耐藥變異,之后關(guān)于病毒基因型與耐藥位點的研究越來越多,并且還有研究調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒有應用過核苷類藥物治療的HBV感染患者體內(nèi)存在著一定的耐藥位點［1］。本文通過開展相關(guān)研究主要是為了對經(jīng)過核苷類藥物治療的慢性乙型肝炎患者及HBV攜帶者的耐藥位點檢出情況開展分析,以便于對檢出率與患者年齡、性別等因素之間的關(guān)系開展分析,為臨床用藥提供參考?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年10月～2016年5月來本院治療的已確診為慢性乙型肝炎的100例患者(均口服拉米夫定、阿德福韋酯、替比夫定、恩替卡韋單藥、聯(lián)合或者序貫治療1年以上)和門診100例HBV攜帶者(未展開藥物治療)。100例慢性乙型肝炎患者診斷符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準,同時排除其他病因所致肝損害。其中男120例,女80例,年齡15～60歲。

1.2 儀器與試劑 儀器使用美國ABI7500熒光定量PCR分析儀,應用PCR熒光檢測法開展HNV-DNA的提取與檢測,檢測過程中所應用的試劑由深圳匹基生物工程有限公司提供,在實際的開展操作的過程中,應該嚴格依據(jù)說明書上的相關(guān)說明開展操作,應用Hot Start PCR法擴增DNA開展HBV多位點耐藥基因檢測。

1.3 方法 采用焦磷酸測序法分別對100例經(jīng)核苷(酸)類藥物治療1年以上的乙型肝炎患者和100例未使用過核苷(酸)類藥物治療的HBV攜帶者進行HBV-DNA P基因區(qū)9個NAS相關(guān)耐藥突變位點進行檢測,分析其耐藥變異檢出率并回顧性分析不同核苷(酸)類藥物的耐藥突變形式,分析HBV逆轉(zhuǎn)錄酶基因變異的發(fā)生率。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

100例HBV攜帶患者中檢出5例出現(xiàn)耐藥變異,占5%；100例乙型肝炎患者中檢出52例耐藥變異,占52%,檢測結(jié)果顯示乙型肝炎患者的耐藥檢測陽性率明顯高于HBV攜帶患者(P<0.05)。見表1。所檢測出的耐藥圖表位點有 rtM250V/L、rtN236T、rtA181V/T、rtM/V207I、rtS202G、rtM204I/V、rtT184A/L、rtL180M。所檢出的57例耐藥變異當中,其中有8個位點上的耐藥變異檢出率各不相同,重要的原發(fā)性耐藥位點的rtM204的檢出率最高,高達60%,剩下位點的檢出率分別為rtL180(23/57),rtA181(18/57),rtN236(2/57),rtT184(1/57),rtS202(1/57),rtM250(1/57),rtM/V207(11/57)。

表1 100例HBV攜帶者和100例乙型肝炎患者耐藥檢測結(jié)果比較(n,%)

3 討論

HBV病毒變異的幾率非常高,即使患者沒有開展相應的治療,與耐藥變異相關(guān)的幾個突變位點的病毒品種或者是變異病毒都已經(jīng)存在,若患者還沒有開展核苷類藥物的治療,在受到核苷治療患者體內(nèi)變異病毒的傳播之后,也有可能會出現(xiàn)耐藥變異,在當前已有的文獻報道當中,沒有經(jīng)過核苷酸類及核苷類藥物治療的人群的耐藥變異的檢出率在3%～27%［2］。

本次研究中,已經(jīng)能夠確認從未應用核苷酸類及核苷類藥物開展治療的患者也存在HBV變異,有研究調(diào)查項目在為患者開展基線耐藥變異檢測之后再為患者應用相關(guān)治療方案開展治療,發(fā)現(xiàn)能夠有效提升其臨床治療效果,并且能夠降低其耐藥的發(fā)生率。已有文獻報道V173L、L80V、L180M是對HBV復制具有促進作用的單個突變位點,其中最為常見的是應用拉米夫定開展治療之后所產(chǎn)生的突變形式［3］。沒有應用藥物治療的患者各種耐藥位點的檢出率為5%,這與有關(guān)文獻中所報道的自然發(fā)生率一致［4］。

在實際的開展治療過程中,導致患者出現(xiàn)耐藥性的因素多種多樣,其中比較常見的有：耐藥后序貫治療、長期應用NAs、初始藥物選擇不當?shù)?。因?在實際的為患者開展治療的過程中,建議長期應用NAs類藥物、更換藥物或者是初始治療的患者,都應該開展基因耐藥檢測,依據(jù)患者的臨床特點及用藥史,為其合理選擇相應的抗病毒藥物。

［1］林菲,姚貝,胥婕,等.153例慢性HBV感染者核苷和核苷酸類藥物的耐藥變異位點分析.臨床肝膽病雜志,2014,30(3): 269-271.

［2］薛彩花,吳瑋,安俊麗,等.987例乙型肝炎患者HBV-DNA P區(qū)多位點耐藥突變分析及臨床意義.胃腸病學和肝病學雜志2014,23(10):1187-1190.

［3］劉淑榮,趙文靜,劉薇,等.313例經(jīng)核苷酸類似物治療的慢性乙型肝炎患者HBV 基因型及耐藥變異分析.世界最新醫(yī)學信息文摘,2015,15(11):3-4.

［4］劉妍,王春梅,紀冬,等.1121例慢性乙型肝炎患者HBV反轉(zhuǎn)錄酶區(qū)的耐藥突變分析(英文).解放軍醫(yī)學雜志,2009,34(6): 659-662.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.20.098

2016-09-19］

454000 焦作市第三人民醫(yī)院