趙朋月 周會(huì)行 李軍紅

·臨床醫(yī)學(xué)·

Ki-67、P53、LAT1在食管癌及癌前病變組織中的表達(dá)及其臨床意義

趙朋月 周會(huì)行 李軍紅

目的分析增殖細(xì)胞核抗原Ki-67、腫瘤抑制基因P53、L型氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(LAT1)在食管癌及癌前病變組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法采用免疫組化SP法測(cè)定食管癌組織(31例,食管癌組)、癌前病變組織(65例,癌前病變組)、食管癌或癌前病變組織周圍的正常組織(22例,正常組)中Ki-67、P53、LAT1的表達(dá),并分析其相關(guān)性。結(jié)果癌前病變組、食管癌組Ki-67(49.2%、83.9%)、P53(32.3%、67.7%)、LAT1(36.9%、77.4%)陽性表達(dá)率均明顯高于正常組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),食管癌組Ki-67、P53、LAT1陽性表達(dá)率明顯高于癌前病變組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)等級(jí)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn) Ki-67、P53、LAT1在食管癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.319,P<0.05)。結(jié)論Ki-67、P53和LAT1聯(lián)合檢測(cè)可能對(duì)食管癌早期診斷、篩選食管癌癌前高危個(gè)體具有積極作用。

食管癌；癌前病變組織；增殖細(xì)胞核抗原；腫瘤抑制基因；L型氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體1

食管癌是消化道常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病機(jī)制是一個(gè)多種基因異常表達(dá)參與的過程。研究表明,細(xì)胞增殖異常、癌相關(guān)基因突變及細(xì)胞凋亡過程異常均參與了食管癌的發(fā)生和進(jìn)展［1］。另外,腫瘤的增長需消耗大量的氨基酸。LAT1是一種可轉(zhuǎn)運(yùn)較大的中性氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)載體,它不受鈉離子濃度的影響。近期有文獻(xiàn)報(bào)道,LAT1高表達(dá)與人多種腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展有關(guān),但其在食管癌中的表達(dá)少見報(bào)道［2］。本研究收集31例食管癌患者及65例癌前病變患者,采用免疫組化SP法測(cè)定收集的標(biāo)本中LAT1基因、腫瘤抑制基因P53和增殖細(xì)胞核抗原Ki-67的蛋白表達(dá)水平,以探討食管癌的發(fā)生機(jī)制,以尋找一種有效的食管癌早期診斷和預(yù)后評(píng)估的指標(biāo),具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年5月～2015年4月在本院接受食管癌手術(shù)切除及胃鏡活檢檢查的患者96例,其中食管癌31例(食管癌組),癌前病變65例(癌前病變組)；另外采集食管癌或癌前病變組織周圍的正常組織標(biāo)本22例作為正常組。上述患者未接受術(shù)前放化療,均經(jīng)病理檢查證實(shí)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑 選用鼠抗人Ki-67、P53單克隆抗體及免疫組化試劑盒,均由上海麥倉生物科技有限公司提供,兔抗人LAT1抗體由上海盈公試劑有限公司提供。

1.2.2 SP實(shí)驗(yàn)方法 用4%甲醛固定標(biāo)本,石蠟包埋切片,蘇木精-伊紅染色,4 μm連續(xù)切片,脫蠟后用SP染色,采用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,蘇木素復(fù)染、脫水,中性樹膠封固,嚴(yán)格根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 染色結(jié)果判定 Ki-67、P53蛋白陽性染色定位于細(xì)胞核,染色呈胞核棕黃色或棕褐色顆粒為陽性信號(hào)。LAT1分布于包膜和胞漿,染色后包膜和胞漿呈棕黃色。由2名有經(jīng)驗(yàn)病理科醫(yī)生進(jìn)行盲法閱片。各切片隨機(jī)選5個(gè)高倍視野(×400),每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞,取5個(gè)視野的陽性細(xì)胞的平均值為細(xì)胞陽性率。根據(jù)細(xì)胞陽性率及顯色深度判斷：細(xì)胞陽性率<10%為陰性(-)；10%～25%為弱陽性(+),顯色淺,顆粒細(xì)；26%～50%為中度陽性(++),顯色較深；>50%為強(qiáng)陽性(+++),顯色深,顆粒粗。由2名有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生分別進(jìn)行盲法判讀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)；用Spearman等級(jí)檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種標(biāo)本Ki-67、P53、LAT1陽性表達(dá)情況比較 正常組無Ki-67、P53、LAT1的陽性表達(dá),癌前病變組、食管癌組Ki-67、P53、LAT1陽性表達(dá)率均明顯高于正常組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),食管癌組Ki-67、P53、LAT1陽性表達(dá)率明顯高于癌前病變組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 Ki-67、P53、LAT1 在食管癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 經(jīng)等級(jí)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn) Ki-67、P53、LAT1在食管癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.319,P=0.000<0.05)。見表2。

表1 三種標(biāo)本Ki-67、P53、LAT1陽性表達(dá)情況比較［n(%)］

表2 Ki-67、P53、LAT1在食管癌組織中表達(dá)的相關(guān)性(n)

3 討論

食管癌的發(fā)生及進(jìn)展是由許多蛋白一起作用的結(jié)果,其與有絲分裂過程的激活、凋亡過程的失活等有關(guān)［3］。Ki-67是目前使用最廣的標(biāo)記細(xì)胞增殖活性的指標(biāo),其標(biāo)記的增殖指數(shù)可準(zhǔn)確反映細(xì)胞的增殖活性,是癌變較好的預(yù)測(cè)指標(biāo)。P53作為抑癌基因之一,它通過阻滯G1/G0期細(xì)胞進(jìn)入S期,抑制細(xì)胞增殖而起到抗腫瘤作用［4-7］。在胃癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌等惡性腫瘤中,約有超一半患者存在P53基因突變。突變型P53蛋白凋亡時(shí)間延長,其在胞核內(nèi)過量沉積,故采用SP法能檢出。李昀等［4］報(bào)道,P53表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞分化、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。LAT1是一種可溶性載體,能影響mTOR通路參與細(xì)胞的增殖,其高表達(dá)與肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān),且有研究證實(shí)［5］,LAT1作為miR-126的靶基因參與了肺癌的侵襲及轉(zhuǎn)移過程。

本研究發(fā)現(xiàn),正常食管黏膜組織中無Ki-67、P53和LAT1的陽性表達(dá),而在癌前病變組織中及食管癌組織中均有較高的陽性表達(dá),尤其是食管癌組織中的表達(dá)率更高,Ki-67的表達(dá)水平與組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān),Ki-67水平越高,說明細(xì)胞增殖活性越高。P53基因及LAT1基因表達(dá)上調(diào)在食管癌的發(fā)生和進(jìn)展中起著重要作用。同時(shí)結(jié)果還顯示,三種基因在食管癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān),表明Ki-67表達(dá)水平的上調(diào)能明顯增強(qiáng)食管癌的增殖能力,且此過程可能同時(shí)存在P53基因和(或)LAT1基因的表達(dá)上調(diào),從而更加增強(qiáng)細(xì)胞的增殖與分化或抑制凋亡,使得食管癌的病情惡化。

綜上所述,Ki-67、P53和LAT1具有作為食管癌治療特異性靶點(diǎn)的潛力,其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)食管癌早期診斷、篩選食管癌癌前高危個(gè)體具有積極作用。

［1］陳建洲,陳創(chuàng)珍,李德銳,等.非手術(shù)治療食管癌臨床分期的驗(yàn)證.中國腫瘤,2012,21(5):374-378.

［2］Hayashi K,Jutabha P,Endou H,et al.LAT1 is a critical transporter of essential amino acids for immune reactions in activatedhuman T cells.J Immunol,2013,191(8):4080-4085.

［3］王軍,景紹武,于金明.食管癌分子靶向治療研究進(jìn)展.中華放射腫瘤學(xué)雜志,2013,22(5):39-42.

［4］李昀,張軍航,安軍,等.PLCE1調(diào)控p53誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.中國藥理學(xué)通報(bào),2015,31(1):82-86.

［5］杜博,魏海峰,趙雪梅,等.Ki-67、P53、LAT1在食管癌及癌前病變組織中的表達(dá)及其臨床意義.中國免疫學(xué)雜志,2014(11): 1543-1545.

［6］徐文鑫,楊俊榮,王秋實(shí),等.Ki-67、p53、 Survivin在食管癌及癌前病變組織中的表達(dá)意義.中國醫(yī)師雜志,2015,17(2): 224-226.

［7］張沛剛,陳永宏,陳鋼,等.Ki-67、c-myc、p53在食管癌中的表達(dá)及其意義.腫瘤研究與臨床,2014,26(8):544-546.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.19.022

2016-09-05］

471000 河南鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院病理科