金海燕 鄧卓

·論著·

MVD在子宮內膜癌變過程中的表達及意義

金海燕 鄧卓

目的研究微血管密度(MVD)在子宮內膜癌變過程中的表達及意義,探討血管生成對子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展的影響。方法應用CD105單克隆抗體,通過免疫組織化學SP法標記正常增生期子宮內膜組(20例)、子宮內膜不典型增生組(20例)及子宮內膜腺癌組(26例)中的血管內皮細胞,再結合圖像分析技術進行MVD計數(shù)。結果CD105-MVD值在正常增生期子宮內膜組(11.35±2.37)、子宮內膜不典型增生組(22.57±4.92)及子宮內膜腺癌組(27.66±2.31)中逐漸遞增,三組比較差異具有統(tǒng)計學意義(F=137.969,P<0.01)；組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。結論腫瘤血管形成參與了子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉移的過程。

子宮內膜腺癌；微血管密度；CD105

子宮內膜癌(endometrial carcinoma)是發(fā)生于子宮內膜的一組上皮性惡性腫瘤,以腺癌最常見,近年來發(fā)病有年輕化的趨勢［1］。許多實體腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移均依賴新生血管的形成,因此,本研究采用免疫組織化學方法及圖像分析技術檢測CD105標記的微血管密度(microvessel density,MVD)在正常增生期子宮內膜、子宮內膜不典型增生及子宮內膜癌中的表達,以探討血管生成對子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展的影響。

1 材料與方法

1.1 研究材料 隨機選取26例子宮內膜腺癌石蠟標本作為子宮內膜腺癌組,同期20例子宮內膜不典型增生作為子宮內膜不典型組,20例正常增生期子宮內膜作為正常增生期子宮內膜組。術前均未接受放療、化療及激素治療。

1.2 試劑及方法 鼠抗人CD105單克隆抗體(1∶50稀釋)及免疫組織化學SP試劑盒購自邁新生物技術有限公司。標本經(jīng)石蠟包埋、切片后用免疫組織化學SP法檢測CD105的表達,采用DAB同步浸染顯色法使所有切片顯色時間相同［2］。設陽性對照及陰性對照。

1.3 圖像分析 CD105主要定位于血管內皮細胞的細胞膜,按照Weidner法［3］進行MVD計數(shù),先在低倍鏡下選取血管最豐富區(qū)(即“hot spot”),再在400倍視野下分別計數(shù)MVD,每例計數(shù)5個視野,求其均值。每個與鄰近微血管明顯分離的陽性染色的血管內皮細胞或血管內皮細胞簇都視為獨立的微血管。而直徑>8個紅細胞的血管、有厚的平滑肌的血管及硬化區(qū)的血管不在計數(shù)范圍內。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,兩樣本均數(shù)間比較采用獨立樣本t檢驗,多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析,多樣本均數(shù)間兩兩比較采用LSD-t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

CD105標記的MVD(CD105-MVD)值在正常增生期子宮內膜組、子宮內膜不典型增生組及子宮內膜腺癌組中逐漸遞增,三組比較差異具有統(tǒng)計學意義(F=137.969,P<0.01)；子宮內膜腺癌組與正常增生期子宮內膜組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),子宮內膜腺癌組與子宮內膜不典型增生組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),子宮內膜不典型增生組與正常增生期子宮內膜組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。CD105主要表達于血管內皮細胞的細胞膜和細胞質,細胞膜著色深于細胞質,把血管內皮細胞著色為棕黃色(見圖1,圖2,圖3)。見表1。

表1 CD105-MVD在三組中的表達(±s)

表1 CD105-MVD在三組中的表達(±s)

注：與正常增生期子宮內膜組比較,aP<0.05；與子宮內膜不典型增生組比較,bP<0.05

組別 例數(shù) CD105-MVD F P正常增生期子宮內膜組 20 11.35±2.37 137.969 <0.01子宮內膜不典型增生組 20 22.57±4.92a子宮內膜腺癌組 26 27.66±2.31ab

圖1 CD105-MVD在正常增生期子宮內膜中的表達(免疫組織化學SP法,×400)

圖2 CD105-MVD在子宮內膜不典型增生中的表達(免疫組織化學SP法,×400)

圖3 CD105-MVD在子宮內膜腺癌中的表達(免疫組織化學SP法,×400)

3 討論

新生的微血管是惡性腫瘤浸潤和轉移的第一站,微血管數(shù)量越多,腫瘤細胞進入血液循環(huán)的機會就越大［4］。腫瘤細胞在血管化之前極少能進入血液循環(huán),因此血管形成是腫瘤發(fā)展和轉移的關鍵,并由此提出了抗血管生成治療理論［5］。近年來研究發(fā)現(xiàn),子宮內膜癌的發(fā)生、發(fā)展過程中有血管生成,許多血管生長因子在子宮內膜癌中形成復雜的調控網(wǎng)絡,影響著腫瘤內部的微血管密度,與子宮內膜癌的轉移、復發(fā)及預后相關［6］。

目前多采用MVD計數(shù)的方法來檢測腫瘤內的血管生成。MVD是指對腫瘤血管密集部位所進行的微小血管計數(shù),MVD作為腫瘤血管生成評估的金標準,與腫瘤的惡性行為和復發(fā)轉移密切相關。研究人員在對乳腺癌、膀胱移行細胞癌、前列腺癌等惡性腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)：MVD越低的患者預后越好。在對子宮內膜癌患者的隨訪中發(fā)現(xiàn),MVD少的患者5年生存率顯著高于MVD大的患者［7］。Guet等［8］對子宮內膜癌及子宮內膜增生癥血管內皮細胞進行研究,發(fā)現(xiàn)子宮內膜癌組的MVD高于子宮內膜復雜型增生組,而子宮內膜復雜型增生組又高于子宮內膜單純型增生組和正常對照組。Erdem等［9］亦證實MVD與病理分級、肌層浸潤和淋巴、血管浸潤相關,MVD是子宮內膜癌患者的一個獨立預后因素。

本文研究結果顯示,CD105主要表達于血管內皮細胞的細胞膜和細胞質,細胞膜著色深于細胞質,把血管內皮細胞著色為棕黃色。CD105標記的MVD(CD105-MVD)值在正常增生期子宮內膜組、子宮內膜不典型增生組及子宮內膜腺癌組中逐漸遞增,三組比較差異具有統(tǒng)計學意義(F=137.969,P<0.01)；子宮內膜腺癌組與正常增生期子宮內膜組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),子宮內膜腺癌組與子宮內膜不典型增生組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),子宮內膜不典型增生組與正常增生期子宮內膜組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

綜上所述,CD105-MVD值在正常增生期子宮內膜、子宮內膜不典型增生及子宮內膜腺癌中逐漸上升,提示子宮內膜癌血管生成活躍,血管生成參與了子宮內膜癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉移。

［1］Stubert J,Gerbe B.Current issues in the diagnosis and treatment of endometrial carcinoma.Geburtshilfe Frauenheilkd,2016,76(2): 170-175.

［2］廖劍輝.DAB同步浸染顯色法在免疫組織化學中的應用.暨南大學學報,1996,17(1):55-56.

［3］Weidner N,Folkman J,Pozza F,et al.Tumor angiogenesis: a new significant and independent prognostic indicator in early stage breast careinoma.Cancer,1992,84(24):1875-1887.

［4］Jia P,Cai H,Liu X,et al.Long non-coding RNA H19 regulates glioma angiogenesis and the biological behavior of gliomaassociated endothelial cells by inhibiting microRNA-29a.Cancer Lett,2016,6(16):30473-30476.

［5］Ye W.The complexity of translating anti-angiogenesis therapy from basic science to the clinic.Dev Cell,2016,37(2):114-125.

［6］Wang J,Taylor A,Showeil R,et al.Expression profiling andsignificance of VEGF-A,VEGFR2,VEGFR3 and related proteins in endometrial carcinoma.Cytokine,2014,68(2):94-100.

［7］Simionescu C,Margaritescu C,Stepan A,et al.Tumor angiogenesis,macrophages and mast cell microdensities in endometrioid endometrial carcinoma.Oncol Lett,2013,6(2):415-420.

［8］Gu?et G,Costi S,Laz?r E,et al.Expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) and assessment of microvascular density with CD34 as prognostic markers for endometrial carcinoma.Rom J Morphol Embryol,2010,51(4):677-682.

［9］Erdem O,Erdem M,Erdem A,et al.Expression of vascular endothelial growth factor and assessment of microvascular density with CD 34 and endoglin in proliferative endometrium,endometrial hyperplasia,and endometrial carcinoma.Int J Gynecol Cancer,2007,17(6):1327-1332.

Expression and significance by MVD in endometrial cancerization

JIN Hai-yan,DENG Zhuo.Department of Obstetrics and Gynecology,Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510260,China

ObjectiveTo research expression and significance by microvessel density(MVD) in endometrial cancerization,and to investigate influence by angiogenesis on occurrence and development of endometrial carcinoma.MethodsVascular endothelial cells in endometrium of normal proliferative stage group(20 cases),atypical hyperplasia of endometrium group(20 cases),and endometrial adenocarcinoma group(26 cases) were marked by CD105 monoclonal antibody through immunohistochemical SP method.Further MVD count was made in combination with image analysis technique.ResultsCD105-MVD value was gradually decreased from(11.35±2.37) in endometrium of normal proliferative stage group,to(22.57±4.92) in atypical hyperplasia of endometrium group and(27.66±2.31) in endometrial adenocarcinoma group.Their difference had statistical significance across the three gorups(F=137.969,P<0.01),and the differences between each two groups all had statistical significance(P<0.01).ConclusionTumor angiogenesis is involved in occurrence,development,infiltration and metastasis of endometrial carcinoma.

Endometrial adenocarcinoma; Microvessel density; CD105

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.19.001

2016-08-22］

廣州市衛(wèi)生局醫(yī)藥衛(wèi)生科技項目(廣州市中醫(yī)藥科技項目) 資助(項目編號：20142A011022)

510260 廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科