何苗 盧紅明 范桂蓮 孫宇 許凱

乳腺癌組織中免疫共刺激分子B7-H1與受體酪氨酸激酶EphA4蛋白的表達及意義

何苗 盧紅明 范桂蓮 孫宇 許凱

目的探討乳腺癌組織中免疫共刺激分子B7-H1與受體酪氨酸激酶EphA4蛋白的表達及意義。方法82例病理診斷為乳腺癌患者,乳腺癌TNM分期Ⅰ期23例、Ⅱ期38例、 Ⅲ期15例、Ⅳ期6例,分析B7-H1、EphA4蛋白與乳腺癌TNM分期的相關(guān)性。以同期良性乳腺病變55例患者為對照,觀察B7-H1、EphA4蛋白的陽性率。結(jié)果與乳腺良性病變患者相比,乳腺癌患者B7-H1陽性率高(P＜0.05)、EphA4蛋白陽性率低(P＜0.05)。Spearman分析發(fā)現(xiàn)B7-H1與TNM分期呈正相關(guān)(r=0.4682,P＜0.05),EphA4蛋白與TNM分期呈負相關(guān)(r=-0.3402,P＜0.05)。結(jié)論B7-H1促進腫瘤細胞免疫逃逸、EphA4蛋白抑制癌細胞活化增殖能力降低,均參與了乳腺癌病理發(fā)展,均可作為乳腺癌診斷和治療的潛在靶點。

乳腺癌；病理；免疫共刺激分子B7-H1；受體酪氨酸激酶EphA4蛋白；分期

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病機制尚不明確。程琳等［1］研究認為免疫系統(tǒng)參與的癌細胞的生長和發(fā)展。目前,靶向治療和免疫治療成為了乳腺癌患者繼手術(shù)、放療、化療只有的全新的治療模式［1］。探究乳腺癌癌變組織內(nèi)的免疫物質(zhì),是靶向治療與免疫治療發(fā)展的基石。本院對乳腺癌患者進行免疫共刺激分子B7-H1與受體酪氨酸激酶EphA4蛋白免疫組化,并與良性乳腺病變患者比較,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年2月～2016年2月收治的病理診斷為乳腺癌82例患者,年齡25～83歲,平均年齡(48.8± 12.4)歲；82例乳腺癌患者按照乳腺癌TNM分期可分為Ⅰ級23例、Ⅱ級38例、Ⅲ級15例、Ⅳ級6例。同期良性乳腺病變55例患者,年齡27～79歲,平均年齡(45.9±11.6)歲。所有病理標(biāo)本均為術(shù)中所得,術(shù)前均未進行放療、化療及內(nèi)分泌治療等輔助治療方法。兩類患者年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 組織芯片制作 用10%中性福爾馬林固定標(biāo)本≤24 h,再行乙醇脫水、二甲苯透明30 min。常規(guī)石蠟包埋。于顯微鏡下選擇6個具有代表性的區(qū)域,均分2份分別送B7-H1免疫組化和EphA4蛋白免疫組化。用組織打孔陣列儀打孔,鉆取組織柱。最后將石蠟標(biāo)本放入65℃溫箱15 min,待石蠟標(biāo)本為半融狀態(tài)下取出,常溫冷卻后放置于冰箱中,溫度設(shè)置為4℃。

1.3 B7-H1和EphA4蛋白的免疫組化 將組織芯片切成厚度為3 μm的切片,HE染色獲得無遺漏點的樣本。免疫組化采用SP法,B7-H1選用NOVUS公司生產(chǎn)的兔抗人B7-H1單克隆抗體(1∶50配比)。EphA4蛋白選用試劑盒按說明執(zhí)行SP法。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn) 每個組織芯片在400倍顯微鏡下選擇代表性視野5個,每個視野含腫瘤細胞100個。按照染色程度評分：0分為基本不染色,1分為淡黃色,2分為棕黃色,3分為棕褐色。0分為陰性結(jié)果,1～3分為陽性結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以(±s)表示,采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗；相關(guān)性采用Spearman分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

82例乳腺癌患者組織切片結(jié)果顯示,B7-H1陽性率51.22%(42/82),EphA4蛋 白 陽 性 率58.54%(48/82)。55例乳腺良性病變患者組織切片結(jié)果顯示,B7-H1陽性率21.82%(12/55),EphA4蛋白陽性率89.09%(49/55)。與乳腺良性病變患者相比,乳腺癌患者B7-H1陽性率高(χ2=11.9168,P=0.0006＜0.05)、EphA4蛋 白 陽 性 率 低 (χ2=14.8666,P=0.0001＜0.05)。82例乳腺癌患者不同TNM分期B7-H1、EphA4蛋白評分見表1。Spearman分析發(fā)現(xiàn)B7-H1與TNM分期呈正相關(guān)(r=0.4682,P=0.0001＜0.05),EphA4蛋白與TNM分期呈負相關(guān)(r=-0.3402,P=0.0018＜0.05)。

表1 82例乳腺癌患者TNM分期的B7-H1、EphA4蛋白評分分布(n)

3 討論

B7-H1可通過調(diào)節(jié)E-鈣粘蛋白和上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Slug和Twist從而發(fā)揮抗炎作用,即在炎癥反應(yīng)中B7-H1發(fā)揮抑制免疫作用。T細胞受體與抗原肽的第一信號以及共刺激分子的第二信號所構(gòu)成的雙信號系統(tǒng)引發(fā)的T細胞的活化在腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用［2］。而在腫瘤細胞表面和腫瘤微環(huán)境中B7-H1作為負性共刺激分子,可通過與T細胞表面的PD-1受體結(jié)合［3］,抑制抗原特異性T細胞活化、生長、成熟及分泌細胞因子等過程,降低T細胞介導(dǎo)的腫瘤細胞免疫應(yīng)答作用［4］,從而使得腫瘤細胞免于免疫細胞的損害。本研究結(jié)果顯示B7-H1與TNM分期呈正相關(guān)(r=0.4682,P＜0.05),結(jié)果與洪蔭等［3］研究報道相似。受體酪氨酸激酶因參與神經(jīng)細胞間信號傳遞及軸突發(fā)育而逐漸被人發(fā)現(xiàn),Eph受體是近幾年發(fā)現(xiàn)的酪氨酸蛋白激酶受體,與Ephrin配體共同組成受體酪氨酸激酶系統(tǒng)［5］。酪氨酸激酶受體為RET基因及Eph基因編碼,參與甲狀腺癌、乳腺癌和肺癌的發(fā)生、發(fā)展及局部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移［6］。已被證實的EphA2表達水平與乳腺癌組織學(xué)分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)［7］。EphA4蛋白可促進神經(jīng)損傷時軸突的修復(fù),在肺腺癌中低水平表達,提示其可能具有抑癌作用。孫岳軍等［8］研究發(fā)現(xiàn)EphA4蛋白丟失與乳腺癌分級、分期及Ki-67表達呈正相關(guān),與本研究結(jié)果中EphA4蛋白表達水平與TNM分期呈負相關(guān)(r=-0.3402,P＜0.05)結(jié)果一致。

綜上所述,B7-H1促進腫瘤細胞免疫逃逸、EphA4蛋白抑制癌細胞活化增殖能力降低,均參與了乳腺癌病理發(fā)展,均可作為乳腺癌診斷和治療的潛在靶點。

［1］程琳,彭媛,王殊.乳腺癌的生物治療進展.中華乳腺病雜志(電子版),2013,7(3):7-14.

［2］李曉鳳,巴彩霞,袁海清,等.結(jié)直腸癌中B7-H1表達的意義.中國臨床保健雜志,2013,16(6):647-649.

［3］洪蔭,涂健,朱旬,等.免疫共刺激分子B7-H1在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2015,31(11): 1232-1235.

［4］鄭云燕,陳陸俊,徐斌,等.皮膚惡性腫瘤組織中B7-H1的表達及臨床意義.臨床腫瘤學(xué)雜志,2014,19(3):221-225.

［5］常志泳,趙建寧,包倪榮.Eph-ephrin雙向信號功能的研究進展.中國病理生理雜志,2013,29(3):560-564,570.

［6］孫冀,苗素生,裴榮.RET基因在腫瘤中的研究現(xiàn)狀和展望.實用腫瘤學(xué)雜志,2015,29(5):467-470.

［7］白山,高雅慧,李雙齊,等.Eph受體酪氨酸激酶A2和SIAH2在乳腺癌中的表達及其臨床意義.中華實驗外科雜志,2014,31(9):2015-2016.

［8］孫岳軍,徐潔,陸敏,等.受體酪氨酸激酶EphA4蛋白在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2015,31(11):1236-1238,1242.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.12.011

2016-04-01］

163311 黑龍江省大慶油田總醫(yī)院病理科