陳輯 易學(xué)華 羅瑞升 勞碧蘭 陳連清

·臨床醫(yī)學(xué)·

Fas信號通路在誘導(dǎo)的胃癌細胞EMT過程中的侵襲及轉(zhuǎn)移

陳輯 易學(xué)華 羅瑞升 勞碧蘭 陳連清

目的對Fas信號通路在誘導(dǎo)胃癌細胞EMT過程的侵襲以及轉(zhuǎn)移情況進行分析,從而為相關(guān)治療措施提供依據(jù)。方法35例胃癌患者,利用相關(guān)技術(shù)對患者胃癌細胞EMT過程中Fas信號的通路的侵襲和轉(zhuǎn)移情況進行分析。結(jié)果Fas在誘導(dǎo)胃癌細胞EMT過程中扮演重要的角色,ERK1/2信號通路能夠促進Fas誘導(dǎo)胃癌細胞EMT的成功率。結(jié)論Fas信號通路能夠誘導(dǎo)胃癌細胞出現(xiàn)EMT現(xiàn)象,相關(guān)人員必須加強對其的重視。

Fas信號通路；EMT；胃癌細胞

Fas信號通路在誘導(dǎo)的胃癌細胞EMT過程中有著極為重要的作用［1,2］,相關(guān)的研究人員必須加強對其的重視,加強對其的研究水平的提升,這對于胃癌細胞增殖與分化原理的掌握極為重要。本文對其進行研究,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2014年1月～2015年12月收治35例胃癌患者為研究對象,其中男20例,女15例,所有患者納入前均被確診為胃癌,且進行了不同程度的化療。

1.2 方法 對35例胃癌組織進行標本取樣,所取組織均距癌組織＜2cm,采集組織后進行固定處理,在固定后在對其進行包埋,為下一步試驗的進行創(chuàng)造條件。本次研究中研究的核心是對CAC1基因?qū)τ谖赴〦MT的誘導(dǎo)作用進行分析,因此在獲得胃癌組織后,研究人員需對兩者的相關(guān)數(shù)據(jù)進行測定。在對CAC1以及EMT的蛋白表達進行測定時還會運用到免疫組化法,這種方法作用的發(fā)揮需要應(yīng)用到SP方法,其要以相關(guān)試劑說明為依據(jù)對DAB顯色狀況進行確定。在對EMT、CAC1相關(guān)基因mRNA水平進行測定時所使用的方法為原位雜交法,在測定時要先根據(jù)基因特性對探針的合成,在對CAC1基因序列進行設(shè)計時要以CAC1編碼框序列為依據(jù),所設(shè)計的探針的長度要保持在46 bp。在對玻片進行處理過程中所采用的處理試劑為多聚賴氨酸。在對切片進行研究時,需要對切片進行脫蠟至水處理,在脫蠟過程完成后,用3%H2O2在室溫的狀態(tài)下對標本進行10 min的處理,從而達到內(nèi)源性過氧化物酶滅活的目的。在對核酸片段進行暴露時需要在切片上加稀釋的胃蛋白酶,稀釋溶液一般選擇3%檸檬酸,在反應(yīng)30 min后,選擇洗滌液0.5 M 磷酸鹽緩沖液(PB)以及蒸餾水,對其進行洗滌處理。在對相關(guān)因素進行雜交之前要對其進行預(yù)雜交處理,雜交完成后要對其雜交標本進行洗滌。

在對胃癌細胞株AGA培養(yǎng)時,所使用的培養(yǎng)基要含有10%的小牛血清,在培養(yǎng)基中加100 g/ml青霉素以及100 g/ml的鏈霉素,把培養(yǎng)基放在37℃的環(huán)境下進行培養(yǎng),然后將其放入濕度保持在5%CO2的培養(yǎng)箱中。在試驗進行之前用無血清培養(yǎng)基替換含10%胎牛血清(FBS)的培養(yǎng)基,FasT實驗濃度應(yīng)該控制在12.5 ng/ml。在進行免疫印跡進行探尋的過程中,所選取的AGS細胞應(yīng)該處于生長期,對細胞總蛋白進行提取,從而使得蛋白濃度可以測量。對蛋白進行電泳處理,電泳時采取的凝膠類型為10%SDS不連續(xù)聚丙烯酞胺凝膠。電泳完成之后對其進行轉(zhuǎn)膜、封閉處理。在濾膜洗膜后,對其進行增強化學(xué)發(fā)光法(ECL)以及X片顯影處理,并對結(jié)果進行處理。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,采用方差分析；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Fas在誘導(dǎo)胃癌細胞EMT過程中扮演著重要的角色,此外ERK1/2信號通路能夠促進Fas誘導(dǎo)胃癌細胞EMT的成功率。消化系統(tǒng)腫瘤細胞株流式細胞儀檢測結(jié)果見表1,結(jié)果顯示： CAC1在胃癌細胞的表達水平高于其他細胞中的表達水平,其所存在的主要位置為細胞的細胞漿中,其在癌周圍正常的組織中表達水平不高,通過檢測發(fā)現(xiàn)其在正常組織中僅存在于間質(zhì)中。不同TNM分期及組織類型CAC1陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。不同梯度濃度sFasL和不同時間的AGS細胞數(shù)量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

表1 35例患者實驗室消化系統(tǒng)腫瘤細胞株流式細胞儀檢測結(jié)果

表2 35例患者CAC1在胃癌組織和胃正常組織中的表達比較(n,%)

表3 35例患者不同梯度濃度sFasL和時間AGS細胞數(shù)量(±s)

表3 35例患者不同梯度濃度sFasL和時間AGS細胞數(shù)量(±s)

注：不同梯度濃度sFasL和時間的AGS細胞數(shù)量比較,P＜0.05

sFasL濃度(ng/ml) 1 d 2 d 3 d 合計 F P對照 2.84±0.24 3.38±0.43 10.12±1.32 5.42±3.57 40.958 ＜0.05 12.5 3.12±0.31 3.17±0.04 10.50±0.52 5.51±3.87 635.185 ＜0.01 24.0 3.64±0.21 2.96±0.32 6.98±0.51 4.52±1.78 137.123 ＜0.01 50.0 3.78±0.31 7.52±0.27 4.53±2.34 924.354 ＜0.01合計 3.26±0.38 2.98±0.54 7.32±0.32 4.97±2.95 598.345 ＜0.01F13.657 7.812 17.365 14.214 18.645P＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

3 討論

Fas信號通路在胃癌細胞的生長過程中扮演著極為重要的角色,這是因為Fas信號通路的形成可以在一定程度上使得細胞凋亡得以實現(xiàn)［3,4］。本文研究發(fā)現(xiàn),胃癌心腫瘤的分化與轉(zhuǎn)移的實現(xiàn)也和Fas信號通路有著較為密切的聯(lián)系,通過試驗發(fā)現(xiàn)Fas信號通路可以促進細胞活性的提升,但是具體作用發(fā)揮的原理還待探究。為了能夠明確Fas信號通路在胃癌細胞的轉(zhuǎn)移以及增殖方面所起的作用,羅柏花［5］研究建立了EMT和MET模型,這兩種模型的建立可以對胃癌原發(fā)病灶如何實現(xiàn)對轉(zhuǎn)移灶進行擴散的原理進行明。

本研究發(fā)現(xiàn),CAC1在胃癌中表達較為突出,在整個胃癌細胞系中,CAC1 mRNA的水平均高于其他細胞系,此外胃癌細胞系中的CAC1 mRNA含量水平遠高于胃黏膜細胞系中。CAC1的表達并不是一成不變的,其在細胞周期變化的過程中也會以動態(tài)的形式所存在。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),CAC1出現(xiàn)的時期為細胞的G0時期,并隨著細胞周期的不斷推進而以上升的狀態(tài)所存在,其水平表達最高的時期為細胞的S期。其開始第一次降低的時期為S中期,在此升高的時期為S/G2期,整個過程中CAC1表達水平最低時期為G0時期［6,7］。上述研究表明CAC1在胃癌細胞系中表達水平呈現(xiàn)較高的狀態(tài),并且其參與細胞增殖過程,通過其表達的實現(xiàn)也能夠使得細胞周期調(diào)控得以實現(xiàn)。此外CAC1也能夠?qū)毎麖腉1期向S期轉(zhuǎn)換過程進行調(diào)節(jié)。CAC1對于胃癌細胞EMT的誘導(dǎo)也存在一定的作用,相關(guān)研究者發(fā)現(xiàn)在胃癌細胞系中以及胃黏膜細胞系中均能夠檢測出CAC1 mRNA的表達,且胃癌細胞中所含有此項蛋白表達水平處于較高水平,因此可以推斷CAC1在胃癌細胞AGS細胞系細胞周期的促進上有著一定的積極意義。

［1］劉寧,孫黎光,于卉影,等.細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶在人胃癌細胞Fas介導(dǎo)的凋亡信號通路中的作用.中華腫瘤雜志,2005,27(4):201-203.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.12.010

2016-03-29］

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