蔣　曦，　田福榮，　趙應(yīng)征

(1寧波明州醫(yī)院藥劑科，浙江 寧波 315100；2溫州醫(yī)科大學(xué)， 浙江 溫州 325035)

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小鼠慢性酒精中毒及戒斷過程中抑郁樣行為的改變及其共病機(jī)制*

蔣曦1 △，田福榮2，趙應(yīng)征2

(1寧波明州醫(yī)院藥劑科，浙江 寧波 315100；2溫州醫(yī)科大學(xué)， 浙江 溫州 325035)

[摘要]目的： 研究小鼠慢性酒精中毒及戒斷過程中抑郁樣行為的改變，進(jìn)一步探討酒精中毒與抑郁癥的共病機(jī)制。方法: 構(gòu)建新型慢性酒精中毒小鼠模型；實(shí)驗分為正常對照組及慢性酒精7 d、14 d、21 d和28 d組。在第6、13、20和27天分別進(jìn)行酒精偏好度測試，測試后戒斷酒精1 d，隨后次日進(jìn)行抑郁行為學(xué)測試，測試結(jié)束后處死小鼠取海馬與額葉皮層，采用高效液相色譜法測定5-羥色胺(5-HT)及去甲腎上腺素(NE)含量，采用免疫印跡法測定cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的含量。結(jié)果: 隨著酒精飲酒天數(shù)及戒斷次數(shù)的增加，小鼠表現(xiàn)出明顯嗜酒現(xiàn)象，并且在強(qiáng)迫游泳和懸尾測試中，表現(xiàn)出明顯的不動時間增加。7 d組小鼠額葉皮層內(nèi)5-HT水平升高(P<0.05)，海馬與額葉5-HT水平在21 d與28 d組降低(P<0.01)；7 d和14 d組小鼠海馬與額葉NE水平無明顯變化，21 d和28 d組NE水平降低(P<0.05)。21 d和28 d組小鼠海馬與額葉內(nèi)p-CREB/CREB比值及BDNF表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，7 d與14 d組無明顯變化。結(jié)論: 酒精中毒、戒斷階段與抑郁的共病機(jī)制涉及5-HT。5-HT-cAMP-CREB-BDNF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能為酒精中毒與抑郁癥的共病機(jī)制。

[關(guān)鍵詞]酒精中毒； 抑郁； 5-羥色胺； cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白； 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子

酒精成癮與抑郁癥均是中樞神經(jīng)性疾病，兩者的病理特點(diǎn)表現(xiàn)為腦內(nèi)特定腦區(qū)大量神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，相關(guān)神經(jīng)保護(hù)蛋白表達(dá)的減少，神經(jīng)再生的減少。報道指出酒精成癮與抑郁癥存在關(guān)聯(lián)性[1]，相關(guān)臨床前研究也發(fā)現(xiàn)酒精成癮與抑郁癥存在關(guān)聯(lián)[2]，臨床研究也已證實(shí)抑郁癥與酒精濫用有關(guān)[3]，抑郁與酒精成癮共病率高達(dá)70%[2]，但兩者的共病機(jī)制仍不明確。

本研究基于抑郁癥的重要機(jī)制單胺假說，以及酒精成癮與神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)等存在相關(guān)性[4]，以腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)為突破口，進(jìn)一步檢測神經(jīng)保護(hù)相關(guān)蛋白——環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response element-binding protein, CREB)和神經(jīng)再生相關(guān)蛋白腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的表達(dá)，深入探討神經(jīng)遞質(zhì)→cAMP→CREB→BDNF通路是否為酒精成癮與抑郁癥兩者的共病機(jī)制。本研究采用慢性酒精成癮小鼠模型，并在經(jīng)典模型基礎(chǔ)上稍作修改，模擬臨床酒精戒斷后復(fù)飲的現(xiàn)象，觀察小鼠在反復(fù)戒斷及復(fù)飲時，抑郁樣行為的改變、相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)及相關(guān)蛋白表達(dá)的改變。

材料和方法

成年雄性ICR小鼠40只， 6～8周齡，購于中國科學(xué)院上海實(shí)驗動物中心，實(shí)驗動物許可證號為SYXK(浙)2010-0150。動物自由進(jìn)食及飲水。所有實(shí)驗和動物處理符合1986 年11 月24日歐洲共同體理事會指導(dǎo)，并通過復(fù)旦大學(xué)動物護(hù)理和使用委員會批準(zhǔn)。所有的實(shí)驗均在上午8：00～10：00進(jìn)行。

2主要試劑和設(shè)備

2.1試劑無水乙醇購于無錫佳妮化工有限公司;5-HT、去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、5-羥基異丁酸(5-hydroxyisobutyric acid，5-HIAA)和3-甲氧-4-羥苯乙二醇(3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol，MHPG)均購于 Sigma；BDNF抗體和ECL曝光液購于Abcam；CREB抗體、p-CREB抗體、兔Ⅱ抗及鼠Ⅱ抗均購于Santa Cruz；β-actin抗體購于Abcam；脫脂奶粉購于碧迪醫(yī)療器械有限公司；Tris-HCl購于Biosharp；APS、SDS、TEMED及BCA蛋白濃度測定試劑盒均購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司；30%聚丙烯酰胺和PVDF膜購于Solarbio。

2.2設(shè)備BS110S型電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)；JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；WH966漩渦混合器(太倉市科教器材廠)；Allegra 64R超速冷凍離心機(jī)(Beckman Coulter)；Agilent 1100 高效液相色譜儀(Agilent)。

3實(shí)驗方法

3.1慢性酒精成癮小鼠模型的建立64只小鼠分為慢性酒精成癮7 d組、14 d組、21 d組、28 d組和相應(yīng)的正常對照組，每組8只小鼠，共8組。3～5只小鼠飼養(yǎng)為1籠。以酒精和水的體積比為5%的初始濃度，按10 mL/kg量取酒水溶液。第2、3、4周酒精濃度分別為10%、20%和35%，將酒精溶液作為唯一的飲水來源。除正常對照組外，所有小鼠第1周給予5%酒精，慢性酒精成癮7 d組及其正常對照組在第6天進(jìn)行酒精偏好度測試，測試后停止給予酒精，戒斷1 d后，進(jìn)行強(qiáng)迫游泳測試和懸尾測試，測試后殺7 d組小鼠，取海馬與額葉皮層組織，其它各組則模擬戒斷和復(fù)飲過程，但并不進(jìn)行行為學(xué)測試，在第7天開始給予20%的酒精，以此類推處理14 d組、21 d組和28 d組小鼠。正常對照組則在全過程中給予正常飲水。

3.2酒精偏好測試仿照糖水消耗實(shí)驗方法[5]，對小鼠進(jìn)行酒精消耗測試。在小鼠進(jìn)行抑郁行為學(xué)測試前1 d，每只小鼠單籠飼養(yǎng)，禁水24 h后同時給予酒精與水各1瓶，記錄1 h內(nèi)酒水與水各自的消耗量，用酒水消耗率來表示實(shí)驗結(jié)果。酒水消耗率(%)= 酒水消耗量/(酒水消耗量+自來水消耗量)×100%。

3.3強(qiáng)迫游泳實(shí)驗測試(forced swim test, FST)動物被迫在一個局限的空間中游泳，首先以游泳、攀爬、掙扎試圖逃脫，隨后即進(jìn)入一種被稱為“行為絕望”的不動狀態(tài)，以反映動物的抑郁狀態(tài)。實(shí)驗時將對照組、慢性酒精組小鼠逐只放入高45 cm、直徑20 cm、水深20 cm的游泳水槽中，水溫維持在(22±1)℃，觀察6 min，記錄后4 min內(nèi)小鼠的絕對不動時間[6]。

3.2 【指南建議】 表型相關(guān)的臨床信息是測序數(shù)據(jù)解釋的組成部分。在開始檢測之前，臨床信息必須進(jìn)行咨詢的臨床醫(yī)生以標(biāo)準(zhǔn)格式提交，優(yōu)先使用人類表型本體術(shù)語。此外，臨床醫(yī)生還應(yīng)提供影像資料(至少要有報告，最好能補(bǔ)充相關(guān)圖像)以支持對胎兒的表型發(fā)現(xiàn)。鼓勵實(shí)驗室建立便于提交標(biāo)準(zhǔn)化表型信息的系統(tǒng)，這些信息作為檢測申請過程的一部分。

3.4懸尾實(shí)驗測試(tail suspension test,TST)根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[6]，在距尾尖約1 cm 處用膠布把小鼠懸于高50 cm 的位置。小鼠被懸于高處會立刻出現(xiàn)逃生樣行為，然后轉(zhuǎn)變?yōu)楸粍硬粍?。過了最初的掙扎期后小鼠會適應(yīng)不動狀態(tài)， 類似于絕望和精神抑郁的狀態(tài)。測試時間為6 min，記錄后4 min內(nèi)的累計不動時間，精確到秒。

3.5高效液相色譜法采用高效液相色譜法測定小鼠海馬及額葉皮質(zhì)內(nèi)單胺遞質(zhì)的含量。7 d、14 d、21 d和28 d行為學(xué)測試后，斷頭處死小鼠，迅速剝離大腦，分離出海馬和皮質(zhì)，稱重，放入-80 ℃ 冰箱中保存。測試時，每100 mg組織置于200 μL冰冷高氯酸(濃度為0.4 mol/L，溶液 A)中超聲勻漿。勻漿液避光置于冰上1 h，使其充分裂解，然后置于12 000 r/min 4 ℃離心20 min，丟棄沉淀。160 μL上清液加入至80 μL的溶液B(0.2 mol/L檸檬酸、0.3 mol/L磷酸氫二鉀和0.2 mol/L EDTA)?；旌弦罕芄庠诒戏跤? h，之后，再次進(jìn)行離心，轉(zhuǎn)速為12 000 r/min，溫度為4 ℃，離心20 min。取樣品上清液經(jīng)過0.22 μm 孔徑的過濾器處理，然后再取20 μL 進(jìn)行高效液相色譜分析。該色譜柱為 Diamonsilim C 18(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，采用CoulArray電化學(xué)檢測器(ESA Inc.)。流動相組分為125 mmol/L枸櫞酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH 4.3)、0.1 mmol/L EDTA、1.2 mmol/L辛烷基磺酸鈉和18%甲醇。流動相的流速為1.0 mL/min。腦組織中單胺及其代謝產(chǎn)物的含量以ng/g組織濕重表示。

3.6蛋白免疫印跡法各組小鼠在對應(yīng)天數(shù)進(jìn)行行為學(xué)測試后處死，在4 ℃條件下迅速剝離大腦，用生理鹽水洗去血漬后分離出海馬和皮質(zhì)，分別置預(yù)冷的RIPA 裂解液中進(jìn)行組織勻漿。用 BCA 蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量，經(jīng)過上樣電泳及轉(zhuǎn)膜后，蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。室溫下用5%脫脂奶粉封閉 1 h或4 ℃封閉過夜， 隨后用TBST 洗膜3次， 加入BDNF的 I 抗(稀釋倍數(shù)為1∶1 000)、p-CREB或CREB的I抗(稀釋倍數(shù)為1∶200)4 ℃孵育過夜。用TBST洗膜3 次， 每次7 min， 加入相應(yīng)的II抗(稀釋倍數(shù)為1∶10 000)， 孵育1 h。用TBST 洗膜3 次。曝光顯影后，用薄層掃描分析儀分析結(jié)果。

4統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，數(shù)據(jù)進(jìn)行多因素方差分析。多因素方差分析，給予酒精與不給予酒精及不同酒精濃度作為組間因素，當(dāng)出現(xiàn)多個時點(diǎn)的比較，時點(diǎn)的變化均為組內(nèi)因素，數(shù)據(jù)之間的多重比較采用Duncan檢驗。單因素方差分析中，采用Dunnett’st檢驗進(jìn)行多重比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1慢性酒精成癮過程中對酒精的依賴程度

如圖1所示，與正常對照組相比，7 d組小鼠對酒精的偏好程度有所增加，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而14 d組、21 d組和28 d組小鼠對酒精的偏好程度顯著增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

Figure 1.The effects of chronic alcohol consumption on alcohol preference test in 7 d, 14 d, 21 d and 28 d groups. Mean±SEM.n=8.**P<0.01vs0 d group.

圖1酒精偏好行為學(xué)結(jié)果

2慢性酒精成癮戒斷對抑郁樣行為學(xué)的影響

各組小鼠戒斷1 d后的抑郁行為學(xué)如圖2所示，7 d與14 d組小鼠在戒斷1 d后的FST和TST中，與對照組相比，不動時間并無顯著變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。21 d組與28 d組小鼠經(jīng)歷7 d與14 d的戒斷后復(fù)飲過程，F(xiàn)ST的不動時間較正常對照組明顯增加；在TST中，21 d與28 d組小鼠的不動時間與對照組相比較，也明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3慢性酒精成癮戒斷對腦內(nèi)海馬和額葉皮層5-HT及NE水平的影響

如表1所示，7 d戒斷組小鼠海馬內(nèi)5-HT水平與正常對照組相比略有升高，NE水平則無明顯變化，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，14 d組小鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)則無明顯差異，而21 d與28 d組的5-HT與NE水平則明顯降低(P<0.05)；相對應(yīng)的額葉皮層腦區(qū)，7 d戒斷組小鼠皮層中5-HT水平與正常對照組相比明顯升高(P<0.05)，NE水平并無明顯變化，但21 d及28 d組5-HT與NE水平隨著飲酒時間與戒斷次數(shù)的增加，呈階梯式降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

4慢性酒精成癮戒斷對腦內(nèi)海馬和額葉皮層p-CREB和BDNF表達(dá)的影響

21 d和28 d酒精戒斷組小鼠海馬內(nèi)pCREB和BDNF的蛋白水平與正常對照組相比明顯降低(P<0.05)，而7 d和14 d組表達(dá)并無明顯變化；相應(yīng)的21 d和28 d組小鼠額葉皮層的p-CREB和BDNF蛋白水平也明顯降低(P<0.05)，7 d和14 d組蛋白表達(dá)與正常組相比差異并無統(tǒng)計學(xué)意義，見圖3、4。

Figure 2.The effects of chronic alcohol consumption on force swimming test (A) and tail suspension test (B) in 7 d, 14 d, 21 d and 28 d groups. Mean±SEM.n=8.*P<0.05,**P<0.01vs0 d group.

圖2抑郁樣行為學(xué)強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗結(jié)果

表1海馬單胺遞質(zhì)含量測定結(jié)果

Table 1.The effects of chronic alcohol consumption on the concentrations of 5-HT, NE and their metabolites in hippocampus of mice (ng/g tissue. Mean±SEM.n=8)

Group5-HT5-HIAANEMHPGControl313.98±22.90237.36±30.40237.85±33.50191.18±22.40Alcohol7d365.45±23.60231.21±30.30239.34±27.80192.49±20.50Alcohol14d268.94±25.00214.33±24.10206.83±21.90184.33±13.80Alcohol21d205.75±24.50*222.60±16.70148.31±11.00*198.80±16.50Alcohol28d193.40±14.10**219.71±40.90145.80±16.40*192.36±24.20

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

表2額葉皮層單胺遞質(zhì)含量測定結(jié)果

Table 2.The effects of chronic alcohol consumption on the concentrations of 5-HT, NE and their metabolites in frontal cortex of mice (ng/g tissue. Mean±SEM.n=8)

Group5-HT5-HIAANEMHPGControl323.91±16.40233.35±27.40304.46±31.40217.85±39.80Alcohol7d406.39±50.30**240.36±38.20295.10±34.40220.15±28.40Alcohol14d264.46±37.00244.76±33.50284.57±31.10229.12±24.60Alcohol21d218.10±30.60*238.41±38.60189.86±35.20*216.08±23.90Alcohol28d186.16±28.80**229.21±33.80181.88±21.30*218.77±31.20

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

討論

酒精是一種人類歷史上使用時間最長的成癮藥物。適量飲酒對機(jī)體并無害，但過量飲酒會導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損。額葉皮層是受損最為明顯的腦區(qū)，尸檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)皮層存在明顯的神經(jīng)元丟失[7]。同時酒精中毒也會損害重要的學(xué)習(xí)記憶腦區(qū)海馬。研究發(fā)現(xiàn)海馬胚胎培養(yǎng)細(xì)胞暴露于酒精中時會引起酒精導(dǎo)致的細(xì)胞活力明顯降低，但如果暴露于BDNF時則會顯著逆轉(zhuǎn)酒精引起的神經(jīng)毒性[8]。額葉皮層與海馬調(diào)節(jié)著復(fù)雜的認(rèn)知功能，如學(xué)習(xí)記憶、情緒和情感。酗酒可導(dǎo)致這2個腦區(qū)受損，酗酒者表現(xiàn)出判斷力下降，情感麻木，洞察力變?nèi)?，社交退縮。這些表現(xiàn)與抑郁癥的表現(xiàn)驚人地相似，同時海馬與皮層也是抑郁癥最易累及的腦區(qū)[9]。酒精中毒與抑郁癥均為神經(jīng)退行性疾病，有著相似的病變腦區(qū)，臨床研究發(fā)現(xiàn)，酒精依賴及戒斷的患者首先多表現(xiàn)為：興奮、躁動、敵對攻擊、傷人毀物，并出現(xiàn)幻覺，隨著依賴程度的加深及戒斷次數(shù)的增多，患者可能出現(xiàn)焦慮、抑郁等伴隨癥狀。臨床也將抗抑郁藥物——選擇性5-HT重攝取抑制劑(selective serotonin reuptake inhibitor，SSRI)作為酒精成癮的治療藥物之一，這提示兩者可能存在共同的發(fā)病機(jī)制。

單胺假說作為抑郁癥的經(jīng)典發(fā)病機(jī)制之一，主要闡述的是腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT、NE等)失衡導(dǎo)致抑郁的發(fā)病，但5-HT和NE不僅僅與抑郁相關(guān)，近年來大量研究發(fā)現(xiàn)其與酒精成癮、酒精依賴相關(guān)，其中5-HT與酒依賴之間的相關(guān)性已被公認(rèn)，但目前其病理生理機(jī)制尚未研究清楚。本次研究以酒精中毒為模型，探究酒精與抑郁的共病機(jī)制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在酒精攝入初期(7 d～14 d)，海馬和額葉的5-HT神經(jīng)遞質(zhì)水平升高，且并無抑郁樣行為出現(xiàn)，而在酒精中毒中后期(14 d～28 d)，5-HT與NE遞質(zhì)水平明顯降低，出現(xiàn)抑郁樣行為。這一結(jié)果在酒精的相關(guān)研究中得到部分驗證，即人體長期飲酒和中樞5 -HT 能神經(jīng)遞質(zhì)呈負(fù)相關(guān)，中樞5-HT 能神經(jīng)遞質(zhì)的濃度隨著飲酒時間的延長而降低[10]，并且近期研究也發(fā)現(xiàn)5-HT受體亞型的活性與酒精攝入量密切相關(guān)，然而在飲酒后期的NE水平的變化并無相關(guān)研究可以佐證，同時在抑郁研究領(lǐng)域中，雖有大量臨床病人調(diào)研及群眾心理分析，至今仍無相關(guān)研究能說明長期飲酒后的神經(jīng)遞質(zhì)改變與戒斷階段的抑郁癥有關(guān)。以本實(shí)驗結(jié)果為基礎(chǔ)，結(jié)合經(jīng)典單胺假說，不難發(fā)現(xiàn)5-HT與NE均是抑郁發(fā)病的重要神經(jīng)遞質(zhì)，酒精攝入初期的遞質(zhì)水平升高可能是由于乙醇脫氫酶能催化酒精生成乙醛，乙醛可抑制催化5-HT的酶活性，減弱其降解[11]，從而使5-HT 濃度增加，這也正符合臨床應(yīng)用中，使用抗精神病藥緩解酒精中毒患者出現(xiàn)的幻覺癥狀，抗精神病藥均在不同程度上減少突觸間隙5-HT含量或阻斷5-HT受體。但在酒精中毒及戒斷加重的后期，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)神經(jīng)遞質(zhì)水平明顯降低，這可能正是酒后抑郁癥狀出現(xiàn)的原因所在，因此本研究提出5-HT及其受體和受體后通路可能是酒精依賴與抑郁的共病機(jī)制這一觀點(diǎn)。

Figure 3.Western blot analysis for p-CREB, CREB (A) and BDNF (B) expression in hippocampus of 0 d, 7 d, 14 d, 21 d and 28 d groups. Mean±SEM.n=4.*P<0.05,**P<0.01vs0 d group.

圖3海馬p-CREB、CREB和BDNF蛋白表達(dá)結(jié)果

Figure 4.Western blot analysis for p-CREB, CREB (A) and BDNF (B) expression in frontal cortex of 0 d, 7 d, 14 d, 21 d and 28 d groups. Mean±SEM.n=4.*P<0.05,**P<0.01vs0 d group.

圖4額葉皮層p-CREB、CREB和BDNF蛋白表達(dá)結(jié)果

CREB與BDNF是cAMP第二信使通路中重要的兩類神經(jīng)保護(hù)蛋白，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激抑郁大鼠海馬和額葉內(nèi)cAMP含量、CREB和BDNF的表達(dá)都會相應(yīng)發(fā)生變化[12-13]，CREB通路的激活可以介導(dǎo)BDNF的表達(dá)從而促進(jìn)神經(jīng)元的再生[14]。CREB與BDNF不僅僅與抑郁癥的發(fā)病密切相關(guān)，也與酒精中毒相關(guān)聯(lián)。本實(shí)驗的行為學(xué)結(jié)果表明，在酒精中毒后小鼠有明顯的抑郁樣行為出現(xiàn)，并且這種行為與海馬與額葉中神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT和NE)紊亂有關(guān)，進(jìn)一步檢測2個腦區(qū)的CREB、p-CREB和BDNF的表達(dá)水平后，發(fā)現(xiàn)隨著酒精攝入量及戒斷次數(shù)的增加，CREB的磷酸化及BDNF的表達(dá)下降明顯。這表明酒精中毒后的抑郁樣行為與CREB和BDNF表達(dá)下降有關(guān)。慢性酒中毒、酒精戒斷過程及抑郁癥，均涉及神經(jīng)退行性變和再生。CREB和BDNF在神經(jīng)元的存活、生長、分化發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。不僅在神經(jīng)發(fā)育過程中，在成人腦中BDNF也被認(rèn)為參與了神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)，及神經(jīng)元的可塑性，如長時程增強(qiáng)和學(xué)習(xí)，同時也參與了物質(zhì)成癮的過程。此外，相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn),BDNF水平下降會導(dǎo)致酒精消耗量增加，而其水平的增加則會減少酒精的攝入。重要的是，cAMP-CREB-BDNF通路也同樣是5-HT及其受體后的相關(guān)通路之一[15]，BDNF也與5-HT存在相互作用。當(dāng)BDNF激活其受體TrkB時，可以使5-HT的合成及釋放增加，從而增加突觸間隙5-HT的濃度,達(dá)到減輕癥狀、治療疾病的作用。這些結(jié)果均表明，調(diào)控5-HT-cAMP-CREB-BDNF信號通路可能是改善酒精成癮的重要途徑。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅森)

Change of depression-like behavior in chronic alcoholism and withdrawal model, and co-mechanism of depression and chronic alcoholism in miceJIANG Xi1, TIAN Fu-rong2, ZHAO Ying-zheng2

(1PharmaceuticalPreparationSectionofNingboMingzhouHospital,Ningbo315100,China;2WenzhouMedicalUniversity,Wenzhou325035,China.E-mail:jiangxi901022@163.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the behavior of depression in chronic alcoholism and withdrawal model of mice, and to explore the co-mechanism of alcoholism and depression. METHODS: A novel model of chronic alcoholism was constructed in this study. The animals were divided into normal control group, and alcohol 7 d, 14 d, 21 d and 28 d groups. The mice were given alcohol preference test on the 6th, 13th, 20th and 27th days. After the test, alcohol were withdrawn for 1 d, then the next day the mice were given behavior test of depression. After the test, the mice were sacrificed. The contents of 5-hydroxytryptamine (5-HT) and norepinephrine (NE) were detected by HPLC. The expression of cAMP response element-binding protein (CREB) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) was detected by Western blot. RESULTS: The mice showed an obvious drinking phenomenon, and the immobility time of forced swimming test and tail suspension test was significantly increased, with increasing drinking days and withdrawal times. 5-HT level in 7 d group mice only increased in frontal cortex (P<0.05). However, compared with control group, 5-HT levels in hippocampus and cortex were decreased on the 21th and 28th days (P<0.01). NE levels in 21 d and 28 d groups were decreased in hippocampus and frontal cortex (P<0.05), and no significant change was observed in 7 d and 14 d groups. The protein levels of p-CREB and BDNF were significantly decreased in hippocampus and frontal cortex of 12 d and 28 d groups (P<0.05), and no significant change was observed in 7 d group and 14 d group. CONCLUSION: The co-mechanism of alcoholism, withdrawal and depression is related to 5-HT. 5-HT-cAMP-CREB-BDNF signaling pathway may be a common mechanism for alcoholism and depression.

[KEY WORDS]Alcoholism; Depression; 5-hydroxytryptamine; cAMP response element-binding protein; Brain-derived neurotrophic factor

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.02.018

[中圖分類號]R363.21

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

通訊作者△Tel: 0574-83009631; E-mail: jiangxi901022@163.com

*[基金項目]國家自然科學(xué)基金資助項目 (No. 81272160)

[收稿日期]2015- 08- 03[修回日期] 2015- 10- 09

[文章編號]1000- 4718(2016)02- 0296- 06