龍　麗，　段趙寧，　蔡海貝，　唐良萏

(重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，重慶 400016)

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·論著·

NFATc1 對裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤脈管生成的影響*

龍麗，段趙寧，蔡海貝，唐良萏△

(重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，重慶 400016)

[摘要]目的： 探討胞漿活化T細胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells， cytplasmic 1, NFATc1)對人卵巢癌SKOV3細胞裸鼠移植瘤生長和腫瘤脈管生成的影響及其可能機制。方法:NFATc1 siRNA轉染人上皮性卵巢癌細胞株SKOV3，免疫熒光及RT-PCR測量轉染效率和基因抑制率，選取效率最高的序列建立裸鼠皮下移植瘤模型, 測量各組裸鼠腫瘤體積，觀察NFATc1 siRNA的體內抗腫瘤作用。免疫組織化學檢測各組腫瘤組織NFATc1的表達情況，并使用細胞角蛋白染色標記上皮性來源，CD34標記微血管，podoplanin標記微淋巴管。分別計算各組微血管及微淋巴管密度并進行統(tǒng)計學分析。應用RT-PCR及Western blot檢測各組移植瘤組織NFATc1、CXC趨化因子受體2(CXCR2)、成纖維細胞生長因子2(FGF-2)及血小板源性生長因子BB(PDGF-BB)的mRNA及蛋白表達水平。結果: 3條特異性序列均可顯著降低NFATc1的表達水平，以siRNA-1169最佳。NFATc1在空白組及陰性對照組瘤組織高表達。干擾組抑瘤率為57.08%，且重量和體積均低于2個對照組?？瞻捉M和陰性對照組的微血管密度和微淋巴管密度明顯高于干擾組。對照組比較,NFATc1 siRNA可以在mRNA水平上明顯抑制NFATC1、CXCR2、FGF-2和PDGF-BB的轉錄。Western blot各組細胞在相應位置出現NFATc1、CXCR2、FGF-2和 PDGF-BB條帶，空白組與陰性對照組的吸光度最強，與干擾組比較具有顯著差異。結論:NFATc1 siRNA明顯抑制人卵巢癌SKOV3細胞裸鼠皮下移植瘤生長和腫瘤脈管生成，下調CXCR2、FGF-2及PDGF-BB的表達可能為其途徑之一。

[關鍵詞]NFATc1； 上皮性卵巢癌； 腫瘤脈管生成

胞漿活化T細胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells， cytoplasmic 1,NFATc1)屬于活化T細胞核因子(nuclear factor of activated T-cells，NFAT)家族成員，其功能包括誘導淋巴細胞的發(fā)生和激活，以及心肌細胞的分化[1-2]。淋巴細胞的NFAT被激活時，可以單一或異形剪接體的形式與DNA結合，其結合部位可對其他轉錄因子產生很大的吸引力[3]。例如激活蛋白1(activator protein-1，AP-1)與NFAT和DNA形成復合體，是NFAT激發(fā)T細胞活性必需的初始轉錄元件[4-5]。此外，NFAT和其他許多轉錄因子一起執(zhí)行細胞的活動與分化功能，如轉錄因子GATA-4、早期生長反應蛋白(early growth response protein，EGR)、肌細胞增強因子2(myocyte enhancer factor 2，MEF2)以及在惡性腫瘤中特別重要的叉頭盒P1(forkhead box P1，FoxP1)[6]。

最近許多關鍵的研究發(fā)現NFAT與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關[7]，目前已明確NFATc1具有致瘤的活性[8]。NFATc1誘導纖維母細胞NIH 3T3產生非常明顯的轉換表型，被認為是潛在的癌基因[9]。NFATc1的表達與其它許多惡性腫瘤相關，例如在結腸和胰腺癌[10-12]，NFATc1是它們發(fā)生發(fā)展必不可少的關鍵因子。

NFATc1是胚胎形成的過程中心血管發(fā)育的關鍵因素[13-14]，產后它仍可調節(jié)內皮細胞的生長，分化和細胞周期。越來越多的數據和資料顯示NFATc1調節(jié)血管源性的反應[15-16]。對血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)誘導血管生成的研究發(fā)現，NFATc1是其關鍵成分并處于VEGF產生的血管源性內皮細胞逃逸途徑的交合點，在VEGF/IL-1誘導大多數基因的過程中非常重要。NFATc1信號途徑上游的VEGF-A是腫瘤血管生成的關鍵因子，同時也具有促進腫瘤淋巴管生成的作用[17]。 此外，NFATc1 在內皮細胞與EGR-1共同激活組織因子(tissue factor，TF)基因轉錄[18]，TF是血液凝固和血管生成的啟動蛋白，在TF啟動子，NFATc1與NF-κB密切結合于重合位點。這些數據表明VEGF-A對TF及其他潛在基因的完全性轉錄反應需要NFATc1。NFAHc1在淋巴管生成也具有重要地位，研究發(fā)現其表達于發(fā)育中及成熟的淋巴管，在淋巴內皮細胞控制podoplanin(腎小球足突細胞膜黏蛋白)和血管內皮生長因子受體3(vascular endothelial growth factor receptor-3，VEGFR-3)的表達，降低其活性可減少肺損傷時VEGF-A所誘導的淋巴管生成[19]。研究還發(fā)現NFATc1可作為 VEGF-C 的下游信號分子，與Prox1(prospero-related homeobox 1)、podoplanin、Foxc2 和 VEGFR-3 等促淋巴管生成因子相互作用，影響淋巴管生成，特別是淋巴管的空間構造和管道塑形[20]。以上研究均提示NFATc1在血管及淋巴管生成中有非常重要的地位和作用，但目前NFATc1在惡性腫瘤脈管生成的研究主要集中于其上游基因VEGF，并且在上皮性卵巢癌還沒有相關的研究。因此，在本研究中我們從體內外兩個方面探討NFATc1對上皮性卵巢癌血管及淋巴管生成的影響，以及NFATc1與對腫瘤血管及淋巴管生成具有非常重要作用的CXC趨化因子受體2(CXC chemokine receptor 2，CXCR2)、成纖維細胞生長因子2(fibroblast growth factor 2，FGF-2)和血小板源性生長因子BB(platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB)的關系，以期解釋NFATc1影響上皮性卵巢癌惡性生物學行為的可能原因，探索NFATc1的信號轉導和上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子機制，為腫瘤脈管生成提供更多的理論基礎。

材料和方法

1實驗材料與分組

1.1細胞人上皮性卵巢癌細胞株SKOV3(人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌系)由重慶醫(yī)科大學分子醫(yī)學與腫瘤中心惠贈。設置為5個組：空白組不予干擾；陰性對照組給予無關序列；干擾組1(siRNA1)給予siRNA-880；干擾組2(siRNA2)給予siRNA-1169；干擾組3(siRNA3)給予siRNA-1307。

1.2實驗動物4～8周齡雌性裸鼠(n=18)由重慶醫(yī)科大學動物實驗中心提供，平均設置為3個組?？瞻捉M種植未加干擾的SKOV3細胞；陰性對照組種植無關序列干擾的SKOV3細胞；干擾組種植抑制效率較高的NFATc1 siRNA 干擾后的SKOV3細胞。

1.3主要抗體和工作濃度NFATc1兔多克隆抗體(Abcam)的工作濃度為1∶500；CXCR2兔抗人多克隆抗體(Santa Cruz)為1∶800；FGF-2鼠單克隆抗體 (Santa Cruz)為1∶500；PDGF-BB兔多克隆抗體(Santa Cruz)為1∶800。

2實驗方法

2.1細胞培養(yǎng)與轉染人卵巢癌SKOV3細胞株置于RPMI-1640培養(yǎng)基。取對數生長期細胞，按每孔1×105接種于 6孔板，長至70%～80%融合時進行轉染：250 μL的無抗無血清DMEM稀釋5 μL的脂質體，室溫放置5 min；250 μL的無抗無血清DMEM稀釋5 μL的濃度為20 μmol/L的siRNA。將稀釋后的脂質體和siRNA混在一起，共510 μL，室溫放置20 min。PBS洗細胞3次，每孔加入1.5 mL無抗培養(yǎng)基，然后再加入510 μL 的siRNA/脂質體復合體混勻，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后熒光顯微鏡及RT-PCR觀察轉染情況。 經3條特異性干擾序列處理的細胞在高倍鏡下各自隨機選取5個視野，轉染效率按以下公式計算：轉染效率(%)=發(fā)綠色熒光細胞平均數/總細胞平均數×100%。RT-PCR半定量測定基因抑制情況。

2.2動物模型的建立4～6周齡雌性裸鼠飼養(yǎng)在 SPF環(huán)境中。收集處于對數生長期的各組SKOV3細胞，于每只裸鼠側腋皮下注射單細胞懸液(5×106個，0.2 mL)。連續(xù)觀察30 d，記錄腫瘤出現的時間，定期觀察小鼠精神、飲食、排便及成瘤情況，于接種后第30 d斷頸處死各組裸鼠，摘取移植瘤稱取重量，以瘤體重量計算抑瘤率：抑瘤率(%)=(對照組重量-實驗組重量)/對照組重量×100%；計算腫瘤體積(V)：V (cm3)=1/2 × LW2(L:長度；W:重量)。RT-PCR和Western blot實驗觀察各組移植瘤瘤體NFATc1 mRNA及蛋白表達情況。

2.3免疫組織化學觀察石蠟包埋組織6 μm連續(xù)切片，每例標本連續(xù)切片3張。采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法(SP法)分別檢測每組標本血管標記物CD34及淋巴管標記物podoplanin的表達。每批切片均設陽性和陰性對照片，陰性對照采用 PBS替代第I抗體, 已知陽性片為陽性對照。使用的抗體即廣譜細胞角蛋白(cytokeratin,CK)鼠單克隆抗體，工作濃度為1∶500；CD34兔多克隆抗體，工作濃度為1∶500；podoplanin鼠單克隆抗體,工作濃度為1∶1 000。

以CD34為血管內皮標志物，以podoplanin為淋巴管內皮標志物，并在光鏡下觀察著色血管內皮細胞與著色淋巴管內皮細胞的數量，微血管微淋巴管形態(tài)。每例先在光鏡低倍視野(×40)下觀察，選取著色細胞密集的區(qū)域，在高倍視野(×200或×400)下觀察，鑒別著色的淋巴管并計數。以5個200倍或400倍視野內淋巴管數的平均值與鏡下面積相除得出該例切片的微淋巴管密度。每張切片均由2位病理科醫(yī)生雙盲法閱片。

2.4RT-PCR實驗充分裂解細胞后提取RNA，逆轉錄后按下列程序分別擴增NFATc1、CXCR2、FGF-2及PDGF-BB：95 ℃ 5 min；56 ℃(NFATC1)或57 ℃(CXCR2)或58 ℃(FGF-2和PDGF-BB)。并按下列程序擴增內參照GAPDH：95 ℃，5 min；59.5 ℃，30 s，30 cycles；72 ℃ 30 s；72 ℃ 10 min。反應結束后，取5 μL擴增產物作1.5%瓊脂糖凝膠電泳，用Quantity One凝膠成像系統(tǒng)分析各基因灰度值。RT-PCR的引物序列見表1。

2.5.Western blot實驗轉染48 h后收集細胞。充分裂解細胞20 min；4 ℃，15 000 r/min離心15 min，吸取上清并用6(buffer稀釋，99 ℃高溫下變性5 min，用6×加樣緩沖液1∶5稀釋蛋白樣品，每孔30 μL上樣，72 V 30 min，然后2 h行SDS-PAGE至溴酚藍達到凝膠底部。根據蛋白大小切割膠及PVDF(Millipore)膜，冷卻條件下250 mV電轉60 min；封閉液稀釋 I 抗NFATc1/CXCR2/PDGF-BB兔多克隆抗體(1∶1 000)和FGF-2鼠單克隆抗體(1∶1 000)，4 ℃過夜；加入稀釋好的HRP(濃度為1∶2 000)標記的山羊抗兔 II抗顯色。

表1　RT-PCR的引物序列

F: forward; R: reverse.

3統(tǒng)計學處理

所有的統(tǒng)計學處理均采用 SPSS 16.0軟件完成。計量資料用均數(標準差(mean±SD)表示。多樣本均數比較首先采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，多樣本各組均數間的多重比較采用SNK-q檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

結果

1轉染效率

轉染后24 h及48 h熒光顯微鏡觀察，可見SKOV3細胞內出現綠色熒光顆粒，說明siRNA已經被轉染進入細胞(圖1)，各組48 h轉染效率均高于24 h，siRNA1組48 h轉染效率為59.1%，siRNA2組轉染效率為85.3%，siRNA3組轉染效率為51.9%。以siRNA2組48 h轉染效率最高，與其余2組比較差異有統(tǒng)計學顯著性。

RT-PCR 檢測3組siRNA 轉染48 h對NFATc1基因的抑制情況，結果顯示3組細胞NFATc1 mRNA表達水平分別為0.532±0.001、0.278±0.001和0.498±0.003，siRNA2組siRNA抑制效率最高，與其余2組比較差異均有統(tǒng)計學顯著性(P<0.01)，siRNA1組與siRNA3組間比較無顯著差異(圖2)。根據對3條siRNA轉染及抑制效率的比較，在后續(xù)試驗中采用效率最高的siRNA-1169進行干擾。

Figure 1.Transfection efficiency of each group observed under fluorescent microscope. Mean±SD.n=24.*P<0.05vssiRNA1 or siRNA3.

圖1熒光顯微鏡分別觀察各組轉染效率

Figure 2.Inhibitory efficiency of each siRNA at 48 h. Mean±SD.n=9.**P<0.01vssiRNA1 or siRNA3.

圖2各組siRNA 轉染48 h后NFATc1的mRNA表達水平

2降低NFATc1的活性可抑制裸鼠移植瘤生長

18只裸鼠接種腫瘤成功率為100%，空白對照組和陰性對照組潛伏期6～8 d，NFATc1 siRNA組潛伏期8～11 d。腫瘤在局部呈膨脹性生長，2～3周后體積逐漸增大(圖3)。實驗結束時裸鼠均成活。肉眼觀察NFATc1 siRNA組腫瘤體積較對照組小。

Figure 3.The nude mouse model of transplanted ovarian cancer. A: nude mouse; B: transplanted tumorinvivo; C: isolated transplanted tumor.

圖3人卵巢癌裸鼠移植瘤模型

NFATc1 siRNA組抑瘤率為57.08%，且重量和體積均小于2個對照組，差異有統(tǒng)計學顯著性,見表2。

表2各組裸鼠移植瘤瘤體平均質量分析

Table 2.Analysis of the transplanted tumor of nude mouse (Mean±SD.n=18)

GroupWeight(g)Volume(cm3)Inhibitoryrate(%)Blankcontrol2.03±0.35*1.328±145*0*Negativecontrol1.98±0.78*1.274±209*0*siRNA0.87±0.320.512±08757.08

*P<0.05vssiRNA.

3NFATc1在移植瘤組織高表達

每組切片30張，共90張切片進行染色，NFATc1的抗體效應物為棕黃色顆粒，定位于細胞質。陽性表達于全部對照組移植瘤組織(100%)，H-Score半定量法平均積分為320(0～356)和336(0～356)；陽性表達于10例(33%)干擾組移植瘤組織，H-Score平均積分為35(0～180)。NFATc1在上皮性卵巢癌移植瘤組織高表達，NFATc1 siRNA可明顯抑制其表達水平，與對照組比較差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)，見圖4、表3。

Figure 4.The protein expression of NFATc1 in the mouse transplanted tumors.

圖4NFATc1蛋白在裸鼠移植瘤組織的表達

4降低NFATc1的活性可抑制上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤組織血管及淋巴管生成

CK呈棕黃色特異性表達于所有移植瘤組織切片上皮細胞的胞漿，證明了移植瘤的上皮性來源。CD34特異性地表達于移植瘤組織毛細血管內皮細胞胞質，標記毛細血管為棕黃色管腔，管腔內見或不見紅細胞。腫瘤細胞未見表達。Podoplanin染色后微淋巴管內皮細胞胞質呈棕黃色，標記微淋巴管為棕黃色管腔。淋巴管管壁較血管壁薄，腔相對較大而塌陷，腔內不見紅細胞。染成棕黃色的單個內皮細胞或內皮細胞簇連成閉合或不閉合的線狀管腔作為一個脈管,以計算微血管密度(microvessel density，MVD)或微淋巴管密度(lymphatic microvessel density，LMVD)。統(tǒng)計結果顯示對照組密度明顯多于干擾組，差異有統(tǒng)計學顯著性，見圖5、表3。

Figure 5.The MVD of transplanted tumor. A, D: epithelial specific CK staining (+++); B: CD34 staining in control group; C: CD34 staining in siRNA group; E: podoplanin staining in control group; F: podoplanin staining in siRNA group.

圖5各組上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤微血管及微淋巴管密度

表3　各組移植瘤免疫組織化學染色結果、H-Score、MVD和LMVD的比較

H-Score=ΣPi(i+1):iwas the intensity of staining, Piwas the percentage of cells with positive staining/the total number of tested cells, and 1 was the correction factor.*P<0.05vssiRNA.

5沉默NFATc1可抑制SKOV3細胞CXCR2、FGF-2和PDGF-BB的mRNA表達

擴增各組NFATc1、CXCR2、FGF-2和PDGF-BB電泳條帶存在明顯差異。其中，空白組和陰性對照組擴增帶亮度較強；NFATc1 siRNA組擴增帶亮度較弱，用Quantity One凝膠成像系統(tǒng)分析NFATc1、CXCR2、FGF-2、PDGF-BB與內參照β-actin的灰度比值，與2個對照組比較，差異均有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)，見表4。這一結果證實NFATc1 siRNA可以在mRNA水平上明顯抑制上述4種基因的轉錄。

6沉默NFATc1可抑制SKOV3細胞CXCR2、FGF-2和PDGF-BB蛋白的表達

各組細胞在相應位置均出現分別為91 kD的NFATc1、40 kD的CXCR2、15.8 kD的FGF-2和24.4 kD的 PDGF-BB條帶，但強弱不一，空白組與陰性對照組表達最強，干擾組表達最弱，各組與干擾組比較差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)，見圖6。

表4　各組SKOV3細胞NFATc1、CXCR2、FGF-2和PDGF-BB mRNA的表達

*P<0.05vssiRNA.

Figure 6.The protein expression of NFATc1, CXCR2, FGF-2 and PDGF-BB in each group. Mean±SD.n=24.*P<0.05vssiRNA.

圖6各組NFATc1、CXCR2、FGF-2及PDGF-BB蛋白表達的比較

討論

有報道NFATc1誘導肺動脈內皮細胞增殖[21]，并發(fā)現其增加人肺動脈瓣內皮細胞的遷移和移行[22]。NFATc1還是胚胎形成過程中心血管發(fā)育的關鍵因素，通過與特異性的配體輔助因子(如MEK1-ERK1/2 和JNK1/2)協作促進其有序發(fā)育[23]。VEGF/NFATc1/COX2信號途徑也可顯示NFATc1在血管及淋巴管生成中的重要地位[24-25]。

通過建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型取得移植瘤組織，并采用CD34染色腫瘤微血管，podoplanin染色腫瘤微淋巴管，免疫組化觀察NFATc1的表達及NFATc1 siRNA作用前后移植瘤血管及淋巴管生成，可見NFATc1在移植瘤組織高表達，用 siRNA抑制NFATc1的表達可顯著減少上皮性卵巢癌血管生成和淋巴管生成，說明NFATc1可促進上皮性卵巢癌血管生成和淋巴管生成，在上皮性卵巢癌的脈管生成中具有重要作用。

PCR結果顯示干擾組NFATc1、CXCR2、FGF-2和PDGF-BB的基因表達水平明顯低于對照組。NFATc1 siRNA作用于SKOV3細胞后明顯抑制NFATc1基因水平，同時導致CXCR2、FGF-2和PDGF-BB表達下降，Western blot實驗結果與PCR實驗一致，NFATc1 siRNA作用于SKOV3細胞后明顯抑制NFATc1蛋白水平，同時導致CXCR2、FGF-2和PDGF-BB 蛋白表達下降。這些實驗結果均提示NFATc1 siRNA不但可以抑制上皮性卵巢癌SKOV3細胞NFATc1 mRNA和蛋白表達，還可以抑制CXCR2、FGF-2和PDGF-BB 的mRNA和蛋白表達水平。

CXCR2也稱為IL-8受體, 屬于G蛋白偶聯跨膜趨化因子受體[26]，CXC趨化因子與其結合對血管生成產生影響。CXC趨化因子的區(qū)分基于ELR(N 端谷氨酸-亮氨酸-精氨酸基序)的表達，ELR+CXC 趨化因子生成血管，其代表有CXCL8/IL-8，是血管生成強烈的誘導子和主要的基礎。ELR+CXC趨化因子在血管生成中的關鍵性使其成為惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中血管生成異常調節(jié)的基礎[27-30]。CXCR2即ELR+CXC 趨化因子的特異性受體，通過與ELR+CXC 趨化因子結合實現其癌組織血管生成的功能，此外，它還可以通過與多種信號途徑，如PI3K/Akt、NF-κB、MAPK和STAT3作用實現腫瘤血管生成，為其在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演關鍵角色提供了有力的證據[31]。在本實驗中，通過NFATc1 siRNA干擾的手段發(fā)現CXCR2的表達水平隨著NFATc1的降低而降低，說明NFATc1對上皮性卵巢癌血管生成的影響或許可以通過調節(jié)CXCR2來實現。

惡性腫瘤積極的產生淋巴管生成和塑形，腫瘤誘導的淋巴管生成是由淋巴管生成因子發(fā)動，其中FGF-2 和PDGF-BB是非常重要的2個因子。既往的研究發(fā)現FGF-2是促進血管生成的生長因子，有力的有絲分裂原和化學趨化劑，近年的研究確定其與腫瘤淋巴管生成及淋巴轉移密切相關，當其低劑量表達時不能誘導血管生成，但是卻能夠特異性的誘導腫瘤淋巴管生成，因此在腫瘤淋巴管生成中扮演重要角色[32]。PDGF-BB是PDGFs中的一員，研究顯示PDGF-BB可以刺激腫瘤淋巴管生成及腫瘤的淋巴轉移，是VEGF-C之外獨立的淋巴管生成因子，其主要功能是穩(wěn)定脈管網絡，最近發(fā)現它還可以獨立于VEGFR-3直接刺激腫瘤淋巴管生成及淋巴轉移[33]，特異性的靶向PDGF-BB是抑制淋巴管生成新的策略。本實驗通過NFATc1 siRNA干擾發(fā)現NFATc1可影響FGF-2 和PDGF-BB，兩者表達水平隨著NFATc1的降低而降低，說明NFATc1對上皮性卵巢癌淋巴管生成的影響或許可以通過調節(jié)FGF-2 和PDGF-BB來實現。

此外，COX-2促進血管生成和腫瘤侵襲過程中的激活會增加PDGF和bFGF的表達水平[34]，并且VEGF對PDGF的激活依賴于COX2的過表達[35]，在內皮細胞，刺激FGF-2可以獲得PDGF-BB 的高反應性，反過來PDGF-BB會通過放大淋巴管壁細胞的受體表達對FGF-2信號產生正反饋。二者這種不協調的相互交集在腫瘤微環(huán)境中會引起原始淋巴管的無序形成和塑形，從而促進腫瘤生長和轉移。結合VEGF/NFATc1/COX2信號途徑與我們的研究結果，或許可以認為在上皮性卵巢癌脈管生成的過程中，NFATc1具有非常重要的作用：當其受VEGF-A或VEGF-C的激活后，作用于其下游的IL-8促進血管生成，同時，通過其下游的COX2，影響FGF-2及PDGF-BB的水平,從而調控腫瘤血管和淋巴管生成，且FGF-2和PDGF-BB二者間形成正反饋環(huán)，相互作用相互影響，通過腫瘤脈管生成共同促進癌發(fā)生及癌轉移，該信號通路有可能是上皮性卵巢癌的有效治療靶標。

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(責任編輯: 陳妙玲， 羅森)

NFATc1 promotes vascular generation of epithelial ovarian cancer transplanted tumor by regulating CXCR2, FGF-2 and PDGF-BBLONG Li, DUAN Zhao-ning, CAI Hai-bei, TANG Liang-dan

(TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China.E-mail:ldtangcq2002@163.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the role of NFATc1 in vascular generation in the nude mice transplanted with human ovarian cancer SKOV3 cells. METHODS:NFATc1 expression was silenced by siRNA in SKOV3 cells. Human ovarian cancer transplantation nude mouse model was established by transplanting with SKOV3 cells in which theNFATc1 gene was silenced by siRNA technique. The expression of NFATc1, CXCR2, FGF-2 and PDGF-BB at mRNA and protein levels was determined by RT-PCR, Western blotting and immunohistochemical staining. The tumor growth, angiogenesis and lymphangiogenesis were also observed. RESULTS: Over-expression of NFATc1 was observed in human ovarian cancer tissues. The silencing ofNFATc1 expression by siRNA decreased tumorigenesis of transplanted ovarian cancer cells in the nude mice, reduced tumor vascular generation and inhibited the expression of CXCR2, FGF-2 and PDGF-BB at mRNA and protein levels. CONCLUSION: NFATc1 is overexpressed in ovarian cancer.NFATc1 silencing regulates the tumor vascular generation. NFATc1 thus has potential as a therapeutic target and for use in the diagnosis and evaluating prognosis of epithelial ovarian cancer.

[KEY WORDS]NFATc1; Epithelial ovarian cancer; Tumor vascular generation

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.02.001

[中圖分類號]R730.23；R711

[文獻標志碼]A

通訊作者△Tel: 023-89011080; E-mail: ldtangcq2002@163.com

*[基金項目]國家自然科學基金資助項目(No. 81402126)

[收稿日期]2015- 07- 15[修回日期] 2015- 12- 11

[文章編號]1000- 4718(2016)02- 0193- 08