韓　冰　吉　杰　趙國軍

(承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院婦科，河北　承德　067000)

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褪黑素對腹腔手術嚴重感染大鼠炎癥介質、氧化應激及主要臟器功能的保護作用

韓冰吉杰趙國軍1

(承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院婦科，河北承德067000)

〔摘要〕目的探索褪黑素(Mel)對腹腔手術嚴重感染大鼠炎癥介質、氧化應激及主要臟器功能的保護作用。方法選取雄性SD大鼠并采用盲腸結扎穿孔術制備腹腔手術嚴重感染模型，根據實驗設計分為模型組、Mel小劑量組和Mel大劑量組(每組20只)，選取20只同周齡大鼠行假手術作為對照組，術后1 d后每天分別給予0.9%氯化鈉注射液、50 mg/kg和100 mg/kg Mel腹腔注射。治療1 w后收集血標本，采用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)檢測各組血清腫瘤壞死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6和C-反應蛋白(CRP)水平，測定各組大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及總抗氧化能力(T-AOC)含量評價氧化應激水平，檢測各組的血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)、谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿酸(UA)水平用以評價胰腺、肝臟及腎臟功能，同時制備胰腺、肝臟和腎臟組織病理切片以評價臟器損傷情況。結果與對照組相比，模型組的TNF-α、IL-6、CRP、MDA、AMY、LPS、ALT、AST、BUN、Cr和UA水平均升高，SOD活性和T-AOC水平均降低，且胰腺、肝臟及腎臟的病理損傷較重(P<0.05)；Mel小劑量、大劑量組的炎癥介質指標、MDA及胰腺、肝臟和腎臟功能指標均低于模型組，SOD活性和T-AOC水平均高于模型組(P<0.05)，且胰腺、肝臟和腎臟的損傷程度較輕(P<0.05)；Mel大劑量組的以上指標水平均優(yōu)于小劑量組(P<0.05)。結論Mel可改善腹腔手術嚴重感染大鼠的炎癥反應及氧化應激程度，對主要臟器有較好的保護作用，且大劑量的效果較優(yōu)。

〔關鍵詞〕褪黑素；腹腔手術嚴重感染；炎癥介質；氧化應激

1承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院手術部

第一作者：韓冰(1976-)，女，主治醫(yī)師，主要從事婦科研究。

手術室是醫(yī)院的高?？剖遥中g感染預防與控制的好壞直接影響手術效果〔1〕。腹腔手術為常見的手術類型，而嚴重腹腔感染也是臨床上的棘手問題，具有感染范圍廣、持續(xù)時間長及合并多臟器衰竭等特點，大量研究也證實氧化應激在腹腔感染發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，故控制炎癥反應及氧化應激對于腹腔感染的防控意義重大〔2,3〕。褪黑素(Mel)是一種由松果體細胞分泌的肽類激素，具有多種生活活性，如調節(jié)體溫、生物節(jié)律和神經內分泌等〔4,5〕，多項研究發(fā)現(xiàn)Mel也可抑制器官損傷后炎癥反應〔6,7〕，但目前對Mel能否改善腹腔感染后炎癥反應及氧化應激損傷尚不清楚。本研究擬觀察Mel對炎癥反應及氧化應激損傷相關指標的影響。

1資料與方法

1.1實驗動物及分組選取雄性SD大鼠并采用盲腸結扎穿孔術制備腹腔手術嚴重感染模型，根據實驗設計分為模型組、Mel小劑量組和Mel大劑量組(每組20只)，選取20只同周齡大鼠行假手術作為對照組，術后1 d后每天分別給予0.9%氯化鈉注射液、50 mg/kg和100 mg/kg Mel灌胃。所有大鼠的飼養(yǎng)環(huán)境為SPF級，飼養(yǎng)條件：溫度20℃、相對濕度60%~70%，12 h/12 h明暗周期。

1.2主要試劑與儀器試劑：大鼠腫瘤壞死因子(TNF)-α檢測試劑盒購自上海拜沃生物科技有限公司，白介素(IL)-6、C-反應蛋白(CRP)檢測試劑盒購自北京北方生物制品公司，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及總抗氧化能力(T-AOC)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，大鼠淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)測定試劑盒均購自上海康成生物工程有限公司，谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)試劑盒購自上海科欣生物技術研究所，尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿酸(UA)測定試劑購自北京利得曼公司；儀器：ELx800型全自動酶標儀購自美國Bio-TEK公司，RA-1000型全自動生化分析儀購自德國Bayer公司。

1.3動物模型制備待充分麻醉后將大鼠固定，備皮消毒后取下腹部正中縱形切口約2 cm，探查腹腔后將盲腸置于腹腔外，采用0#絲線在盲腸中部約1/2處結扎，于盲腸結扎線與盲腸末端中間采用16 G針頭行貫通性穿刺，從兩側針孔輕輕擠出少量盲腸內容物，將盲腸還納入腹腔。對照組僅行開腹手術，不行盲腸穿刺，術后分層縫合腹壁切口。

1.4標本收集與處理治療1 w后處死大鼠，取大鼠心臟血5 ml，室溫下靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min，收集上清后-20℃凍存?zhèn)溆?。取完心臟血標本后，迅速留取胰腺、肝臟和腎臟組織，10%甲醛固定后，按照常規(guī)步驟進行HE染色。

1.5酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)采用ELISA法依次檢測血清中TNF-α、IL-6和CRP水平，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書。

1.6其他血清相關指標檢測分別采用硫代巴比妥酸法、黃嘌呤氧化快速比色法及化學比色法測定血清MDA、SOD及T-AOC水平，采用全自動生化分析儀檢測血清AMY、LPS、ALT、AST、BUN、Cr和UA水平，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書。

1.7病理組織觀察將制備好的胰腺、肝臟及腎臟切片置于高倍鏡下進行組織形態(tài)學觀察，記錄3種組織中是否有出血、水腫、壞死及中性粒細胞浸潤等表現(xiàn)，觀察腎小管水腫及球囊擴張情況。

1.8統(tǒng)計學分析采用SPSS18.0軟件。多組比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK法。

2結果

2.1各組血清炎癥指標水平比較與對照組相比，模型組的TNF-α、IL-6和CRP水平均升高(P<0.05)；Mel小劑量、大劑量組的以上炎癥介質水平均低于模型組，但仍高于對照組(P<0.05)，且Mel大劑量組的TNF-α、IL-6和CRP水平均低于小劑量組(P<0.05)。見表1。

表1　各組血清炎癥介質水平比較±s,n=20)

與對照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；與Mel小劑量組比較：3)P<0.05；下表同

2.2各組的血清氧化應激相關指標比較與對照組相比，模型組的MDA水平升高，SOD活性和T-AOC水平均降低(P<0.05)；Mel小劑量、大劑量組的MDA水平均低于模型組，SOD活性和T-AOC水平均高于模型組，但與對照組的差異仍有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；Mel大劑量組的MDA、SOD和T-AOC水平均優(yōu)于小劑量組(P<0.05)。見表2。

表2　各組血清氧化應激相關指標比較±s,n=20)

2.3各組的胰腺功能及病理情況比較與對照組相比，模型組的血清AMY和LPS水平均升高(P<0.05)，且病理顯示胰腺可見壞死及中性粒細胞浸潤；Mel小劑量、大劑量組的以上指標均低于模型組(P<0.05)，胰腺病變較輕、中性粒細胞減少，且Mel大劑量組的AMY水平與對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Mel大劑量組的血清AMY和LPS水平均低于小劑量組(P<0.05)。見表3。

2.4各組的肝臟功能及病理情況比較與對照組相比，模型組的ALT、AST水平均升高(P<0.05)，且病理顯示肝臟組織出血、水腫及中性粒細胞浸潤；Mel小劑量、大劑量組的以上指標均低于模型組(P<0.05)，且肝臟病變較輕、水腫程度較小、中性粒細胞減少，但與對照組的差異均有統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Mel大劑量組的ALT、AST水平均低于小劑量組(P<0.05)。見表3。

表3　各組胰腺、肝臟功能及腎臟功能相關指標比較±s,n=20)

與對照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；與Mel小劑量組比較：3)P<0.05

2.5各組的腎功能及病理情況比與對照組相比，模型組的BUN、Cr 和UA水平均升高(P<0.05)，且病理顯示腎小管水腫、球囊擴張、少量中性粒細胞浸潤及局部出血；Mel小劑量、大劑量組的以上指標均低于模型組(P<0.05)，且腎小球、腎小管病變較輕，但與對照組的差異均有統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Mel大劑量組的BUN、Cr 和UA水平均低于小劑量組(P<0.05)。見表3。

3討論

炎癥反應是多種感染的主要表現(xiàn)，TNF-α、IL-6和CRP作為炎癥指標，目前廣泛用于評估腹腔感染的診治效果〔1,8〕。本研究表明Mel對緩解腹腔感染的炎癥反應同樣有效。此外，Mel還可通過抑制炎癥反應發(fā)揮對脊髓損傷、腸缺血再灌注肺損傷及急性腦缺血再灌注損傷的保護作用〔9，10〕，以上結果均提示Mel具有較廣的抗炎效果。

氧化應激與人體疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關，強烈的炎癥反應通常伴有嚴重的氧化應激狀態(tài)〔11〕，而多種炎癥介質可促進機體釋放大量氧自由基，導致氧化應激損傷〔12〕。此外，參與抗氧化損傷系統(tǒng)的酶活性被抑制，在一定程度上加重了炎癥反應。氧化應激過程中的產物水平可用于評價氧化應激損傷程度，MDA是脂質過氧化產物，而SOD是抗氧化應激的關鍵調節(jié)酶，T-AOC可用于衡量機體的總體抗氧化水平，故本研究采用MDA、SOD和T-AOC水平評價氧化應激水平〔11~13〕。研究發(fā)現(xiàn)Mel可有效緩解多種疾病狀態(tài)的氧化應激損傷〔14，15〕，與本研究的結果一致，如給予Mel處理后以上指標均獲改善，提示Mel對改善氧化應激損傷亦有較好的效果，推測可能原因為改善的炎癥反應在一定程度上減少了活性氧自由基的釋放并減輕了對抗氧化調節(jié)酶活性的抑制作用。

臟器衰竭是腹腔感染的常見并發(fā)癥，因此，加強臟器功能的保護具有重要意義。本研究進一步表明Mel對腹腔感染大鼠臟器功能具有保護效果，可能與其緩解炎癥反應和氧化應激損傷有關。

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〔2015-04-11修回〕

(編輯徐杰)

通訊作者：趙國軍(1971-)，男，碩士，副主任護師，主要從事護理研究。

〔中圖分類號〕R65

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)03-0570-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.024