馬青松， 王 丹， 龐玉新， 楊 全， 李小婷， 許羅鳳

(1.廣東藥學院 中藥學院， 廣東 廣州 510006； 2.中國熱帶農業(yè)科學院 熱帶作物品種資源研究所/農業(yè)部華南作物基因資源與種質創(chuàng)制重點開放實驗室， 海南 儋州 571737； 3.海南省艾納香工程研究中心， 海南 儋州 571737)

艾納香油對小鼠耳腫脹的抗炎效果

馬青松1,2,3， 王 丹2,3， 龐玉新2,3， 楊 全1*， 李小婷1,2,3， 許羅鳳1,2,3

(1.廣東藥學院 中藥學院， 廣東 廣州 510006； 2.中國熱帶農業(yè)科學院 熱帶作物品種資源研究所/農業(yè)部華南作物基因資源與種質創(chuàng)制重點開放實驗室， 海南 儋州 571737； 3.海南省艾納香工程研究中心， 海南 儋州 571737)

為了解艾納香油的抗炎作用機理，為其開發(fā)應用提供參考，將60只昆明種小鼠(SPF級)隨機分為艾納香油高(40%)、中(20%)、低(10%)劑量組，氫化可的松組，模型對照組和溶劑對照組，用二甲苯致炎，采用紫外可見分光光度法測定致炎耳組織中前列腺素E2(PGE2)和血清中丙二醛(MDA)的含量，并采用超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒測定血清SOD活性。結果表明：與模型對照組相比，艾納香油高、中、低劑量組對二甲苯所致的小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用(P<0.05)，降低PGE2含量，其中低劑量組可極顯著降低致炎耳組織中PGE2含量(P<0.01)；艾納香油高、低劑量組均顯著提高血清SOD的活性(P<0.05)，艾納香油可降低血清MDA含量(P>0.05)。艾納香油具有一定的抗炎作用，可能與降低炎癥區(qū)域PGE2含量和提高機體抗氧化損傷有關。

艾納香油； 耳腫脹； 抗炎； 前列腺素E2； 氧自由基

艾納香〔Blumeabalsamifera(L.) DC.〕為菊科艾納香屬植物艾納香的全草，在我國民間用于治療風寒感冒、產后風痛、跌打損傷、瘡癤痛腫、濕疹皮炎等，是黎族、苗族等少數(shù)民族的常用藥[1-2]。艾納香油是艾納香葉的粗升華物經(jīng)壓榨分離而得，含揮發(fā)油、油脂等成分，主要有l(wèi)-龍腦、樟腦、β-石竹烯、α-古蕓烯、γ-桉葉油醇、芳樟醇和愈創(chuàng)木醇等[2-3]。艾納香油有獨特的芳香氣味，被廣泛應用于香料和化妝品行業(yè)。目前，艾納香油藥理活性的報道集中在抗菌、抗氧化和抗酪氨酸激酶活性等[4-6]方面，對抗炎的研究鮮見報道。為此，筆者等在2015年4—6月采用小鼠急性耳腫脹模型，研究艾納香油皮膚外用對小鼠耳腫脹的抗炎癥作用，并測定炎癥組織的前列腺素E2(PGE2)含量和血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量，以了解其抗炎作用途徑，為其在抗炎方面的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 動物 昆明(KM)種小鼠60只，SPF級，均為雄性，體重18～22 g，由長沙市天勤生物技術有限公司提供，許可證編號：SCXK9(湘)2014-0011；試驗條件為白天∶夜晚=12 h∶12 h，室溫(22±2)℃，相對濕度(55±5)%，飼料、飲水自由攝食。

1.1.2 藥品與試劑 艾納香油，由貴州艾源生態(tài)藥業(yè)開發(fā)有限公司提供；丁酸氫化可的松乳膏(含量0.1%，批準文號：國藥準字H10940095)，天津金耀集團有限公司生產；SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所生產；有機試劑二甲苯、乙醇和甲醇均為分析純，由西隴化工股份有限公司生產。

1.1.3 儀器與設備 分析天平(CPA225D，Sartorius公司)，紫外可見分光光度計(2012PCS，UNICO公司)，電熱恒溫水浴鍋(HWS24，上海-恒科學儀器有限公司)，酶標儀(Elx800，美國Biotek公司)，化學實驗室打孔器(寧波凱迪科教儀器有限公司)等。

1.2 對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制效果測定

取小鼠60只，隨機分成6組：模型對照組，溶劑對照組，氫化可的松組，艾納香油高(40%)、中(20%)、低(10%)劑量組。移液槍吸取二甲苯0.5 mL，于各組小鼠左耳正、反面均勻涂抹，右耳不造模，作為自身對照。30 min后在致炎處涂抹給藥，溶劑對照組給予80%乙醇0.1 mL，氫化可的松組給予氫化可的松乳膏0.1 g，艾納香油高、中、低劑量組給予艾納香油0.1 mL，模型對照組不處理。給藥1 h后頸椎脫臼處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑6～7 mm化學實驗室打孔器分別在每只小鼠兩耳的同一部位打下圓耳片，稱重，以左右耳片質量之差表示腫脹程度，計算小鼠耳腫脹度和抑制率。

耳腫脹度=致炎側耳片重-非致炎側耳片重

抑制率=[(模型對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/模型對照組平均腫脹度]×100%

1.3 致炎耳組織PGE2含量的測定

取小鼠各組致炎耳組織放入小勻漿杯中，用眼科剪盡快剪碎組織，加入0.5 mL冰冷的生理鹽水(0.9% NaCl)，用內切式勻漿機勻漿，每次勻漿時間約10 s，勻漿4～5次，所得組織勻漿液倒入離心管，以3 000 r/min離心15 min，輕輕吸取上清液0.2 mL于試管內，加入0.5 moL/L氫氧化鉀甲醇液2.0 mL，50℃水浴20 min異構化，加甲醇1.0 mL稀釋。在299 nm(批量測定前進行預試驗，采用紫外可見分光光度計進行全波長掃描的最大吸收波長)處測定吸光度，蒸餾水空白調零，以吸光度值A代表各組PGE2的含量。

1.4 血清MDA和SOD的測定

血液于3 500 r/min離心15 min，吸取上清液即血清，-20℃下保存。MDA含量測定：取血清0.1 mL，加入20%三氯乙酸溶液至1.25 mL，搖勻后加入0.67%硫代巴比妥酸溶液1.0 mL，沸水浴加熱40 min，流水冷卻，3 500 r/min離心10 min，使沉淀完全，上清液于532 nm處測定吸光度。注意用移液器吸取上清液加入比色皿中，避免傾倒，以免沉淀進入比色皿影響吸光度，以10 nmol/mL四乙氧基丙烷溶液為標準品計算含量。SOD含量的測定按照SOD試劑盒說明書進行。

1.5 統(tǒng)計分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，小鼠耳腫脹度、PGE2含量、MDA含量和SOD活性均用平均數(shù)±標準誤表示，組間比較采用方差齊性檢驗和t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 抑制耳腫脹的效果

模型對照組小鼠造模后致炎耳出現(xiàn)明顯的紅腫現(xiàn)象，耳腫脹度最大，為14.42 mg(表1)，表示造模成功。與模型對照組相比，溶劑對照組對二甲苯所致的小鼠耳腫脹沒有顯著差異，表明溶劑對小鼠耳腫脹沒有產生明顯抑制作用；氫化可的松組具有極顯著抑制作用；艾納香油高、中、低劑量組均具有顯著抑制作用，耳腫脹抑制率分別為29.89%、28.67%和23.33%，表明3種劑量的艾納香油均可顯著抑制二甲苯所致的耳腫脹，且存在一定的劑量依賴關系。

表1 各組小鼠耳腫脹的抑制效果

Table 1 Inhibition effect of BBO on mouse ear edema induced by xylene (n=10)

組別Groups耳腫脹度/mgEarswellingdegree耳腫脹抑制率/%Inhibitionrateofearswelling模型對照ModelCK14．42±3．47-溶劑對照SolventCK13．62±2．665．58氫化可的松Hydrocortisone7．88±4．89??45．3340%艾納香油40%BBO10．11±3．23?29．8920%艾納香油20%BBO10．29±3．20?28．6710%艾納香油10%BBO11．36±3．99?23．33

注：*、**分別表示與模型對照組相比，在0.05和0.01水平上差異顯著(下同)。

Note: * and ** indicates significance of difference at 0.05 and 0.01 level compared with model CK respectively.The same below.

表2 各組炎癥小鼠PGE2、MDA的含量和SOD活性

2.2 耳組織中PGE2含量

從表2看出，與模型對照組相比，艾納香油各劑量組的PGE2含量均不同程度降低，其中10%艾納香油組的降低有統(tǒng)計學意義。表明，低劑量艾納香油能使致炎耳組織中PGE2含量極顯著降低。

2.3 血清MDA含量和SOD活性

從表2看出，與模型對照組相比，艾納香油各劑量組均可降低小鼠血清MDA含量，高、中和低劑量組分別為5.55 nmol/mL、4.95 nmol/mL和4.93 nmol/mL，但無統(tǒng)計學意義；艾納香各劑量組均可提高小鼠血清SOD活性，其中高劑量組和低劑量組能顯著提高SOD的活性。

3 結論與討論

急性炎癥是炎癥的早期階段，通過激活免疫系統(tǒng)的細胞介導，不同類型細胞發(fā)生聚集并導致各種促炎和抗炎介質的產生，如促炎介質PGE2[7]。PGE2是由趨化至炎癥灶的中性粒細胞釋放，是花生四烯酸經(jīng)環(huán)氧化酶而生成的一類重要炎癥介質[8]。測定結果表明，艾納香油低劑量組(10%)可極顯著降低耳腫脹小鼠致炎組織中PGE2含量，表明艾納香油的抗炎作用可能與降低炎癥區(qū)域PGE2的含量有關。

MDA是氧自由基與體內脂質反應產生的過氧化產物，可以反映機體受損的情況；SOD通過清除過量的超氧自由基，保護細胞膜免受損傷，是一種具有抗氧化損傷功能的金屬酶[9]。因此，測定MDA和SOD可反映炎癥對細胞損傷的程度以及氧自由基的高低。測定結果表明，艾納香油可在一定程度上提高小鼠血清SOD活性，降低MDA含量，表明艾納香油具有保護細胞膜和機體免受損傷作用。

艾納香油可以抑制二甲苯所致的耳腫脹，抑制炎癥介質水平，恢復機體的抗氧化酶活性，具有一定的抗炎效果。另外，艾納香油對皮膚刺激作用較弱，無毒副作用[10]，因此艾納香油在皮膚抗炎方面具有一定的優(yōu)勢，可以開發(fā)為具有潛在抗炎活性的藥用化妝品。

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(責任編輯： 馮 衛(wèi))

Anti-inflammatory Effect ofBlumeabalsamiferaOil Against Mouse Ear Edema

MA Qingsong1,2,3， WANG Dan2,3， PANG Yuxin2,3， YANG Quan1*， LI Xiaoting1,2,3， XU Luofeng1,2,3

(1.CollegeofTraditionalChineseMedicine，GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou,Guangdong510006; 2.InstituteofTropicalcropsGermplasmResources,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/SouthernChinaKeyLaboratoryofCropGeneResources,Danzhou,Hainan571737; 3.HainanResearchCenterforBlumeaBalsamiferaEngineering，Danzhou,Hainan571737,China)

60 SPF Kunming mice were randomly divided into 40% BBO group, 20% BBO group, 10% BBO group, hydrocortisone group, mode control group and solvent control group. PGE2and serum MDA content of the inflamed ear tissues was determined by UV spectrophotometry and the serum SOD activity was detected by SOD activity assay kit to discuss the anti-inflammatory mechanism ofB.balsamiferaoil (BBO) and provide a reference for development and application ofB.balsamiferaoil (BBO). Results:B.balsamiferaoil (BBO) has the significant inhibition effect on mouse ear edema treated with xylene compared with the mode control group (P<0.05) and reduces its PGE2content. BBO in 10% BBO group reduces PGE2content in the inflamed ear tissues very significantly. BBO in 40% BBO group and 10% BBO group increases serum SOD activity (P<0.05) and reduces serum MDA content (P<0.05). BBO is of a certain anti-inflammatory action, which may be related to reducing PGE2content in inflammation area and improving the body’s anti-oxidative damage.

Blumeabalsamiferaoil (BBO); ear edema; anti-inflammatory; prostaglandin E2; oxygen radical

2015-11-08； 2016-01-28修回

貴州省重大科技專項計劃項目[黔科合重大專項字(2013)6011]；海南省科技合作專項(6011，2013)；海南省科技合作專項“熱帶藥用植物種質資源評價、保護和開發(fā)利用”(KJHZ2015-15)

馬青松(1991-)，男，在讀碩士，研究方向：中藥質量控制。E-mail：maqing_song@126.com

*通訊作者：楊 全(1972-)，男，教授，博士，從事中藥資源開發(fā)研究。E-mail: yangquan7208@vip.163.com

1001-3601(2016)04-0169-0100-03

S853.7

A