陳 慧， 王會(huì)芳， 陳綿才*

(1.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所， 海南省病蟲害防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 海南 海口 571100； 2.海南大學(xué) 環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院， 海南 海口 571101)

象耳豆根結(jié)線蟲的研究進(jìn)展

陳 慧1,2， 王會(huì)芳1， 陳綿才1*

(1.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所， 海南省病蟲害防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 海南 ?？?571100； 2.海南大學(xué) 環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院， 海南 ?？?571101)

象耳豆根結(jié)線蟲(Meloidogyneenterolobii)致病力強(qiáng)、寄主范圍廣，種群擴(kuò)散迅速，給農(nóng)作物造成毀滅性危害，尤其在熱帶及亞熱帶地區(qū)根結(jié)線蟲常年危害嚴(yán)重，逐漸成為熱帶和亞熱帶地區(qū)最重要的根結(jié)線蟲之一。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，設(shè)施大棚和溫室在生產(chǎn)上的應(yīng)用不斷增多，導(dǎo)致土壤溫度上升，象耳豆根結(jié)線蟲向內(nèi)地蔓延速度不斷加快，已受到國內(nèi)外研究者的廣泛關(guān)注。從象耳豆根結(jié)線蟲的分布、鑒定、防治和進(jìn)化樹構(gòu)建等方面進(jìn)行綜述，旨在為同類研究與應(yīng)用提供參考。

根結(jié)線蟲； 鑒定； 防治； 象耳豆根結(jié)線蟲

根結(jié)線蟲(Meloidogynespp)作為世界性危害的線蟲種群之一，分布于世界各地，目前已有100余種，寄主植物達(dá)3 000多種，侵染危害經(jīng)濟(jì)作物達(dá)100種以上。根結(jié)線蟲自身可攜帶并傳播真菌、細(xì)菌和病毒等病原物，加重土傳病害的發(fā)生，引起并發(fā)癥和復(fù)合癥，造成更嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，也給病害的診斷帶來困難[1]。

象耳豆根結(jié)線蟲(Meloidogyneenterolobii)具有強(qiáng)致病力、寄主范圍廣、能克服線蟲Mi抗性基因[2-5]，對(duì)農(nóng)作物造成毀滅性的危害。尤其在熱帶、亞熱帶地區(qū)，根結(jié)線蟲無越冬現(xiàn)象，常年危害較為嚴(yán)重[6]，逐漸變?yōu)闊釒Ш蛠啛釒У貐^(qū)最重要的根結(jié)線蟲之一。象耳豆根結(jié)線蟲是優(yōu)勢(shì)種，種群擴(kuò)散快速，已成為華南地區(qū)重要根結(jié)線蟲種群。象耳豆根結(jié)線蟲于1983年由楊寶君等[7]在我國海南省儋州市象耳豆樹上發(fā)現(xiàn)并鑒定和命名，在我國海南省和廣東省分布較為廣泛。2013年，首次報(bào)道福建省象耳豆根結(jié)線蟲對(duì)福建番石榴果樹的危害[8]，可見象耳豆根結(jié)線蟲正在向內(nèi)地?cái)U(kuò)散。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，設(shè)施大棚、溫室不斷增加導(dǎo)致土壤溫度的上升，象耳豆根結(jié)線蟲入侵北方地區(qū)成為可能。2015年胡先奇[9]首次在云南元謀發(fā)現(xiàn)被象耳豆根結(jié)線蟲侵染的辣椒植株，這也是首次在云南發(fā)現(xiàn)象耳豆根結(jié)線蟲。象耳豆根結(jié)線蟲的蔓延速度不斷加快，如果不能及時(shí)控制，將會(huì)給我國農(nóng)業(yè)帶來巨大損失。

1 分布

根結(jié)線蟲屬線蟲分布于世界各地[10]，在非洲、美洲、歐洲均發(fā)現(xiàn)象耳豆根結(jié)線蟲的分布。法國是歐洲最早發(fā)現(xiàn)象耳豆根結(jié)線蟲的國家，瑞士在2008年也遭遇象耳豆根結(jié)線蟲的入侵，使瑞士的西紅柿和黃瓜減產(chǎn)；非洲報(bào)道象耳豆根結(jié)線蟲入侵的國家有布基納法索、科特迪瓦、馬拉維、塞內(nèi)加爾和南非；北美洲的美國和墨西哥均報(bào)道有象耳豆根結(jié)線蟲的入侵，且美國多個(gè)州都報(bào)道有象耳豆根結(jié)線蟲的入侵；中北美及加勒比海地區(qū)有哥斯達(dá)黎加、馬提尼克島、古巴、波多黎各、特立尼達(dá)和多巴哥報(bào)道有象耳豆根結(jié)線蟲的入侵；巴西和委內(nèi)瑞拉是目前報(bào)道有象耳豆根結(jié)線蟲入侵的2個(gè)南美洲國家；而在亞洲，中國和越南報(bào)道有象耳豆根結(jié)線蟲的入侵，我國的海南、廣東、福建、云南、遼寧均報(bào)道有象耳豆根結(jié)線蟲的分布，其中云南是最近才發(fā)現(xiàn)有象耳豆根結(jié)線蟲入侵的省份。

2 生物學(xué)特性

2.1 生活習(xí)性

象耳豆根結(jié)線蟲的完整生活史包括經(jīng)卵、幼蟲、成蟲3個(gè)階段[11]。成雌蟲具特征性的會(huì)陰花紋，常將卵產(chǎn)在尾部體外的膠質(zhì)卵囊內(nèi)。大田中以卵或其他蟲態(tài)在土壤中越冬，多在土層5～30 cm處活動(dòng)，無寄主植物條件下可存活3 a。土溫在10～40℃適于根結(jié)線蟲生活，侵染活力最強(qiáng)的溫度因不同種群而定，基本為15～30℃。

象耳豆根結(jié)線蟲與其他常見四大根結(jié)線蟲比較，50條/500 cm3初始接種密度就能侵染寄主植物，具有很強(qiáng)的致病力。最適侵染溫度為28～30℃，在熱帶、亞熱帶地區(qū)分布比較廣，象耳豆根結(jié)線蟲無越冬現(xiàn)象，這樣就加重了對(duì)該地區(qū)寄主植物的危害程度。44℃半致死時(shí)間也較長(zhǎng)，說明其對(duì)高溫的抗逆性相對(duì)較強(qiáng)，這也導(dǎo)致象耳豆根結(jié)線蟲更容易傳播。有報(bào)道象耳豆根結(jié)線蟲已經(jīng)在向云南[9]、福建[12]等內(nèi)陸地區(qū)蔓延，北方大量采用溫室種植使象耳豆根結(jié)線蟲蔓延到北方成為可能。

2.2 致病機(jī)理

植株根系被象耳豆根結(jié)線蟲侵染后，會(huì)對(duì)植株生長(zhǎng)特性、營養(yǎng)元素吸收和分配、水分代謝及其相關(guān)生理特性、保護(hù)酶系統(tǒng)、內(nèi)源激素水平和呼吸作用產(chǎn)生影響[13]，從而導(dǎo)致植株發(fā)病。

侵染植株后，植株根部形成根結(jié)，根結(jié)線蟲用相關(guān)水解酶、口針的機(jī)械壓力對(duì)根尖進(jìn)行降解、穿刺侵染造成的機(jī)械損傷，并且造成根部導(dǎo)管、表皮和皮層組織破裂，導(dǎo)致植株發(fā)生土傳病害的幾率上升。機(jī)械損傷誘發(fā)枯萎病菌、根腐病菌等土傳病原物侵染危害[14]。植株?duì)I養(yǎng)元素吸收和分配發(fā)生改變，致使植株生長(zhǎng)緩慢和早衰；植株水分代謝出現(xiàn)異常，降低水分在體內(nèi)的運(yùn)輸，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致葉子枯黃，甚至植株死亡；導(dǎo)致一些植株光合色素含量發(fā)生變化，影響光合速率，對(duì)植株生長(zhǎng)產(chǎn)生影響；使植株自身保護(hù)酶的活性發(fā)生嚴(yán)重變化，破壞保護(hù)系統(tǒng)，提高植株被侵染的概率；對(duì)植株內(nèi)源激素和呼吸作用同樣會(huì)有影響，內(nèi)源激素紊亂導(dǎo)致植株生理上發(fā)生一些病變，呼吸速率改變使植株生長(zhǎng)受到很大影響。根結(jié)線蟲表皮、側(cè)器、食道腺可降解寄主細(xì)胞壁，中膠層等，食道腺誘導(dǎo)巨型細(xì)胞形成[14]。這一系列的變化可導(dǎo)致被侵染的植株出現(xiàn)病變、減產(chǎn)、甚至死亡的現(xiàn)象[15]。

3 鑒定方法

目前，根結(jié)線蟲的鑒定方法主要利用形態(tài)學(xué)比較、同工酶分析、分子生物學(xué)技術(shù)等手段。分子生物學(xué)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)日益凸顯，成為目前應(yīng)用最廣的一種鑒定手段。傳統(tǒng)寄主鑒別實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞遺傳學(xué)方法一般用于初步鑒定，準(zhǔn)確鑒定需要進(jìn)一步采用分子生物學(xué)技術(shù)。

3.1 形態(tài)學(xué)比較

成熟雄蟲的形態(tài)呈線形，成熟雌蟲的形態(tài)呈梨形(圖示a)。雌蟲主要通過蟲體長(zhǎng)度與寬度、會(huì)陰花紋形狀、口針形態(tài)與長(zhǎng)度、排泄孔口位置來鑒定。雄蟲(圖示b)主要通過體型的頭部形態(tài)、側(cè)線數(shù)量、口針長(zhǎng)度與形態(tài)、口針基部至背食道腺開口距離等來鑒定。二齡幼蟲主要通過頭部、尾部的形態(tài)鑒定。

分子生物學(xué)鑒定方法未出現(xiàn)之前，會(huì)陰花紋形態(tài)學(xué)鑒定一直是根結(jié)線蟲鑒定的主要方式[1]。會(huì)陰花紋基本特征長(zhǎng)時(shí)間不會(huì)顯著改變，是一種相對(duì)可靠的鑒定方法。但經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的進(jìn)化，會(huì)陰花紋可能會(huì)產(chǎn)生一定變異，從而使鑒定結(jié)果產(chǎn)生差錯(cuò)，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。象耳豆根結(jié)線蟲雌蟲會(huì)陰花紋通常呈卵圓形,線紋平滑到粗糙(圖示c)，無明顯側(cè)線，陰門周圍通常無線紋。象耳豆根結(jié)線蟲部分會(huì)陰花紋形態(tài)與花生根結(jié)線蟲相似，與南方根結(jié)線蟲會(huì)陰花紋(圖示d)比較相似，有些看起來幾乎完全一致。因此，在象耳豆根結(jié)線蟲純化鑒定中，通常形態(tài)學(xué)鑒定與分子生物學(xué)手段結(jié)合進(jìn)行綜合鑒定。

圖示 根結(jié)線蟲雌蟲(a)、雄蟲(b)、象耳豆根結(jié)線蟲會(huì)陰花紋(c)與南方根結(jié)線蟲會(huì)陰花紋(d)[16]

Fig.Meloidogynesppfemales (a) ,Meloidogynesppmales (b) ,female perineal patterns ofM.enterolobii(c) , female perineal patterns ofM.incognita

3.2 同工酶分析

根結(jié)線蟲間種類變異非常小，同工酶分析酶譜變異小。根結(jié)線蟲雌成蟲酶譜是鑒定根結(jié)線蟲種的可靠標(biāo)記。酯酶和蘋果酸脫氫酶同工酶酶譜最為穩(wěn)定，具有種的特異性，對(duì)四大根結(jié)線蟲的鑒定十分有效。同工酶方法快速、準(zhǔn)確，而有的種會(huì)產(chǎn)生多種酶譜類型，給鑒定帶來干擾。同工酶分析適用于雌成蟲，不適用幼蟲或卵的檢測(cè)[17]。根結(jié)線蟲寄主小種的同工酶表型存在多態(tài)性,但其穩(wěn)定性和適用性受到質(zhì)疑[18]。目前同工酶分析僅可以鑒定到根結(jié)線蟲的種,尚不能區(qū)分寄主小種[19]。

3.3 PCR鑒定

植物根結(jié)線蟲DNA的差異通過PCR技術(shù)的診斷，不受基因的表達(dá)產(chǎn)物、環(huán)境和線蟲發(fā)育階段的影響，因此得到廣泛應(yīng)用。與形態(tài)學(xué)、同工酶鑒定法比較，PCR診斷法的突出優(yōu)勢(shì)是結(jié)果更加可靠、快捷、靈敏，適用于各階段蟲態(tài)。PCR鑒定技術(shù)主要基于植物根結(jié)線蟲之間IGS序列、mtDNA序列以及rDNA-ITS序列的不同進(jìn)行鑒定。

何旭峰[20]等在環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術(shù)的基礎(chǔ)上研究出從植物罹病組織中直接檢測(cè)象耳豆根結(jié)線蟲的快速檢測(cè)方法，該方法以rDNA-ITS序列為靶基因，在特定反應(yīng)條件下，45 min完成擴(kuò)增，擴(kuò)增效率極高，特異性強(qiáng)，靈敏度為1/200 000頭線蟲DNA，比其他PCR方法靈敏度高約100倍。該方法讓快速檢測(cè)方法的研究邁進(jìn)了一大步。楊意伯等[12]利用形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合rDNA-ITS序列分析、RAPD等分子生物學(xué)技術(shù)，研究了福建省象耳豆根結(jié)線蟲的形態(tài)學(xué)變異和遺傳多樣性。

這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，只有選擇合適的方法才能準(zhǔn)確有效鑒定出象耳豆根結(jié)線蟲。Blok等[21]發(fā)現(xiàn)，象耳豆根結(jié)線蟲的IGS序列和四大根結(jié)線蟲有明顯差異，可用于象耳豆根結(jié)線蟲單條線蟲的直接鑒定、混合線蟲群體中象耳豆根結(jié)線蟲的檢測(cè)[22]。Blok V C等[23]根據(jù)根結(jié)線蟲mtDNA差異，開發(fā)出象耳豆根結(jié)線蟲的PCR檢測(cè)方法，是迄今己報(bào)道較為可靠的根結(jié)線蟲檢測(cè)方法，靈敏度可達(dá)單條二齡幼蟲。

4 系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建

為確定生物體間正確的生物進(jìn)化關(guān)系，選擇合適的基因片段用于序列分析是必要的。根結(jié)線蟲的進(jìn)化關(guān)系通過同工酶分析、DNA雜交、SSU rDNA測(cè)序、rDNA-ITS序列和mtDNA等數(shù)據(jù)中推斷而來。利用DNA star軟件的MegAlign分析SSU rRNA基因的序列數(shù)據(jù)相似性和分化度，揭示了根結(jié)線蟲屬內(nèi)種間的相互關(guān)系。研究者利用從南方根結(jié)線蟲隨機(jī)分離pMi9的探針，針對(duì)南方根結(jié)線蟲、花生根結(jié)線蟲和瓜哇根結(jié)線蟲之間的進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行構(gòu)建[24]。

5 防治

5.1 化學(xué)藥劑防治

雖然化學(xué)農(nóng)藥會(huì)帶來諸多環(huán)境問題，但是化學(xué)防治手段依然是現(xiàn)在最主要的防治手段，其作用暫時(shí)是其他類型防治方法無法比擬的，防效最為顯著，價(jià)格也相對(duì)便宜?；瘜W(xué)農(nóng)藥防治根結(jié)線蟲具有快速、高效、通用性強(qiáng)和經(jīng)濟(jì)效益高等優(yōu)點(diǎn)。隨著高毒化學(xué)藥劑被逐漸禁用，市場(chǎng)上只有很少一部分控制根結(jié)線蟲的高效、低毒、低污染藥劑?，F(xiàn)在市場(chǎng)上流行的主要有無線美、海綠素、阿維菌素[25]以及康綠功臣[26]等生物藥劑。因此，生物農(nóng)藥的發(fā)展勢(shì)在必行，生物農(nóng)藥具有生產(chǎn)原料來源廣泛，對(duì)靶標(biāo)生物定向性好、作用持久、對(duì)其他生物毒副作用小和環(huán)境兼容性好等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為未來農(nóng)藥發(fā)展的新趨勢(shì)[27]。

5.2 生物防治

抗根結(jié)線蟲的微生物拮抗菌株主要有假單胞菌屬(Pseudomonas)[28]、擬青霉屬(Paecilomyces)[29]、巴斯德菌屬(Pasteurella)[30]、木霉屬(Trichoderma)[31]、芽孢桿菌(Bacillus)[32]和鏈霉菌屬(Streptomyces)[33]等，在大田中微生物拮抗根結(jié)線蟲菌株防治效果不穩(wěn)定，難以達(dá)到防治目的。陳芳等[34]研究表明，生物有機(jī)肥能有效抑制甜瓜土壤根結(jié)線蟲對(duì)大田的危害。筆者常使用空心菜培養(yǎng)象耳豆根結(jié)線蟲，種植空心菜的土壤中施用有機(jī)肥的作物明顯漲勢(shì)好，根結(jié)少，而未施用有機(jī)肥的空心菜能夠產(chǎn)生大量根結(jié)。象耳豆根結(jié)線蟲可克服Mi抗原基因的抗性，也不會(huì)被穿刺巴氏桿菌(Pasteuriapenetrans)寄生[20]。因此，象耳豆根結(jié)線蟲在生物防治方面有亟待解決的問題，隨著基因工程的不斷發(fā)展，卓侃等[35]將象耳豆根結(jié)線蟲寄生基因ME-PL-1利用RNA干擾技術(shù)進(jìn)行基因沉默，使ME-PL-1基因表達(dá)下調(diào)，從而降低象耳豆根結(jié)線蟲侵染力，為象耳豆根結(jié)線蟲防治提供了另一條途徑。

5.3 農(nóng)業(yè)防治

曹志平等[41]通過引入小麥秸稈抑制線蟲病的發(fā)生，添加適量的小麥秸稈對(duì)根結(jié)線蟲抑制率達(dá)94%，效果明顯。秸稈焚燒造成嚴(yán)重空氣污染，并且還殺死了土壤中的有益微生物。小麥秸稈還田模式生態(tài)環(huán)保，植食性線蟲種類大幅度下降，食線蟲微生物比列上升近1倍。

根結(jié)線蟲的農(nóng)業(yè)防治措施主要包括深翻土壤、輪作、高(低)溫抑蟲、無病土育苗、土壤處理和集中處理病根等傳統(tǒng)處理根結(jié)線蟲的方法。郭玉蓮[36]和房華[37]分別利用雞糞和茶樹菇的菌渣防治根結(jié)線蟲病發(fā)生的研究，雞糞水和茶樹菇的菌渣都能夠抑制根結(jié)線蟲種群生長(zhǎng)。馬駿[38]利用有機(jī)溶劑萃取芝麻渣有效成分，作用于根結(jié)線蟲，有良好的抑制效果。此外施用生物有機(jī)肥，不僅能促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，而且對(duì)土壤根結(jié)線蟲的抑制有明顯作用[34]。很多農(nóng)業(yè)防治研究對(duì)象耳豆根結(jié)線蟲種群生長(zhǎng)抑制也是通用的。因此，有機(jī)物不僅可以有效降低象耳豆根結(jié)線蟲的數(shù)量，還可以促進(jìn)作物生長(zhǎng)，改良品質(zhì)，提高作物抗性，現(xiàn)在很多病害都可以用農(nóng)業(yè)防治來輔助防治。

5.4 物理防治

物理防治是一個(gè)重要的防治手段，越來越受到廣大研究者的重視，與化學(xué)防治相比，物理防治的優(yōu)點(diǎn)較多，如具有環(huán)保、污染小、無殘留、不會(huì)產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)。順應(yīng)了當(dāng)今有機(jī)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的需求，因而物理方法是一種較理想的無公害防治方法[39-40]，可在象耳豆根結(jié)線蟲的防治上加以應(yīng)用。

5.5 抗性品種

抗病育種工作在中國起步晚，相比歐美國家研究還有很大差距。需與國外該領(lǐng)域領(lǐng)先地位的國家加強(qiáng)進(jìn)行技術(shù)合作和交流，提高中國抗根結(jié)線蟲病育種的水平。國外早已培育出了抗根結(jié)線蟲Mi基因的辣椒、番茄等抗性品種。由于象耳豆根結(jié)線蟲具有強(qiáng)致病力，能侵染Mi抗性基因的植物，目前，還未見抗象耳豆根結(jié)線蟲的抗性品種在生產(chǎn)上應(yīng)用。

5.6 植物檢疫

建立植物檢疫站，嚴(yán)格執(zhí)行植物檢疫法，嚴(yán)格做好檢疫工作，充分認(rèn)識(shí)植物檢疫的重要意義，加強(qiáng)檢查監(jiān)督，從源頭抓起，準(zhǔn)確鑒定病原類型[42]。然而，象耳豆根結(jié)線蟲在福建省也有報(bào)道，其種群為海南種群和哥斯達(dá)黎加種群2種不同的基因型，中國內(nèi)地一些溫室里也發(fā)現(xiàn)了象耳豆根結(jié)線蟲。說明我國植物檢疫工作還很薄弱。荷蘭、德國和英國等國家從進(jìn)口的植物中攔截到象耳豆根結(jié)線蟲，從而避免了象耳豆根結(jié)線蟲對(duì)這些國家的危害。由此看出，檢驗(yàn)檢疫在象耳豆根結(jié)線蟲防治工作中具有重要作用。應(yīng)做好象耳豆根結(jié)線蟲種群的植物檢疫工作，嚴(yán)格控制其種群的進(jìn)一步擴(kuò)散[12]。

6 展望

根結(jié)線蟲各種形態(tài)十分相似，鑒定難度大。鑒定方法可能存在諸多問題，需要形態(tài)學(xué)與生物化學(xué)、分子生物學(xué)和DNA條形碼等鑒定方法相結(jié)合，才能更加準(zhǔn)確地鑒定出根結(jié)線蟲種類[42]?？焖贆z測(cè)已經(jīng)成為根結(jié)線蟲鑒定的大趨勢(shì)，基因工程技術(shù)的應(yīng)用為根結(jié)線蟲快速檢測(cè)發(fā)展打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。何旭峰等[20]在環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術(shù)的基礎(chǔ)上研究表明，從植物罹病組織中直接檢測(cè)象耳豆根結(jié)線蟲的快速檢測(cè)方法，使快速檢測(cè)方法的研發(fā)向前邁進(jìn)一大步。楊意伯等[11]利用形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合rDNA-ITS序列分析、RAPD等分子生物學(xué)技術(shù)，研究了福建省象耳豆根結(jié)線蟲的形態(tài)學(xué)變異和遺傳多樣性。準(zhǔn)確的種群鑒定需要建立在形態(tài)學(xué)、同工酶表型、mtDNA-PCR-RFLP分析綜合運(yùn)用的基礎(chǔ)之上[43]。利用綜合鑒定檢測(cè)技術(shù)手段，嚴(yán)密監(jiān)控象耳豆根結(jié)線蟲最新發(fā)病動(dòng)向。

目前，對(duì)根結(jié)線蟲的防治還較困難，要很好地控制根結(jié)線蟲的危害，必須嚴(yán)格貫徹“預(yù)防為主、綜合防治”的植保方針。現(xiàn)用于防治象耳豆根結(jié)線蟲的主要方法還是化學(xué)防治，而殺線劑價(jià)格相對(duì)較高，導(dǎo)致防治成本居高不下?，F(xiàn)在市面上使用的殺線劑對(duì)環(huán)境造成污染，在今后研究中，應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)農(nóng)業(yè)防治、物理防治和生態(tài)防治等措施的研究，提高其防治效果。配合化學(xué)防治，綜合防治根結(jié)線蟲病害，控制象耳豆根結(jié)線蟲種群的進(jìn)一步擴(kuò)散，讓防治成本下降的同時(shí)提升防效?？共∮N是很多病害防治的主要方法，但是近年來抗根結(jié)線蟲病害育種進(jìn)展并不順利，很多技術(shù)難題未能攻克，導(dǎo)致防治線蟲的效果一直不好。象耳豆根結(jié)線蟲給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了極大的損失，應(yīng)該加大對(duì)防治象耳豆根結(jié)線蟲的研究力度，突破抗病育種方法防治象耳豆根結(jié)線蟲病害的技術(shù)難題。

象耳豆根結(jié)線蟲的相關(guān)研究表明，象耳豆根結(jié)線蟲種群擴(kuò)散趨勢(shì)的加快，已經(jīng)成為亞熱帶地區(qū)、內(nèi)陸溫室大棚一種優(yōu)勢(shì)種群。因此，隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)的發(fā)展，象耳豆根結(jié)線蟲的準(zhǔn)確鑒定工作、防治研究仍然是未來科研工作的熱點(diǎn)。鑒于對(duì)根結(jié)線蟲的鑒定、系統(tǒng)進(jìn)化、防治的研究不斷的深入，對(duì)其了解也不斷加深，為象耳豆根結(jié)線蟲的深入研究奠定了基礎(chǔ)。

[1] 簡(jiǎn) 恒.植物線蟲學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2011.

[2] 黃偉明,陳綿才,肖彤斌,等.海南島葫蘆科蔬菜根結(jié)線蟲種類鑒定[J].植物保護(hù),2011(1):70-73.

[3] Kiewnick S, Dessimoz M,Franck L.Effects of the Mi-1 and the N root-knot nematode resistance gene on infection and reproduction of Meloidogyne enterolobii on tomato and pepper cultivars[J].Journal of Nematology,2009,41:134-139.

[4] Kiewnick S,Karssen G,Brito JA,et al.First report of root-knot nematode Meloidogyne enterolobii on tomato and cucumber in Switzerland[J].Plant Disease,2008,92:1370.

[5] 卓 侃,胡茂秀,廖金鈴,等.廣東省和海南省象耳豆根結(jié)線蟲的鑒定[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,27(2):193-197.

[6] 黃惠琴,孫前光,.鮑時(shí)翔,等.海南省穿刺巴斯德芽菌資源調(diào)查及其系統(tǒng)發(fā)育分析[J].中國生物防治學(xué)報(bào),2013,29(4):607-612.

[7] 練冬梅,王會(huì)芳,陳綿才.象耳豆根結(jié)線蟲Hsp70基因的克隆與原核表達(dá)[J].植物病理學(xué)報(bào),2015,45(1):7-13.

[8] 楊意伯.福建龍眼、荔枝、番石榴線蟲病害調(diào)查及寄生線蟲種類鑒定[D].福州:福建農(nóng)林大學(xué),2013.

[9] Wang Y, Hu X Q.First report of Meloidogyne enterolobii on Hot Pepper in China[J].The American phytopathological society,2015,99(4).557.

[10] 李文瑜.耿馬縣煙草根結(jié)線蟲病發(fā)生與防治研究[D].長(zhǎng)沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

[11] 何學(xué)文.中華卵索線蟲的生物學(xué)特性及其體內(nèi)培養(yǎng)的初步研究[D].武漢:華中師范大學(xué),1999.

[12] 楊意伯.福建龍眼、荔枝、番石榴線蟲病害調(diào)查及寄生線蟲種類鑒定[D].福州:福建農(nóng)林大學(xué),2013.

[13] 許 華,汪 波,蔣夢(mèng)嬌.根結(jié)線蟲的致病機(jī)理和防治研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(31):19154-19155,19161.

[14] 王艷艷,魏 珉,王秀峰,等.蔬菜根結(jié)線蟲致病機(jī)理及其防控技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國蔬菜,2014(2):9-14.

[15] 龍海波,孫艷芳,白 成,等.海南省象耳豆根結(jié)線蟲的鑒定研究[J].熱帶作物學(xué)報(bào),2015,36(2):371-376.

[16] 符美英,芮 凱,陳綿才,等.海南島象耳豆根結(jié)線蟲的種類鑒定及其rDNA-ITS序列分析[J].生物安全學(xué)報(bào),2012,21(1):79-84.

[17] 廖金鈴,蔣 寒,孫龍華.中國南方地區(qū)作物根結(jié)線蟲種和小種的鑒定[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,22(6):544-548.

[18] Careniro R M D G,Almeida A R A,Quenneherave P.Enzyme phenotype of Meloidogyne spp. populations[J].Nematology,2000,2:645-654.

[19] 喻盛甫,胡先奇,王 楊.云南煙草根結(jié)線蟲優(yōu)勢(shì)種群動(dòng)態(tài)規(guī)律[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1998(3):52-58.

[20] 何旭峰,黃文坤,彭德良,等.植物罹病組織中象耳豆根結(jié)線蟲的LAMP快速檢測(cè)方法[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,46(3):534-544.

[21] Blok V C,Philips M S,Fargette M. Comparison of sequences from the ribosomal DNA intergenic region of Meloidogyne mayaguensis and other major tropical root-knot nematodes[J]. The Journal of Nematology, 1997,29(1):16-22.

[22] 龍 海,劉 昊,徐建華.象耳豆根結(jié)線蟲的PCR鑒定和檢測(cè)方法[J].植物病理學(xué)報(bào),2006,36(2):109-115.

[23] Blok V C,Wishart J,Fargette M,et al.Mitochondrial DNA differences distinguishing Meloidogyne mayaguensis from the major species of tropical root-knot nematodes[J].Nematology,2002,4(7):773-781.

[24] Xue B,Bzillie D L,Beckenbach K,et al.DNA hybridization probes for studying the affinities of three Meloidogyne populations[J].Fundamental and Applied Hematology,1992,15:35-41.

[25] 盧樹昌,劉慧芹,王小波,等.幾種藥劑對(duì)土壤根結(jié)線蟲的防效及對(duì)番茄根系生理性狀的影響[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2012(1):70-73.

[26] 劉 霆,裘季燕,劉德文,等.康綠功臣可濕性粉劑防治番茄根結(jié)線蟲的效果[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,51(3):503-505.

[27] 蘇 琴.化學(xué)防治與生物防治的優(yōu)缺點(diǎn)淺析[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技,2011(6):84-85.

[28] Zaki A S,Ashi Q,Akhtar M S.Biocontrol of root-knot nematode Meloidogyrce irzcogrzita by Pseudomonas and Bacillus isolates on Pisum sativum[J].Arch.Phytopath.Plant Prot.,2009,42(12):1154-1164.

[29] 劉俊男.秸稈反應(yīng)堆中淡紫擬青霉與根結(jié)線蟲、尖孢鐮刀菌互作的研究[D].哈爾濱:東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

[30] 卜祥霞,簡(jiǎn) 恒,劉 倩,等.穿刺巴斯德菌活體大量繁殖體系的優(yōu)化[J].中國生物防治學(xué)報(bào),2012,28(3):408-414.

[31] 張樹武,徐秉良,古麗君,等.長(zhǎng)枝木霉對(duì)南方根結(jié)線蟲致死和寄生作用的顯微觀察及測(cè)定[J].植物保護(hù),2013,39(4):46-51.

[32] 連玲麗.芽孢桿菌的生防菌株篩選及其抑病機(jī)理[D].福州:福建農(nóng)林大學(xué),2007.

[33] 張艷杰,赤國彤,劉大群,等.玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63抗南方根結(jié)線蟲相關(guān)酶活性及其防效[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,22(4):184-189.

[34] 陳 芳,冉 煒,沈其榮,等.生物有機(jī)肥對(duì)甜瓜根結(jié)線蟲病的田間防治效果研究[J].植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào),2011,17(5):1262-1267.

[35] 卓 侃,遲遠(yuǎn)麗,廖金鈴,等.象耳豆根結(jié)線蟲果膠酸裂解酶基因的克隆及其RNAi效應(yīng)分析[J].植物病理學(xué)報(bào),2011,41(5):473-481.

[36] 郭玉蓮.雞糞防治溫室蔬菜根結(jié)線蟲病研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2004,20(2):201-202.

[37] 房 華,廖金鈴,吳慶麗,等.茶樹菇菌渣對(duì)番茄根結(jié)線蟲病防治的初步研究[J].萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,21(2):182-184.

[38] 馬 駿.有機(jī)質(zhì)添加劑在防治番茄根結(jié)線蟲病中的應(yīng)用[D].鄭州:河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

[39] 唐 顥,趙超藝,候柏華,等.茶園害蟲綜合防治技術(shù)及其應(yīng)用現(xiàn)狀概述[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,8(4):49-52.

[40] 梁紅娟.不同土壤消毒方式克服黃瓜枯萎病及根結(jié)線蟲病害的研究[D].杭州:浙江大學(xué),2012.

[41] 曹志平,周樂昕,韓雪梅.引入小麥秸稈抑制番茄根結(jié)線蟲病[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2010,30(3):765-773.

[42] 顧建鋒,王江嶺,王金成.根結(jié)線蟲非中國種問題初探[J].植物檢疫,2012,26(3):58-60.

[43] 芮 凱,陳綿才,郭安平,等.海南省番石榴病原根結(jié)線蟲種類鑒定[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,26(4):54-57.

(責(zé)任編輯： 劉 海)

Research Progress ofMeloidogyneenterolobii

CHEN Hui1,2， WANG Huifang1， CHEN Miancai1*

(1.InstituteofEnvironment&PlantProtection,HainanAcademyofAgriculturalSciences,HainanKeyLaboratoryforControlofPlantDiseasesandInsectPests,Haikou,Hainan571100; 2.EnvironmentandPlantProtectionCollege,HainanUniversity,Haikou,Hainan571101,China)

With the characteristics of highly pathogenic, widely host range and rapidly diffusion,M.enterolobiimay cause serious devastation to crops, especially in tropical and subtropical regions. The increasing application of greenhouses and greenhouse facilities, as the development of modern agriculture, lead to the rising soil temperature, which accelerating the diffusion ofM.enterolobiiworms that has got extensive attention of the scholars in domestic and abroad. The authors describes theM.enterolobiiin the view of identification, distribution and the construction of evolutionary tree in order to provide a theoretical reference for related studies.

Meloidogynespp；identification；prevention and control；Meloidogyneenterolobii

2015-11-16; 2016-05-08修回

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31360432，31260424)；公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201103018)

陳 慧(1991-)，男，在讀碩士，研究方向：植物病原線蟲。E-mail：535880491@qq.com

*通訊作者：陳綿才(1959-)，男，研究員，碩士，從事植物病理學(xué)研究。E-mail：miancaichen@163.com

1001-3601(2016)05-0200-0051-05

S43

A