陳素慧　謝偉容　黃建軍

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虎尾輪根提取物對脾虛小鼠的影響

陳素慧謝偉容黃建軍

【摘要】目的：篩選虎尾輪根健脾固胃的有效部位。方法：采用系統(tǒng)溶劑提取法對虎尾輪根進行提取、分離得到不同部位的提取物，并采用大黃所致脾虛模型及飲食失節(jié)型脾虛模型，以各組提取液灌胃給藥，觀察各種提取液對脾虛模型小鼠的影響。結(jié)果：虎尾輪根的乙醇提取總浸膏、乙酸乙酯部位、水飽和正丁醇部位可增加脾虛小鼠體質(zhì)量，提高胸腺和脾臟指數(shù)，改善小鼠脾虛癥狀，具有健脾固胃的功效，對小鼠脾虛模型有較好的抗脾虛作用，其他部位活性較弱。結(jié)論：虎尾輪根的總浸膏、乙酸乙酯、水飽和正丁醇部位有較好的抗脾虛的作用。

【關(guān)鍵詞】虎尾輪根；提取物；脾虛

虎尾輪為豆科貍尾草屬植物長穗貓尾射(Urariacrinita)的全草，主要分布于云南、廣東、廣西、福建、臺灣等省份。據(jù)《中藥大辭典》、《閩南民間草藥》、《臺灣民間藥》記載，虎尾輪有活血通絡(luò)、健脾和胃、除濕化痰的功效，用于治療肺結(jié)核、咳嗽、肺癰、吐血、尿血、胃十二指腸潰瘍、小兒疳積、白帶、關(guān)節(jié)炎等疾病。虎尾輪在閩南、臺灣等地區(qū)廣泛使用為食療藥材，閩南地區(qū)常作藥膳，用于小兒脾胃不開、小兒疳積等癥；臺灣民間用于小兒發(fā)育不良之轉(zhuǎn)骨，以及運動傷害和跌打內(nèi)外傷[1]。虎尾輪根具有理氣、化痰、益腎的功效[2]。

課題組前期對虎尾輪根和莖已進行初步化學(xué)研究[3-4]，發(fā)現(xiàn)虎尾輪根主要含有黃酮類、皂苷、糖類、氨基酸類、酚類、有機酸以及甾體等物質(zhì)；莖中含有糖類、黃酮及其苷類。但對其固胃健脾的有效成分尚不清晰。研究采用80%乙醇對虎尾輪根進行提取，分離得到不同部位的提取物，并觀察各種提取物對大黃所致脾虛模型及食失節(jié)型脾虛模型小鼠的影響。

1儀器與材料

1.1動物健康昆明小鼠，清潔級，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，由漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院機能實驗室提供。

1.2藥品與試劑虎尾輪采自福建漳州市南靖縣和溪鎮(zhèn)，經(jīng)漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院藥學(xué)系實訓(xùn)中心巫慶珍高級實驗師鑒定為豆科Urariacrinita(L.) Desv.ex DC.的根；歸脾丸(批號：20140826，九芝堂股份有限公司)；大黃藥材(漳州聚善堂藥業(yè)有限公司)。其余試劑均為分析純。

1.3儀器電子天平AB135-S(十萬分之一)(梅特勒，瑞士)；KQ-50B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；R50-2B 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)；SHB-Ⅲ型水循環(huán)式多用真空泵(上海亞榮有限公司)。

2方法

2.1供試品的制備取虎尾輪根粗粉，80%乙醇回流提取3次，提取液減壓回收得浸膏，浸膏加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，萃取液減壓回收溶劑，得石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏、正丁醇浸膏和水浸膏。灌胃前分別用0.5% CMC-Na溶液配制成適宜濃度，分別灌胃給藥10ml/kg。

2.2大黃[2，5，6]所致脾虛模型的建立

2.2.1造模將80只小鼠隨機分為正常組、模型組、陽性對照組、醇提組、石油醚組、乙酸乙酯組、水飽和正丁醇組、水組，每組10只。分別記錄每只動物體質(zhì)量，適應(yīng)性正常飼養(yǎng)。除正常組外，各組灌胃給予大黃水煎液(0.5g/10g)，連續(xù)8d；正常組給予同體積蒸餾水。最后一次灌胃大黃水煎液后，記錄各組小鼠體質(zhì)量。

2.2.2給藥第9天起，正常對照組與模型組給予同體積蒸餾水；各提取部位組和醇提取組給予1.2g生藥/(kg·d)；陽性組灌胃給予歸脾丸0.064g/(kg·d)；連續(xù)給藥7d。

2.2.3腸推進率的測定各組動物最后一次給藥前再次記錄各組小鼠體質(zhì)量，記錄完畢后禁食不禁水24h，試驗時空白組給予墨汁，其他組以墨汁稀釋藥物，按0.3ml/10g體質(zhì)量灌胃，30min后頸部脫臼處死，迅速解剖取出腸道，用直尺量取幽門至墨汁前沿的距離作為在腸道中的推進距離，從幽門至回盲部的總長度作為小腸總長度，計算推進率，推進率(%)=墨汁在小腸內(nèi)推進距離(cm)/小腸總長度(cm)×100%。

2.2.4胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)的測定將處死后的小鼠取出胸腺與脾臟，稱體質(zhì)量，計算臟器系數(shù)。

2.3飲食失節(jié)型脾虛模型的建立[7]

2.3.1造模將80只小鼠隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組(歸脾丸組)、醇提組(總膏組)、石油醚組、乙酸乙酯組、水飽和正丁醇組、水浸膏組，每組10只。分別記錄每只動物體質(zhì)量，適應(yīng)性正常飼養(yǎng)。除正常組外，各組每天灌胃給予精煉豬油脂(0.2ml/10g)，同時喂食卷心菜，連續(xù)8d；正常組給予同體積蒸餾水。

2.3.2給藥第9天起，正常對照組與模型組給予同體積蒸餾水；各提取部位組和總膏組給予1.2g生藥/(kg·d)；陽性對照組灌胃給予歸脾丸0.064g/(kg·d)；連續(xù)給藥7d。

2.3.3一般觀察以及體重測量觀察并記錄小鼠活動、飲食、體形變化及泄瀉、納呆、毛色等情況。每天灌胃前測體質(zhì)量。

3結(jié)果

3.1對大黃所致小鼠脾虛模型的影響

3.1.1對小鼠腸推進率的影響大黃水煎液灌胃造模后，模型組與正常對照組相比較，小鼠大腸推進距離變長，推進率增加；給藥組均能不同程度地降低脾虛小鼠的腸推進距離，乙醇提取總膏組、乙酸乙酯組、正丁醇組組的腸推進距離降低較為顯著(P<0.05)。結(jié)果表明，造模后小鼠推進率增加，乙醇提取總膏組、乙酸乙酯組、正丁醇組可以明顯降低推進率，見表1。

表1　虎尾輪根對大黃致小鼠脾虛模型腸推進率的影響

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型對照組比較，*P<0.05。

3.1.2對小鼠胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)的影響模型組小鼠自行恢復(fù)一周后，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)略有恢復(fù)，但顯著低于正常對照組(P<0.05)；與模型組相比，各給藥組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)都有升高的趨勢，而乙醇提取總浸膏組、乙酸乙酯組、正丁醇組增加較為明顯(P<0.05)。結(jié)果表明，造模后小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)降低；乙醇提取總浸膏組、乙酸乙酯組、正丁醇組可以明顯增加胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。見表2。

表2　虎尾輪根對大黃致小鼠脾虛模型腸胸腺

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型對照組比較，*P<0.05。

3.2對飲食失節(jié)型脾虛模型的影響小鼠給予喂食精煉豬油和卷心菜后，第3天開始出現(xiàn)泄瀉，為黃色溏軟便；繼續(xù)喂食，第5天開始出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍，行動遲緩，形體消瘦，被毛稀疏、散亂等癥狀。按“2.3.2”下方法給藥，給藥3d后，各給藥組小鼠飲食量逐漸增加，體重略增，大便趨于正常，給藥結(jié)束后大便成型。而模型組小鼠自行恢復(fù)，狀況參差不齊，恢復(fù)程度和速度弱于給藥組。結(jié)果見表3。

±s)

注：與模型對照組比較，*P<0.05。

4討論

目前，造脾虛模型的方法各異，本文采用大黃苦寒瀉下法和飲食失節(jié)法復(fù)制脾虛模型。大黃苦寒瀉下法方法簡單，易于操作，用大黃水煎液灌胃，動物出現(xiàn)便溏、形體消瘦、毛色枯槁等癥狀與臨床脾虛癥狀相同，說明實驗建立的脾虛模型成功。胸腺和脾臟是人體重要的免疫器官，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)能反映二者的發(fā)育和功能狀況，間接反映了機體的免疫水平[8]，實驗中以腸墨汁推進率、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)為考察指標。結(jié)果表明，虎尾輪根乙醇提取總浸膏組、乙酸乙酯組、水飽和正丁醇組給藥后能明顯降低小鼠腸推進率，提高胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。將小鼠喂食精煉豬油和卷心菜，復(fù)制飲食失節(jié)型脾虛模型，實驗動物出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、行動遲緩、形體消瘦、被毛稀疏、散亂等癥狀，說明實驗建立的脾虛模型成功；乙酸乙酯和水飽和正丁醇組給藥后小鼠體質(zhì)量增加較明顯，大便成型，具有改善脾虛癥狀的功能。

實驗結(jié)果表明，虎尾輪根提取物可增加脾虛小鼠體質(zhì)量，提高胸腺和脾臟指數(shù)，改善小鼠脾虛癥狀，具有健脾固胃的功效，而乙酸乙酯和水飽和正丁醇部位效果更優(yōu)。實驗中，虎尾輪根浸膏得率為7.3%，萃取后，各提取液的得率分別為石油醚層為0.25%、乙酸乙酯層為0.4%、水飽和正丁醇層為0.8%、水層為3.5%?；⑽草喐悬S酮類、皂苷類成分，極性較大，有效物質(zhì)主要存在于正丁醇層和乙酸乙酯層，為虎尾輪藥用價值的研究奠定實驗基礎(chǔ)。

參考文獻

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[4]黃建軍,高佳,巫慶珍,等.虎尾輪根和莖的化學(xué)成分比較[J].北方藥學(xué),2012,9(10):36.

[5]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學(xué)[M]．3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002.

[6]李柏群,陳紹成,彭騰,等.風(fēng)芍六君子湯治療脾虛腹瀉型腸易激綜合征的藥效學(xué)研究[J].中成藥,2012,34(11):2229-2233.

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[8]王燕燕,張錦文,郭潔茹,等.虎尾輪根提取物對腎陽虛模型小鼠的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2011,30(3):292-294.

(收稿日期：2015.10.08)

【中圖分類號】R285.5

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)01-0017-02

作者簡介：陳素慧(1982-)，女，講師。E-mail：chensuhui2005@163.com

基金項目：福建省衛(wèi)生廳資助項目(2011-1-48)。