馬冰聰

阜蒙縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測站

農(nóng)殘快速檢測技術(shù)及常見問題解決方法

馬冰聰

阜蒙縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測站

一、農(nóng)殘快速檢測原理

有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥是我國目前使用量最大的農(nóng)藥，而且較多的是禁止使用在果品、蔬菜上的。該類農(nóng)藥在生物體內(nèi)可以與乙酰膽堿酯酶（Ache）結(jié)合，并不易分離，即乙酰膽堿酯酶的活性被抑制，致使人體神經(jīng)傳導(dǎo)中的乙酰膽堿不能水解而積累，神經(jīng)過度興奮，出現(xiàn)中毒癥狀甚至死亡?；诖嗽恚砸阴Ｄ憠A酯酶同蔬菜的萃取液反應(yīng)，若受到抑制即表示該萃取液中含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留，由于酶的活性被破壞，使之不能正常分解乙酰膽堿，根據(jù)乙酰膽堿酯酶活性變化程度來測定果品蔬菜樣品中的殘留農(nóng)藥。

二、農(nóng)殘快速檢測操作流程（以SJ-10農(nóng)藥殘留檢測儀為例）

1.前期準(zhǔn)備

啟動SJ－10農(nóng)藥殘留檢測儀讓其自檢并預(yù)熱10～15分鐘，以確保光源穩(wěn)定；打開電腦，登錄復(fù)訊農(nóng)藥殘留檢測系統(tǒng)，進行端口設(shè)置并連接檢測儀；對前一天對照液的參照值及檢測信息進行清零。

2.對照液的制備及測試

對照液的制備：取酶100ul，緩沖液2.5毫升，加入比色皿中，混勻，再加入顯色劑100ul，底物20ul。搖勻后立即將比色皿放入儀器中1/1進行對照測試，測試結(jié)果應(yīng)在0.3～0.8之間，若超出此范圍，疑似操作有誤或顯色時間過長，需重做，直至合格后保存結(jié)果。

3.待測樣品信息的錄入

按待測樣品的編號順序錄入該樣品的生產(chǎn)單位，樣品名稱、檢測標(biāo)準(zhǔn)等信息。

4.檢測樣品液的制備

(1)取2克果蔬樣品（葉菜剪成1厘米見方的小片，瓜果取1厘米見方的橫截面）放入三角瓶中，加入10毫升緩沖液，振蕩提取2分鐘后過濾，取出清夜即為待測試液。

(2)取酶100ul，待測液2.5毫升，加入比色皿中，混勻（靜置抑制10分鐘）后，加入顯色劑100ul，底物20ul。蓋上比色皿顛倒兩次后立即把比色皿放入儀器中進行樣品測試。

5.農(nóng)殘檢測結(jié)果判定

(1)若樣品的抑制率小于50%，說明試樣中的農(nóng)藥殘毒性小，該樣品合格。

（2）若樣品的抑制率大于或等于50%，說明試樣中的農(nóng)藥殘毒性大，該樣品不合格，通知暫停交易，并進行追蹤改進和報告主管部門。

（3）若樣品的抑制率在40%～50%之間為疑似農(nóng)殘超標(biāo)樣品，需復(fù)查。如果復(fù)查后抑制率還是在40%以上，則需氣相色譜等儀器分析法作進一步的確認(rèn)或通知暫停交易，并進行追蹤改進和報告主管部門。

三、常見的檢測結(jié)果異?，F(xiàn)象

1.假陽性原因分析及解決方法

(1)檢查空白對照值是否正確。抑制率是樣品檢測值與空白對照值的比率，故空白對照值是檢測結(jié)果正確與否的關(guān)鍵。當(dāng)出現(xiàn)系統(tǒng)性的假陽性（即全部或多數(shù)樣品是陽性）時，應(yīng)首先檢查對照值是否正常和準(zhǔn)確。

(2)檢查取樣方法是否正確。取樣方法不當(dāng)會造成假陽性，如生姜、蔥、蒜、韭菜、香菜等蔬菜因其本身含有對酶活性有影響的次生物質(zhì)，以上樣品應(yīng)使用整株浸泡法或沖洗法取樣。如果在浸泡或沖洗時樣品中汁液流出，檢測就會出現(xiàn)假陽性。所以針對此類樣品，應(yīng)考慮出現(xiàn)陽性時是否為操作不當(dāng)所致。

(3)檢查反應(yīng)溫度是否一致。溫度對酶的活性和穩(wěn)定性影響很大，所以實驗應(yīng)在恒溫條件下進行。冬季，實驗室如不能滿足恒溫條件，應(yīng)將10分鐘的酶反應(yīng)過程放在水浴鍋中進行；夏季，室溫較高時酶液活性會隨著時間延長而明顯下降。上午配制好的試劑，用在上午時做一般要比用在下午時做的對照檢測值大，若下午進行檢測時沒有重新做對照檢測，結(jié)果常常會出現(xiàn)假陽性。所以當(dāng)溫度有變化時，檢測前務(wù)必先做空白對照。

(4)檢查酶抑制反應(yīng)時間。抑制時間長短影響酶的抑制率，隨著抑制時間的延長，抑制率也隨之提高。如果樣品加入底物后沒有迅速放入比色池，延長了酶反應(yīng)時間，結(jié)果就會同時出現(xiàn)多個抑制率為陽性（實為假陽性）。所以實驗中必須使空白和樣品的反應(yīng)時間完全一致。

2.出現(xiàn)0.01%或負值的原因

檢測中出現(xiàn)多個0.01%或負值一般是因?qū)嶋H檢測吸光值大于對照檢測吸光值而造成的系統(tǒng)錯誤。抑制率是樣品值與對照值比較而得到的，所以當(dāng)做對照檢測時加入的試劑量不準(zhǔn)確，導(dǎo)致測出的對照值小于實際值，就會出現(xiàn)抑制率中有多個0.01%的異?，F(xiàn)象。這種情況下首先要重做對照，并注意移液槍的使用方式，避免溶液洗空或推液不盡導(dǎo)致所取溶液體積不準(zhǔn)而造成檢測數(shù)據(jù)偏差。

3.個別通道無數(shù)值的原因

(1)當(dāng)比色池中某個通道紫外燈不亮，檢測時該通道將不會出現(xiàn)抑制率。所以如有通道無數(shù)值，先檢查速測儀器的紫外光燈光源是不是出現(xiàn)了故障。

(2)如果確認(rèn)儀器通道沒有出現(xiàn)故障，檢測人員應(yīng)再回想是否某個樣品未加入某類試劑（酶、底物、顯色劑）。