薛穎，高峰，張克勤,3，肖鳳艷,3*

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林132101；2.吉林紫鑫般若藥業(yè)有限公司，吉林吉林132300；3.長白山動植物資源利用與保護吉林省高校重點實驗室，吉林吉林132101）

烏腺金絲桃中總黃酮超聲法提取工藝研究

薛穎1，高峰2，張克勤1,3，肖鳳艷1,3*

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林132101；2.吉林紫鑫般若藥業(yè)有限公司，吉林吉林132300；3.長白山動植物資源利用與保護吉林省高校重點實驗室，吉林吉林132101）

本試驗以總黃酮的提取率為評價指標(biāo)，通過正交試驗法篩選烏腺金絲桃總黃酮超聲提取最佳工藝。結(jié)果表明：超聲提取總黃酮的影響因素順序為乙醇濃度>溫度>超聲功率>提取時間>料液比，最佳工藝條件是用樣品22倍量的體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇，采用超聲功率120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，在此條件下總黃酮提取率是8.15%。

烏腺金絲桃；總黃酮；超聲提??；正交設(shè)計

烏腺金絲桃是藤黃科草本植物，功效為鎮(zhèn)痛、止血、通乳，主要應(yīng)用于吐血、子宮出血、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛、跌打損傷、乳腺炎[1]。研究表明，其具有治療心臟病、抗腫瘤等作用，主要藥效物質(zhì)為黃酮類化合物[2,3]。黃酮類化合物因其具有抗菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、保肝、利尿、調(diào)節(jié)血管滲透性、延緩衰老、防護紫外線損傷等廣譜的藥理作用引人矚目[4]。鑒于烏腺金絲桃總黃酮提取工藝的研究少見報道[5]，且用超聲法從烏腺金絲桃中提取總黃酮的研究未見文獻報道，筆者在本試驗中采用正交試驗設(shè)計，對影響其提取率的多個因素進行了考察，以期優(yōu)選出超聲法提取烏腺金絲總黃酮的最佳工藝。

1 材料

1.1 試劑與材料

本試驗材料為烏腺金絲桃葉，于2015年9月采自吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院左家校區(qū)烏腺金絲桃試驗田，鼓風(fēng)烘干（50℃）備用。金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品；無水乙醇、甲醇、亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉。

1.2 儀器

電熱鼓風(fēng)干燥箱、電子分析天平、循環(huán)水式真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗器、紫外可見分光光度計。

2 方法

2.1 試驗流程

樣品稱重超聲提取抽濾濾液濃縮定容離心測定含量計算提取率。2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

精密稱取金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品3.8毫克，溶解于甲醇中，制成濃度為380微克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)品母液。

2.3 空白溶液的配制

取甲醇0.5毫升，加入5%NaNO2溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，加入10%Al（NO3）3溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，再加入4%NaOH溶液3毫升，搖勻，放置15分鐘，即為空白對照液[3]。

2.4 測定波長的選擇

對2份樣品和金絲桃苷對照品經(jīng)顯色后，在350～700nm范圍內(nèi)掃描。金絲桃苷對照品的λmax＝530nm處，樣品提取液的λmax＝525～527nm，故選擇顯色后在527nm處測定吸光度。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取母液稀釋得系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別取各濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5毫升，按2.3項操作，離心，在527nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，金絲桃苷濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程y=0.0006x+0.00765（R2=0.99905），線性范圍是5.93～380微克/毫升。

2.6 樣品溶液的制備和總黃酮提取率的計算

取藥材粗粉2.0克，精密稱取，用乙醇溶液超聲提取。提取液抽濾濃縮，用甲醇定容并依據(jù)試驗情況適當(dāng)稀釋，精密量取溶液0.5毫升，按按2.5項操作，測定吸光度（A），計算總黃酮的含量及總黃酮的提取率，提取率=樣品中總黃酮的量/藥材重量×100%。

2.7 單因素考察

平行條件分別考察乙醇濃度、溫度、提取時間、料液比、超聲功率在不同水平下對烏腺金絲桃中總黃酮提取效果的影響。

2.8 正交試驗

采用L9（34）正交試驗安排表進行試驗，以考察多因素對提取過程的交互影響，從而篩選出超聲提取最佳工藝。因素及水平設(shè)置見表1。

3 結(jié)果與分析

表1 超聲提取法的L9(34)正交因素水平表

表2 單因素考察結(jié)果

3.1 單因素考察結(jié)果

單因素考察結(jié)果見表2，結(jié)果表明，乙醇濃度、溫度、提取時間、超聲功率對總黃酮提取效果有影響，料液比對提取效果影響不大，確定提取時料液比為1∶22。依據(jù)結(jié)果確定正交試驗各因素的合理水平。

3.2 正交試驗結(jié)果

表3 超聲法提取的正交試驗結(jié)果

極差分析結(jié)果的R值大小表明，四種因素對烏腺金絲桃中總黃酮提取影響程度A＞B＞D＞C，即乙醇濃度＞溫度＞超聲功率＞提取時間，說明因素A為影響烏腺金絲桃中總黃酮提取率的主要因素；四種因素的K值表明各因素水平的影響程度是A1＞A2＞A3，B2＞B3＞B1，C3＞C1＞C2，D2＞D3＞D1，綜上所述，理論最佳的工藝條件是A1B2C3D2，即樣品用60%乙醇采用超聲功率為120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，見表3。

3.3 驗證性試驗結(jié)果

按照上述確定的最佳條件，取5份樣品做了5次平行試驗，總黃酮平均提取率8.15%，算得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=2.77%＜3%，進一步說明正交試驗所得的最佳條件為提取烏腺金絲桃總黃酮較為理想的工藝。

4 結(jié)語

以總黃酮提取率為評價指標(biāo)的正交試驗結(jié)果表明，乙醇濃度對烏腺金絲桃中總黃酮的提取影響程度顯著，提取溫度與超聲功率影響次之、提取時間與料液比影響程度較??；正交試驗分析及驗證性試驗結(jié)果表明，烏腺金絲桃中總黃酮超聲提取最佳工藝條件是樣品用22倍量的體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇采用超聲功率為120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，在此條件下總黃酮提取率是8.15%。

[1]周繇.中國長白山植物資源志[M].北京:中國林業(yè)出版社,2010:304.

[2]馬育軒,王艷麗,周海純,等.烏腺金絲桃的化學(xué)成分及藥理作用研究進展[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2012,40(06):125-126.

[3]高彥宇.烏腺金絲桃對缺血性心臟病模型動物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機理的研究[D].黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),2008.

[4]曹緯國,劉志勤,邵云,等.黃酮類化合物藥理作用的研究進展[J].西北植物學(xué)報,2003,23(12):2241-2247.

[5]王秀麗,宋志堅,王小東,等.正交試驗優(yōu)化穩(wěn)心草總黃酮提取工藝[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報,2012,(22):192,194.

吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項目（2015008）

S567

A

10.14025/j.cnki.jlny.2016.24.043

薛穎，吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，在讀本科生，研究方向：中藥學(xué)。

肖鳳艷，碩士，吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院/長白山動植物資源利用與保護吉林省高校重點實驗室，副教授，研究方向：中藥資源開發(fā)。