侯星保 陳祥明 陳成標 林新友

(乳源縣婦幼保健院，廣東 韶關 512700)

廣東乳源縣瑤族人群α和β地中海貧血的分子流行病學調(diào)查

侯星保 陳祥明 陳成標 林新友

(乳源縣婦幼保健院，廣東 韶關 512700)

目的 調(diào)查廣東省乳源縣瑤族人群中的α和β地中海貧血(簡稱地貧)的攜帶率、基因突變類型及其分布特征。方法 連續(xù)收集905例父母雙方或一方為廣東省乳源縣瑤族人群的新生兒臍帶血及1 347例廣東省乳源縣瑤族人群婚檢育齡成人的外周血分別進行α和β地貧調(diào)查；所有樣品均進行RBC參數(shù)和血紅蛋白電泳分析，對比各項檢驗指標。結(jié)果 在905例臍帶血樣本中，檢出Hb Bart’s陽性樣品52例；經(jīng)基因分析，91例被確定了α地貧基因型(含92個突變等位基因，其中--SEA/43例、-α3.7/33例、-α4.2/9例、αWSα/2例、αCSα/3例、αQSα/1例)。值得注意的是，有38例-α3.7/αα和-α4.2/αα基因攜帶者檢出自Hb Bart’s陰性樣品。結(jié)論 研究為進行遺傳咨詢和制定該地區(qū)基于人群篩查的α和β地貧預防計劃提供了有價值的基礎資料。

地中海貧血; 基因頻率; 流行病學; 分子鑒定

地中海貧血(簡稱地貧)是由于珠蛋白基因突變使珠蛋白肽鏈缺如或合成不足而引起的一種遺傳性溶血性疾病，它是我國南方最常見、危害最為嚴重的遺傳病之一[1]。由于該病的分子病理具有高度異質(zhì)性，且呈現(xiàn)明顯的地域差異和種族特征[2]，闡明廣東省乳源瑤族自治縣瑤族人群中地貧的發(fā)病情況及其基因背景是在該地區(qū)控制該病的重要前提。本文以該地的瑤族人群為對象完成了此項調(diào)查，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 對象和方法

1.1 研究對象

從2013年6月— 2014年3月間，共收集了905份新生兒臍血標本，同時對新生兒的臨床資料包括其父母親的民族籍貫作詳細記錄。2013年1月— 2014年6月間，來廣東省乳源瑤族自治縣婦幼保健院例行婚檢產(chǎn)檢的育齡成人外周靜脈血1 347例(年齡為18～45歲，男524例，女823例，夫妻517對)；均為連續(xù)樣本。新生兒臍血用于α地貧的調(diào)查；成人靜脈血用于β地貧的調(diào)查。

1.2 研究策略

所有樣品均進行RBC參數(shù)和血紅蛋白電泳分析，以臍血中檢出Hb Bart’s作為α-地貧表型陽性參考指標，α地貧的確診按以下步驟進行基因分析:對α地貧表型陽性者，先分析3種常見缺失型基因(--SEA/、-α3.7/和-α4.2/)，這3種基因陰性者再進行α地貧--Fill/和--Thai/缺失基因及已知的4種α基因點突變(HbCS、HbQS和HbWS)檢測；所有臍血Hb Bart’s陰性樣品均進行兩種常見靜止型α地貧基因(-α3.7/和-α4.2/)的分子篩查[3]。

1.3 基因型分析

(1)樣品準備。 按經(jīng)典的酚-氯仿法抽提人白細胞基因組DNA。(2)基因缺失診斷。 用gap-PCR技術[4]分析3種缺失型α地貧基因(--SEA/、-α3.7/、-α4.2/)。(3)點突變診斷。 已知的17種中國常見β地貧基因點突變和3種α地貧基因點突變(HbCS, HbQS和HbWS)分析采用反向點雜交(RDB)技術檢測；未知突變采用DNA直接測序法進行分析[5-6]。

2 結(jié) 果

2.1 乳源瑤族人群α地貧的基因型與Hb Bart’s含量的關系

經(jīng)檢驗，乳源瑤族人群α地貧的基因型與Hb Bart’s含量的關系如表1所示。

表1 乳源瑤族人群α地貧的基因型與Hb Bart’s含量的關系

2.2 α地貧基因突變類型及其頻率

在上述92個α地貧等位基因中，包含6種常見類型α地貧突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αCSα/，αQSα和αWSα/,其中缺失型占93.48%，非缺失型占6.52%。這6種等位基因的數(shù)目、基因頻率及其構成比情況見表2。

表2 乳源瑤族人群α地貧等位基因頻率及構成比

注：*基因頻率為等位基因數(shù)/被調(diào)查的染色體總數(shù)(905×2)。

3 討 論

為了在廣東省乳源瑤族自治縣瑤族人群開展α和β地貧的預防計劃，闡明該瑤族人群中α和β地貧真實發(fā)生率、基因突變類型及其分布是一項首要的基礎性工作。檢測新生兒臍血的Hb Bart’s含量長期以來被用作α地貧群體篩查和流行病學調(diào)查的指標，其最主要的優(yōu)點是能對成人外周血難以提供足夠檢測信息的靜止型α地貧加以識別。我們在905份Hb Bart’s陰性的樣品中共檢出靜止型α地貧基因38份，其中-α3.7地貧229份，-α4.2地貧8份，ααWS/ 1例，假陰性率為71.70%(38/53)，總的漏檢率為4.20%(38/905)。此外，臍血中低水平的Hb Bart’s在相當一部分正常珠蛋白基因的樣品中可以檢測出。我們以基因診斷結(jié)果為金標準，結(jié)合血液表型指標，通過系統(tǒng)分子篩查完成了廣東省乳源瑤族自治縣瑤族人群的地中海貧血流行病學調(diào)查，我們認為：本研究中所采用的篩查策略和研究路線可行，可為我國其他地區(qū)開展地貧的分子流行病學調(diào)查和制訂大規(guī)?？刂频刎毣純撼錾A防計劃提供有益的借鑒。

[1]周玉球，徐湘民，李文典，等．β-地中海貧血患者的婚前篩查及產(chǎn)前診斷[J]．中華婦產(chǎn)科雜志，1998，33:109-110．

[2]肖維威，徐湘民，劉忠英．東南亞缺失型α-地中海貧血的聚合酶鏈反應快速診斷技術及其產(chǎn)前診斷[J]．中華血液學雜志，2000，21：192-193．

[3]趙永忠，鐘梅，劉忠英，等，PCR技術快速檢測常見缺失型α-地中海貧血-2基因[J]．中華醫(yī)學遺傳學雜志，2001，18：216-218．

[4]趙永忠，徐湘民，徐鈐．PCR-LIS-SSCP快速分析非缺失型α-地中海貧血點突變[J]．中華醫(yī)學遺傳學雜志，1999，16:113-115．

[5]周玉球，肖鴿飛，李麗艷，等，Gap-PCR作為臨床一線α地中海貧血攜帶者篩查技術的應用評價[J]．第一軍醫(yī)大學學報，2002，22:434-436．

[6]全國血紅蛋白病調(diào)查協(xié)作組. 20個省、市、自治區(qū)60萬人血紅蛋白病查[J]．中華醫(yī)學雜志，1983，64：382-385．

Investigation on the Molecular Epidemiology of Guangdong Ruyuan County Yao Population of Alpha and Beta Thalassemia

HOU Xingbao, CHEN Xiangming, CHEN Chengbiao, LIN Xinyou

(Maternal and Child Health Hospital in Ruyuan County, Shaoguan 512700, China)

Objective To investigate the ruyuan county of guangdong province yao population of alpha and beta thalassemia anemia (thalassemia) the carrying rate, gene mutation types and their distribution features. Methods The 905 cases both parents or one of the parties for guangdong province ruyuan yao county population in the cord blood of neonate and 1 347 cases in ruyuan county, guangdong province yao crowd premarital childbearing age adult peripheral blood were alpha and beta thalassemia survey; all samples were performed in RBC parameters and hemoglobin electrophoresis analysis, comparison of various test indicators. Results In the 905 cases of umbilical cord blood samples, the detection of Hb Bart’s positive samples of 52 cases; was confirmed by gene analysis, 91 cases was determined alpha thalassemia gene (with 92 mutant allele, which --SEA/ in 43 cases of, alpha3.7/33 cases,-alpha4.2/9 cases, alphaWSalpha/2 cases, alphaCSalpha/3 cases, alphaQSalpha/1). It is worth noting that there are 38 cases of positive 3.7/4.2/ alpha Hb alpha gene carriers were detected in the negative samples of Bart’s. Conclusion This study for genetic counseling and the establishment of alpha and beta thalassemia screening based on prevention programs provide a valuable basis.

mediterranean anemia; gene frequency; epidemiology; molecular identification

1006-446X(2016)03-0034-04

R 556.61

A

2015 - 10 - 27