秦梅　劉延亭　侯艷紅

摘要：狂犬病（Rabies）是一種重要的人獸共患傳染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染溫血?jiǎng)游锖腿撕笠?，一旦發(fā)病，死亡率幾乎達(dá)100%，是迄今為止人類(lèi)病死率最高的急性傳染病。目前防制狂犬病的最有效的方法是在暴露后進(jìn)行高免血清封閉以及免疫狂犬病疫苗。由于注射疫苗價(jià)格較高，注射不方便等缺點(diǎn)給防治和消滅狂犬病帶來(lái)了極大的困難。近年來(lái)，口服的免疫方式成為狂犬病毒疫苗研究的熱點(diǎn)，除了狂犬病毒疫苗組份，疫苗的投送工具——誘餌也是決定口服狂犬病疫苗效果的重要因素。本文就口服狂犬病毒疫苗誘餌的國(guó)內(nèi)外研究情況進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞：狂犬病毒疫苗；口服；誘餌

狂犬病毒又稱(chēng)為恐水病，因被感染狂犬病病毒（Rabies virus）的“瘋”動(dòng)物咬傷，感染性唾液污染傷口而發(fā)生致死性的腦脊髓炎，OIE將其列為B類(lèi)疫病?？袢《靖腥舅袦匮?jiǎng)游?，感染的人和?dòng)物一旦發(fā)病，幾乎都難免死亡。病毒主要侵害神經(jīng)系統(tǒng)，臨床癥狀為狂躁不安、意識(shí)紊亂、興奮、恐水、吞咽困難，最后因局部或全身麻痹而死亡?？袢】稍谑澜绶秶鷥?nèi)分布，是全球性的嚴(yán)重衛(wèi)生問(wèn)題。我國(guó)是受狂犬病危害最為嚴(yán)重的國(guó)家之一，目前防制狂犬病的最有效的方法是在曝露后進(jìn)行高免血清封閉以及免疫狂犬病疫苗。由于狂犬病毒的流行面積和宿主范圍非常廣泛，單靠注射免疫很難消滅狂犬病毒，特別是對(duì)于野生動(dòng)物，用口服疫苗大面積免疫野生動(dòng)物是消滅狂犬病毒的最有效方法。因此，近年來(lái)口服狂犬病毒疫苗的研發(fā)成為熱點(diǎn)，同時(shí)口服疫苗的研究也存在很多問(wèn)題，如免疫后抗體效價(jià)較低。隨著口服疫苗技術(shù)的逐漸成熟，人們逐漸認(rèn)識(shí)到優(yōu)秀的口服狂犬病毒疫苗不僅具有良好的狂犬病毒疫苗組份，選擇一種適合的疫苗抗原投送工具——誘餌，也是非常重要的。合適的誘餌不僅具有對(duì)靶動(dòng)物具有很好的誘惑性，同時(shí)也要能使口服疫苗抗原在動(dòng)物口腔中得到很好的釋放。

1 口服狂犬病疫苗及誘餌需滿(mǎn)足的條件

目前，狂犬病疫苗是野生動(dòng)物疫苗中開(kāi)發(fā)最成功的疫苗之一，為歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家狂犬病的控制做出了巨大貢獻(xiàn)?？袢】诜呙绱笾路譃閮深?lèi)：弱毒疫苗和基因工程疫苗。因弱毒疫苗保持有天然的免疫原性而得到研究者們的廣泛研究，ERA株、SAD株都曾用于口服疫苗的研究。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，基因工程疫苗已經(jīng)成為口服狂犬病疫苗研究的熱點(diǎn)，既可以保持免疫原性，又可以克服弱毒疫苗毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn)。口服疫苗除了活載體疫苗的研究，還有核酸口服疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗等。

口服疫苗需要滿(mǎn)足的條件：①通過(guò)口服對(duì)靶動(dòng)物能產(chǎn)生很高的免疫原性；②對(duì)靶動(dòng)物和其它動(dòng)物具有很高的安全性；③基因組穩(wěn)定；④和野毒株具有明顯區(qū)別；⑤在野外各種溫度條件下能保存較長(zhǎng)時(shí)間。

通過(guò)學(xué)者們多年來(lái)對(duì)口服狂犬病疫苗的研究，發(fā)現(xiàn)口服狂犬病毒疫苗抗原的投送工具—誘餌是決定高效免疫效果的重要因素之一，優(yōu)秀的疫苗誘餌可以使口服疫苗抗原在動(dòng)物口腔中不斷釋放，進(jìn)而激發(fā)動(dòng)物的黏膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生高效的免疫應(yīng)答反應(yīng)。作為口服疫苗的誘餌必須滿(mǎn)足的條件是：①不影響疫苗的免疫效果；②對(duì)靶動(dòng)物具有很強(qiáng)的吸引力，而且對(duì)靶動(dòng)物和非靶動(dòng)物安全性極高；③誘餌原材料容易獲得，生產(chǎn)成本較低；④不受外源因子的影響；⑤在野外條件下能夠起到保護(hù)疫苗穩(wěn)定性的作用；⑥要含有一種生物酶標(biāo)記；⑦能耐受疫苗投放環(huán)境和保存條件。

2 國(guó)外對(duì)口服狂犬病疫苗誘餌的研究進(jìn)展

1774年John最初選擇用雞蛋作為狂犬病疫苗載體，以狐貍作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行了口服研究，雖然這種疫苗載體未得到實(shí)際的應(yīng)用，但為以后的口服疫苗誘餌研究開(kāi)發(fā)打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。1775年Winkle和Baer用ERA和PRI株作為狂犬病毒疫苗株，用香腸作為誘餌對(duì)狐貍進(jìn)行了口服免疫，可以產(chǎn)生有效的免疫效果。在此基礎(chǔ)上，1778年，瑞士研究者用10%蛋黃包裹雞頭做疫苗誘餌，發(fā)現(xiàn)60%的狐貍獲得了免疫保護(hù)。雞頭和香腸是最早選擇為口服疫苗誘餌的，其成本低，取材方便適合大規(guī)模的野外投放，免疫效果良好，因此，口服免疫開(kāi)始在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家開(kāi)始廣泛應(yīng)用。但是由于雞頭和香腸制作過(guò)程需要消耗大量人力，雞頭作為口服疫苗誘餌對(duì)靶動(dòng)物的選擇性不強(qiáng)，雞頭也容易變質(zhì)，后來(lái)制作了以魚(yú)粉和脂肪為主要原料的口服疫苗誘餌，這種誘餌可以實(shí)現(xiàn)機(jī)械化大規(guī)模生產(chǎn)，以供歐洲各國(guó)統(tǒng)一野外投放。

1992年，F(xiàn)rontini在墨西哥用Linhat誘餌、魚(yú)粉聚合物誘餌和蠟餌對(duì)犬進(jìn)行了采食實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明這幾種誘餌的采食時(shí)間長(zhǎng)，與犬餅干相比，誘惑性不明顯，所以這兩種誘餌的結(jié)合是犬全較為理想的誘餌。由于在美國(guó)狂犬病的主要傳播動(dòng)物是浣熊，狂犬病疫苗誘餌的研究多以浣熊為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。1989年，Hadidian制作了一種主要以鯖魚(yú)醬為主的疫苗誘餌，體積約為3cm×3cm×3.5cm的矩形小塊，塑料小袋裝口服疫苗，然后石蠟封口后進(jìn)行投放，采食率可以達(dá)到53%。同年P(guān)erry用熱狗、棉花糖、面包、果凍、蜜糖和蘋(píng)果醬等為材料的誘餌對(duì)浣熊進(jìn)行了采食實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明80%的浣熊可以產(chǎn)生很好的免疫保護(hù)。1991年Linhart用商業(yè)食品玉米粉、牛奶和雞蛋為主要原料作為口服疫苗誘餌，結(jié)果顯示90%的浣熊產(chǎn)生了很高的病毒中和抗體。到二十世紀(jì)90年代中期，美國(guó)梅里亞公司在以前誘餌制作的基礎(chǔ)上研制了以牛肉為主要原料的口服疫苗誘餌，這是目前世界上應(yīng)用最廣、最多的口服疫苗。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，僅1990年到2000年美國(guó)在野外投放了2.2億頭份的這種以牛肉為主要誘餌成分的狂犬病疫苗，大大降低了狂犬病的傳播。2005年至2006年愛(ài)沙尼亞在野外對(duì)紅狐貍和浣熊投放了以RabidogSAG2為誘餌的口服狂犬病疫苗，73.5%的紅狐貍和浣熊激發(fā)產(chǎn)生了針對(duì)狂犬病毒的中和抗體。

口服狂犬病疫苗的免疫效果不僅與誘餌成分有關(guān)，疫苗誘餌的形狀、投放密度和投放次數(shù)也是影響免疫效果的因素。紅狐貍、狗和浣熊是傳播狂犬病的主要?jiǎng)游?，方形誘餌和圓形誘餌相比，所有動(dòng)物更傾向于喜歡采食方形誘餌。AndrewC研究發(fā)現(xiàn)同樣數(shù)量的口服疫苗，一次性高密度投放比持續(xù)性投放免疫效果更好。

3 國(guó)內(nèi)對(duì)口服狂犬病疫苗誘餌的研究進(jìn)展

目前我國(guó)狂犬病的防控措施和國(guó)外相比還存在著很大差距。雖然要求所有犬必須注射狂犬病疫苗，但在實(shí)施中存在很大困難。有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，在我國(guó)部分地區(qū)，外表健康的犬的狂犬病毒攜帶率超過(guò)2%，這是潛在的傳染源。因此，國(guó)內(nèi)口服狂犬病疫苗的研發(fā)已經(jīng)迫在眉睫。雖然目前市場(chǎng)上的狂犬病毒疫苗多種多樣，但是由于成本較高，免疫困難，無(wú)法在廣大的農(nóng)村地區(qū)普遍推廣。

由于國(guó)內(nèi)缺乏口服狂犬病毒疫苗誘餌的研究，張紅普2012年根據(jù)國(guó)外發(fā)達(dá)國(guó)家野外投放口服疫苗的經(jīng)驗(yàn)和犬的生物學(xué)特性，利用廣西現(xiàn)有的經(jīng)濟(jì)資源研制了多種狂犬病口服疫苗誘餌。秘魯魚(yú)粉誘餌、巴基斯坦魚(yú)粉誘餌、犬糧誘餌和肉骨粉誘餌，腸衣包裹狂犬病口服疫苗，固體石蠟固定口服疫苗和誘餌。結(jié)果表明巴基斯坦魚(yú)粉制作的口服疫苗誘餌效果最好，采食率達(dá)到92.3%。

4 研究展望

口服疫苗誘餌是投送口服疫苗的良好工具，其適口性和穩(wěn)定性是影響口服疫苗免疫效果的直接因素。影響口服疫苗誘餌的重要因素有誘餌的選材、誘餌的投放密度、誘餌的投放次數(shù)。在選材上除了要考慮所選材料對(duì)靶動(dòng)物的適口性外，還要考慮當(dāng)?shù)氐淖匀粭l件、材料的經(jīng)濟(jì)因素、靶動(dòng)物的飼養(yǎng)習(xí)慣、采食習(xí)慣等。由于國(guó)內(nèi)對(duì)口服疫苗誘餌的研究很少，所以我們要結(jié)合國(guó)外對(duì)野生動(dòng)物投放狂犬病疫苗的經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合國(guó)內(nèi)當(dāng)?shù)氐淖匀粭l件和經(jīng)濟(jì)因素來(lái)研究口服狂犬病毒疫苗誘餌?？诜呙绲拿庖咴碇饕强筐つっ庖呦到y(tǒng)遞呈抗原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效的黏膜免疫反應(yīng)，在這方面我國(guó)已經(jīng)有相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)入臨床，最具有代表性的就是脊髓灰質(zhì)炎口服疫苗糖丸，為人類(lèi)戰(zhàn)勝脊髓灰質(zhì)炎病毒做出了巨大貢獻(xiàn)。所以，如果能夠研制出狂犬病的口服疫苗，加以?xún)?yōu)秀合適的口服疫苗誘餌，那么人類(lèi)克服狂犬病的難題會(huì)迎刃而解，也會(huì)有助于填補(bǔ)我國(guó)狂犬病口服疫苗領(lǐng)域的研究空白。

（編輯：狄慧）