鄧文超

（遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110164）

犬細(xì)小病毒病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

鄧文超

（遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110164）

犬細(xì)小病毒是犬的一種常見的傳染病，臨床常見，可以通過直接接觸或者間接接觸傳播該病，該病分為兩種表現(xiàn)型：腸炎型與心肌炎型。腸炎型常以主要以嘔吐和嚴(yán)重腹瀉為臨床特征。心肌炎型犬呼吸與心血管的衰竭。該病發(fā)病較急，如果不及時治愈死亡率較高。目前診斷該病多以臨床癥狀進(jìn)行判定，實(shí)驗(yàn)室檢測方面的研究和報道較少，現(xiàn)將目前實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)綜述如下：

1 PCR診斷技術(shù)

PCR診斷技術(shù)具備快速，靈敏，準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，目前該方法已經(jīng)在出入境檢驗(yàn)檢疫，動物防疫等部門廣泛應(yīng)用，且建立了多種動物疫病檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。姚大偉等根據(jù)犬細(xì)小病毒基因的保守序列應(yīng)用引物設(shè)計軟件設(shè)計了檢測引物,通過體系優(yōu)化與反應(yīng)條件的摸索，建立了犬細(xì)小病毒的PCR診斷方法，擴(kuò)增目的片段大小為448bp，并對37份臨床病料進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明該方法完全適用于犬細(xì)小病毒病的臨床診斷。劉忠華等利用PCR技術(shù)研制犬細(xì)小病毒的PCR診斷試劑盒。該試劑盒具有特異、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

2 巢式PCR診斷技術(shù)

巢式PCR是在經(jīng)典PCR方法原理的技術(shù)上的一種改良，該方法特點(diǎn)是敏感性較高。簡子健等以犬細(xì)小病毒的VP2基因序列的保守區(qū)域應(yīng)用生物軟件設(shè)計了二對巢式PCR引物,成功建立了犬細(xì)小病毒的巢式PCR診斷方法，該方法以從病犬腹瀉物中提取的DNA為模板，進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增。該方法特異性較好，與犬類的其他病原無交叉，敏感性較強(qiáng)，檢測限度為10-9個稀釋度，對采集的臨床樣品進(jìn)行檢測，陽性率為76.9%。

3 膠體金診斷技術(shù)

膠體金快速診斷技術(shù)，是近年來發(fā)展起來的一種快速簡單實(shí)用的免疫學(xué)診斷技術(shù)。該技術(shù)目前已經(jīng)廣泛的應(yīng)用在奶牛，家禽，豬等傳染病的病原和抗體檢測，是目前推廣應(yīng)用最好的一種診斷技術(shù)。王中力等應(yīng)用納米金標(biāo)記犬的細(xì)小病毒的單克隆抗體為捕獲抗體，同時在膜上噴印上多克隆抗體，建立了夾心法檢測犬細(xì)小病毒的膠體金試紙條。該方法簡單，快速，方便。5min既可判定結(jié)果。與其他方法同時對臨床樣品進(jìn)行檢測，符合率達(dá)95%以上，結(jié)果證明該方法可以在臨床上進(jìn)行快速診斷，也可以進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。

4 ELISA方法

趙國星等利用真核表達(dá)的犬細(xì)小病毒病毒樣顆粒純化后作為包被抗原建立犬細(xì)小病毒的間接ELISA檢測方法，可特異性檢測犬細(xì)小病毒陽性血清，與其他陽性血清均不發(fā)生反應(yīng)。該方法的敏感性為1∶640。趙丹等用表達(dá)純化的重組蛋白免疫家兔制備VP2多抗,采用辣根過氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記,初步建立了競爭ELISA方法。姜騫等用純化的犬細(xì)小病毒重組VP2蛋白為包被抗原,建立了檢測犬細(xì)小病毒抗體的間接ELISA方法。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．05.119