蘇 茂，唐正菊

（1.重慶市沙坪壩區(qū)歌樂山鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，重慶 400036；2.重慶市大足區(qū)棠香街道辦事處農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，重慶 402360）

動物飼料微生物污染快速檢測方法

蘇 茂1，唐正菊2

（1.重慶市沙坪壩區(qū)歌樂山鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，重慶 400036；
2.重慶市大足區(qū)棠香街道辦事處農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，重慶 402360）

飼料中微生物污染阻礙畜牧生產(chǎn)的良性發(fā)展。微生物檢測時控制污染的源頭，快速有效的檢測方法可以最大程度的保證飼料安全。根據(jù)國內(nèi)外已發(fā)表的文獻和最新的研究進展，本文總結(jié)了動物飼料中微生物污染快速檢測方法，主要包括基于基因技術(shù)的檢測、基于免疫學(xué)方法的檢測以及基于蛋白質(zhì)技術(shù)的檢測。

動物飼料；微生物污染；快速檢測方法

動物飼料在畜牧生產(chǎn)中不可或缺，安全性良好的動物飼料是促進畜牧生產(chǎn)良性發(fā)展的因素之一。動物食用被污染的飼料易造成生產(chǎn)能力降低甚至引發(fā)疾病，嚴重者會通過食物鏈危害人群健康。有害微生物污染是動物飼料安全的主要監(jiān)控指標(biāo)，建立快速有效的檢測方法是監(jiān)控工作的第一步。動物飼料由幾十種基本原料復(fù)合而成，因此有害微生物種類多且常有交叉污染現(xiàn)象。鑒于此一些比傳統(tǒng)檢測手段更加快速靈敏的方法逐步成為近年來的研究焦點。

1 PCR檢測技術(shù)

聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是一種應(yīng)用較為廣泛，發(fā)展較為成熟的分子生物學(xué)技術(shù)。PCR技術(shù)可特異、靈敏的檢測出極微量DNA片段，其操作快速簡單，對樣本純度要求不高。多重PCR技術(shù)是在常規(guī)PCR方法基礎(chǔ)上在一個體系內(nèi)加入一對以上引物，在保留常規(guī)PCR快速、靈敏優(yōu)勢的基礎(chǔ)上可一次檢測2種以上有害微生物。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展科研工作者嘗試將PCR技術(shù)與多種技術(shù)聯(lián)用以達到更好的實際工作效果。一項研究中利用實時熒光定量PCR以檢測幽門螺旋桿菌，結(jié)果檢測時間短、線性關(guān)系好且無交叉反應(yīng)，有效的提高了飼料中微生物的檢測效果。由于飼料成分較為復(fù)雜且PCR技術(shù)檢測敏感度高，在實際工作中常發(fā)生能檢測到DNA片段但無活性微生物存在的現(xiàn)象，使得PCR技術(shù)的應(yīng)用受到限制。

2 基因芯片檢測技術(shù)

基因芯片技術(shù)是近幾年發(fā)展迅速，已成為目前檢測技術(shù)研究熱點之一。該法在基片表面固定一系列特定引物，對樣品進行擴增、雜交，分析雜交結(jié)果即可達到檢測目的?；蛐酒夹g(shù)與其它技術(shù)相結(jié)合應(yīng)用范圍更廣，檢測效果更好。隨著生物信息學(xué)技術(shù)的發(fā)展，基因芯片技術(shù)的用途越來越廣。利用生物信息學(xué)技術(shù)分析并找出飼料中常見有害微生物的特異基因序列，設(shè)計探針和引物即可快速靈敏的檢測多種有害微生物的存在。該技術(shù)靈敏度高、耗時短，隨著技術(shù)的發(fā)展檢測費用的降低，相信其應(yīng)用會越來越廣。

3 ELISA檢測技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）方法是一種將抗原-抗體特異性反應(yīng)與酶高效催化反應(yīng)相結(jié)合的檢測方法，是酶免疫測定法中應(yīng)用最廣的一種方法，具有操作簡單、靈敏度高、批量檢測等優(yōu)勢。檢測時首先將抗原或抗體吸附于固相載體表面，后加入待測抗體或抗原，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，最后通過底物顯色生成有色物質(zhì)，根據(jù)吸光值對樣品進行定性及定量分析。識別微生物的特異性抗體的制備是ELISA技術(shù)的關(guān)鍵。實際工作中，ELISA方法在沙門氏菌的快速篩查中應(yīng)用最多，此外也用于飼料中其它有毒有害物殘留的檢測。

4 蛋白質(zhì)芯片檢測技術(shù)

蛋白質(zhì)芯片檢測技術(shù)又稱蛋白質(zhì)微陣列技術(shù)，其基本結(jié)構(gòu)與基因芯片技術(shù)類似。首先將酶、抗原、抗體等特異性蛋白被大量固定在經(jīng)預(yù)處理的硅片或玻璃片上制成蛋白質(zhì)芯片，后將樣品加入固相載體，使其與芯片上蛋白質(zhì)反應(yīng)，最后經(jīng)激光掃描獲取圖像并使用專門的軟件對圖像進行定性定量分析以得出結(jié)果。研究表明蛋白質(zhì)芯片檢測技術(shù)交叉反應(yīng)較少因此重復(fù)性高，檢測靈敏度高且整個檢測用時較短，是有效的微生物檢測方法。檢測費用高是限制該技術(shù)實際應(yīng)用的主要因素。

5 總結(jié)

快速檢測方法能夠在短時間內(nèi)得到微生物污染的檢測情況，是大批量飼料中微生物污染篩查的理想工具。然而，飼料中成分較為復(fù)雜，有微生物也有基因片段或蛋白質(zhì)殘留，因此與傳統(tǒng)方法相比未經(jīng)過諸如富集等預(yù)處理步驟的快速檢測方法其檢測結(jié)果只能作為參考，傳統(tǒng)檢測方法得出的結(jié)果更加可信。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，快速檢測技術(shù)檢測結(jié)果會越來越可靠，最終成為飼料中有害微生物的檢測最終發(fā)展方向。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．07.116