喻　斌　張臻年　楊　麗　梁　濤　周玲玲　程海波　沈祥春

(南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇　南京　210023)

?

消郁顆粒對抑郁大鼠的改善作用及機制

喻斌張臻年1楊麗梁濤周玲玲程海波沈祥春2

(南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210023)

摘要〔〕目的觀察消郁顆粒對慢性應(yīng)激性刺激所致抑郁大鼠的改善作用，明確與皮層和海馬神經(jīng)生長因子(NGF)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達的相關(guān)性。方法采用慢性應(yīng)激性刺激制備抑郁大鼠模型，利用蔗糖水消耗、Open-field開場、Morris水迷宮實驗觀察消郁顆粒對各組大鼠行為學(xué)的影響，采用免疫組化法檢測額葉皮層和海馬區(qū)的NGF和BDNF表達。結(jié)果與模型組比較，消郁顆粒組體重和糖水消耗體積顯著增加，游泳總路程、遠站臺區(qū)路程、近站臺區(qū)路程、上臺潛伏期、近站臺區(qū)時間和遠站臺區(qū)時間顯著縮短，顯著增加近/遠站臺區(qū)時間比例(P<0.05，0.01)。此外，消郁顆?？娠@著增加額葉皮層和海馬NGF和BDNF的表達，并可呈劑量依賴性(P<0.05，0.01)。結(jié)論消郁顆粒對慢性應(yīng)激刺激所致抑郁大鼠有一定改善作用，該作用與增加額葉皮層和海馬NGF和BDNF的表達有關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕消郁顆粒；抑郁；神經(jīng)生長因子;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子

1南京市中醫(yī)院腦病科2貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院

沈祥春(1973-)，男，教授，博士，主要從事民族藥物研究。

第一作者：喻斌(1978-)，男，副教授，博士，主要從事中藥藥理學(xué)研究。

抑郁癥的發(fā)病機制復(fù)雜，與遺傳、環(huán)境、社會等各種因素有關(guān)。一項流行病學(xué)研究顯示，老年人抑郁情緒的發(fā)生率為 31.6%，已成為影響老年人生活質(zhì)量的重要疾病〔1，2〕。治療抑郁癥的藥物中化學(xué)藥物療效明顯，但由于化學(xué)合成抗抑郁藥長期服用后會出現(xiàn)嚴重的毒副作用，也存在著抗抑郁譜窄、易復(fù)發(fā)等缺點，所以作用溫和、副作用少的傳統(tǒng)中藥及其方劑越來越受到人們的關(guān)注。本實驗擬觀察消郁顆粒對抑郁的改善作用，并初步探討機制。

1材料與方法

1.1材料雄性清潔級SD大鼠，體重180～220 g，浙江大學(xué)實驗動物中心提供，在實驗環(huán)境中適應(yīng)3 d后進行實驗。消郁顆粒，本實驗室制備，其中含柴胡、枳實、川芎、黨參、白術(shù)、茯苓、厚樸、清半夏、珍珠母、八月札、冰片和甘草。陽性藥帕羅西汀，葛蘭素史克公司，批號1210023。YSD-4G型電子刺激器(蚌埠無線電二廠)，Morris水迷宮(安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司)，Any-maze動物行為分析系統(tǒng)(美國Stoeling公司)。

1.2動物分組、造模和給藥方法

1.2.1分組大鼠60只，隨機分為空白組、模型組、陽性藥組(帕羅西汀1.65 mg/kg)、低劑量組(10.5 g/kg)、中劑量組(21.0 g/kg)、高劑量組(42.0 g/kg)。每組10只。

1.2.2大鼠造模按前期報道方法復(fù)制抑郁大鼠模型〔3～5〕。用小鼠籠單獨飼養(yǎng)以縮小活動空間，同時接受21 d的慢性中等強度應(yīng)激：將動物每周隨機給予夾尾3 min、禁水24 h、禁食24 h、晝夜顛倒24 h、160 Hz水平振蕩5 min、電子刺激器電擊(30 V，電擊5 s，間隔5 s，共進行2 min)、4℃水游泳5 min。將上述方式各反復(fù)3次，共21種刺激方法納入隨機表格之中，21 d中每日隨機施1種刺激，連續(xù)21 d?？瞻捉M大鼠不造模。

1.2.3給藥方法大鼠造模成功后，根據(jù)分組情況開始進行給藥處理，1次/d，共14 d。除空白組，其他動物于每日相同時間置入固定器中20 min，連續(xù)14 d。14 d后用于下列檢測。

1.3指標(biāo)檢測

1.3.1蔗糖水消耗和體重測定實驗前訓(xùn)練動物飲用糖水。禁水24 h后每只大鼠給予20 ml的1%蔗糖水，1 h后取走水瓶并量取剩余體積，獲取糖水消耗體積(ml)，同時給大鼠稱重。

1.3.2Open-field開場實驗自制無蓋敞箱，底面為64個等格(10 cm×10 cm)。將大鼠放入中心方格，計時3 min，以大鼠爬過時四肢均進入的格子數(shù)作為水平運動次數(shù)，以大鼠前肢離地騰空或攀附箱壁、后肢直立次數(shù)為垂直運動次數(shù)。

1.3.3Morris水迷宮實驗平時訓(xùn)練時間設(shè)定70 s作為逃避到平臺上的最大潛伏期，超過70 s則直接將大鼠牽引至平臺。實驗時將大鼠隨機放入任一位置，以尋找平臺的時間作為潛伏期，以尋找平臺游過的軌跡作為總路程，利用Any-maze動物行為分析系統(tǒng)觀察大鼠潛伏期、總路程、游泳速度、近站臺區(qū)軌跡路程、遠站臺區(qū)軌跡路程、近/遠站臺區(qū)路程比、近站臺區(qū)時間、遠站臺區(qū)時間、近/遠站臺區(qū)時間比。

1.3.4神經(jīng)生長因子(NGF)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達的檢測處死大鼠，取腦后分離額葉皮層和海馬，10%甲醛固定，通過免疫組化法，觀察這兩個腦區(qū)NGF和BDNF的表達。應(yīng)用美國Media Cybernetics 公司專業(yè)圖片分析軟件Image-Pro Plus 6.0進行圖片分析。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS12.0軟件行單因素方差分析。

2結(jié)果

2.1消郁顆粒對抑郁大鼠體重和蔗糖水消耗的影響與空白組比較，模型組大鼠可見體重明顯減輕，糖水消耗顯著減少(P<0.05)。消郁顆粒3個劑量組可見體重和糖水消耗體積改善(與模型組比較，P<0.05)，并可呈劑量依賴性。見表1。

表1　消郁顆粒對抑郁大鼠體重、蔗糖水消耗及

與空白組比較：1)P<0.05；2)與模型組比較：2)P<0.05；下表同

2.2消郁顆粒對抑郁大鼠開場活動的影響與空白組比較，模型組大鼠可見開場活動中水平和垂直運動明顯減少(P<0.05)。消郁顆粒3個劑量組可顯著增加開場中的水平和垂直運動(與模型組比較，P<0.05)。見表1。

2.3消郁顆粒對抑郁大鼠Morris水迷宮行為學(xué)的影響與空白組比較，模型組大鼠游泳總路程、近站臺區(qū)軌跡路程、遠站臺區(qū)軌跡路程、上臺潛伏期、近站臺區(qū)時間和遠臺區(qū)時間顯著增加，近/遠站臺區(qū)時間比顯著減少(P<0.05)。消郁顆?？娠@著縮短抑郁大鼠游泳總路程、近站臺區(qū)路程、遠站臺區(qū)路程、上臺潛伏期、近站臺區(qū)時間和遠站臺區(qū)時間(與模型組比較，P<0.05)；此外，高劑量組還可見近/遠站臺區(qū)時間比例顯著增加(與模型組比較，P<0.05)。見表2。

表2　消郁顆粒對抑郁大鼠水迷宮實驗結(jié)果影響±s,n=10)

2.4消郁顆粒對抑郁大鼠額葉皮層和海馬區(qū)域NGF、BDNF表達的影響與空白組比較，模型組大鼠可見NGF和BDNF在額葉皮層和海馬區(qū)域表達顯著減少(P<0.01)；消郁顆粒3個劑量組可見這兩個腦區(qū)NGF和BDNF的表達增加(與模型組比較，P<0.05)，見表3。

表3　消郁顆粒對抑郁大鼠NGF、BDNF表達的

3討論

海馬區(qū)神經(jīng)元的失常與抑郁的發(fā)生關(guān)系密切。皮層也是大腦執(zhí)行網(wǎng)絡(luò)的重要組成部分，與多種認知控制過程有關(guān)，包括注意的分配和干擾的分辨。其可加固信息的呈現(xiàn)和維持，參與復(fù)雜加工，如語境加工和信息的重新評估。一項162 例影像研究的 Meta 分析顯示，皮層對情感價的分配至關(guān)重要〔6〕。

研究發(fā)現(xiàn)，BDNF和NGF對神經(jīng)元發(fā)育、分化、生長、再生和可塑性均有促進作用，并對損傷后的修復(fù)也同樣具有重要作用，其中BDNF還能增強NGF的作用〔7〕。抑郁癥中的不良情緒導(dǎo)致 NGF、BDNF 分泌減少，加速神經(jīng)元的變性與凋亡，并且與自殺行為密切相關(guān),長程抗抑郁治療后,BDNF 含量顯著升高,恢復(fù)至正常水平〔8〕。中醫(yī)認為疏肝理氣解郁為抑郁癥的主要治則；此外，因為抑郁還常常伴有血瘀、痰結(jié)、濕滯等而分別采用活血、化痰、祛濕等法。消郁顆粒中柴胡疏肝利膽、疏氣解郁、散火，配枳實瀉脾氣之壅滯，調(diào)中焦之運動與柴胡同用一升一降，加強疏肝理氣之功，以達郁邪，共為君藥。川芎行氣開郁，活血止痛；黨參可補脾肺之氣，與白術(shù)、茯苓等同用，共起補氣、健脾、除濕之效。厚樸、清半夏以寬胸暢通宣泄郁氣，珍珠母鎮(zhèn)心定驚，清肝除煩，清熱解毒；八月札舒肝理氣，活血止痛，除煩利尿。此八味藥配伍使用，共起解郁祛瘀、化痰和除濕之效，共為臣藥。冰片性善走竄開竅，無往不達，芳香之氣，能辟一切邪惡，辛熱之性，能散一切風(fēng)濕。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)，冰片具有促進藥物腦內(nèi)分布的作用，尤其對海馬區(qū)較為明顯，這可能也是該復(fù)方能顯著改善抑郁認知能力低下的機制之一〔9～13〕。甘草則疏理肝氣，調(diào)和諸藥，共為佐使。諸藥合用，共起疏肝解郁，行氣，活血止痛之效。本研究結(jié)果提示消郁顆粒對慢性應(yīng)激刺激所致抑郁大鼠有一定改善作用，該作用與增加額葉皮層和海馬NGF和BDNF的表達有關(guān)。但是該復(fù)方組方較多，具體配伍機制還需要進一步的研究。

參考文獻4

1邵通,王紅英,陳長香,等.養(yǎng)老機構(gòu)老年人抑郁情緒影響因素〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2015;35(10):2798-800.

2Nestler EJ，Barrot M，Dileone RJ，etal.Neurobiology of depression〔J〕.Neuron，2003;34(1):13-25.

3喻斌,孫永,呂高紅,等.電針配合貫葉連翹提取物對抑郁大鼠行為學(xué)及腦微循環(huán)的影響〔J〕.針刺研究,2011;36(3):164-70.

4喻斌,阮鳴,孫永,等.電針對抑郁大鼠大腦皮層ATP結(jié)合盒式蛋白表達的影響〔J〕.針刺研究,2013;38(4):286-90.

5Willner P.The validity of animal models of depression〔J〕.Psychopharmacology，1984;83(1):1-16.

6Williams NR，Taylor JJ，Lamb K，etal.Role of functional imaging in the development and refinement of invasive neuromodulation for psychiatric disorders〔J〕.World J Radiol,2014;6(10):756-78.

7侯金良,魏盛,杜希揚,等.抑郁情緒大鼠模型中糖水偏好實驗數(shù)據(jù)的聚合分析〔J〕.實驗動物與比較醫(yī)學(xué),2012;32(3):182-5,194.

8田中嶺,張麗萍.電針對抑郁模型大鼠海馬組織中NGF、BDNF的影響〔J〕.河南中醫(yī),2009;29(12):1171-3.

9Ide S,Kakeda S,Watanabe K,etal.Relationship between a BDNF gene polymorphism and the brain volume in treatment-naive patients with major depressive disorder:A VBM analysis of brain MRI〔J〕.Psychiatry Res,2015;233(2):120-4.

10Yu B,Ruan M,Sun Y,etal.Effect of borneol and electroacupuncture on the distribution of hyperforin in the rat brain〔J〕.Neural Regen Res,2011;6(24):1876-82.

11喻斌,阮鳴,董小平,等.不同間隔時間冰片處理對大鼠梔子苷腦靶效應(yīng)的影響〔J〕.中國藥理學(xué)通報,2012;28(6):862-6.

12Yu B,Ruan M,Cui XB,etal.Effects of borneol on the pharmacokinetics of geniposide in cortex,hippocampus,hypothalamus and striatum of conscious rat by simultaneous brain microdialysis coupled with UPLC-MS〔J〕.J Pharm Biomed Anal,2013;77:128-32.

13Yu B,Ruan M,Dong XP,etal.The mechanism of the opening of the blood-brain barrier by borneol:a pharmacodynamics and pharmacokinetics combination study〔J〕.J Ethnopharmacol,2013;150(3):1096-108.

〔2015-10-11修回〕

(編輯徐杰)

The improvement and mechanism of Xiaoyu granules on depressive rats

YU Bin,ZHANG Zhen-Nian,YANG Li,etal.

Pharmacy College,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210023,Jiangsu,China

【Abstract】ObjectiveTo study the improvement and mechanism of Xiaoyu granules on depressive rats.MethodsThe behavior of depressive rats,which were formed by chronic stress,were detected by Morris Water Maze,syrup consuming and open-field experiments.Moreover,the expressions of NGF and BDNF in cortex and hippocampus were measured to explain its mechanism.ResultsComparing with model group,Xiaoyu granules increased the body weight and syrup consuming obviously,shortened the total swim route,latency,time consuming and route of swimming in distant and nearby area,enhanced time consuming ratio of swimming in nearby and distant area (P<0.05,P<0.01).Moreover,Xiaoyu granules increased the expressions of NGF and BDNF in cortex and hippocampus markedly (P<0.05,P<0.01).ConclusionsXiaoyu granules could improve the depressive rats and the mechanism involving with increasing the expressions of NGF and BDNF in cortex and hippocampus.

【Key words】Xiaoyu granules; Depression; NGF; BNDF

通訊作者：程海波(1975-)，男，副教授，博士，主要從事中醫(yī)藥方劑研究。

基金項目：國家自然科學(xué)基金(81001651，81573713)；江蘇省自然科學(xué)基金(BK20151564)

中圖分類號〔〕R749〔

文獻標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2016)01-0010-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.004