文│張偉（江西省南昌市新建區(qū)石埠鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣綜合站）

豬禽采血及血清制備

文│張偉（江西省南昌市新建區(qū)石埠鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣綜合站）

血清學(xué)檢測是診斷動(dòng)物疫病、評(píng)價(jià)重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫效果的重要手段之一，血液樣品的采集及制備足量、合格的血清是保證血清學(xué)檢測成功的前提條件。畜禽采血及血清制備是畜牧獸醫(yī)部門一項(xiàng)常規(guī)的業(yè)務(wù)工作，也是基層畜牧獸醫(yī)人員必須熟練掌握的技術(shù)。現(xiàn)簡單介紹豬禽采血及血清制備的操作方法，供參考。

一、采血前調(diào)查摸底

為了檢驗(yàn)動(dòng)物疫病免疫抗體水平是否達(dá)標(biāo)，需要對已進(jìn)行免疫接種的豬禽個(gè)體采血。采血前，認(rèn)真查閱養(yǎng)殖檔案，摸清防疫等相關(guān)情況，對免疫注射情況不詳?shù)?、免疫注射時(shí)限未達(dá)到規(guī)定要求的不納入采樣范圍。同時(shí)，要檢查豬禽個(gè)體健康狀況，健康狀況不好的、正在患病治療或尚未治愈的，以及生長發(fā)育不良的也不納入采樣范圍，以免引發(fā)應(yīng)激反應(yīng)和意外事故。

二、豬禽采血

1.采血部位。豬采血的部位可選擇前腔靜脈和耳靜脈，但大批量采血時(shí)宜選擇前腔靜脈。禽采血的部位可選擇禽翅靜脈和心臟，最常用的是禽翅靜脈采血。

2.采血具體方法。

（1）豬前腔靜脈采血。采血前將同群豬只隔離，避免其攻擊采樣人員，造成意外傷害事故，確保采血工作順利進(jìn)行。備齊采血器具，根據(jù)豬只大小，采取適當(dāng)?shù)谋６ǚ椒ā?5千克以下的小豬，采取人工仰臥保定方法，雙后肢與身體平行向后輕輕拉直，雙前肢朝上拉直與體中線垂直并左右微微張開。在雙前肢與胸骨連線的前側(cè)左右凹窩內(nèi)，采血人員用酒精或碘酊棉球消毒后，選用9#×25毫米針頭進(jìn)針2～3厘米，針刺方向?yàn)橄蚝髢?nèi)方與地面呈60°角，輕輕抽出前腔靜脈血液即可。采血完畢，用消毒棉球緊壓采血部位針孔處，迅速拔出針頭，壓迫止血片刻后，解除保定。

對體型較大的豬只，采用站立式保定方法，用金屬保定器套住豬的上頜骨，收緊金屬保定器圈環(huán)，向前方用力牽引，將豬的上頜骨稍稍吊起并偏向右側(cè)，使豬的頭頸與水平面呈30°角，這時(shí)豬的注意力集中在鼻部，豬多呈后退姿勢。采血人員用酒精或碘酊棉在豬的右側(cè)胸前凹窩處消毒，用采血針對準(zhǔn)凹窩最低處，垂直刺入，感覺有負(fù)壓感且有回血，則標(biāo)志已刺入血管，然后輕輕回抽針管內(nèi)芯，即可采取前腔靜脈血液。采血完畢，拔出針頭，采血部位用消毒棉球壓迫止血片刻后，解除保定。對100千克以上的豬采血一般宜選用14#×38毫米針頭采血，50～100千克的育肥豬選用12#×38毫米針頭，25～50千克的小豬選用12#×30毫米針頭。

（2）禽翅靜脈采血。輔助人員將家禽個(gè)體側(cè)臥保定，展開翅膀，拔掉腋窩部羽毛，可見由翼根進(jìn)入腋窩的翼根靜脈，對其用酒精或碘酊棉球進(jìn)行消毒。采血人員等待消毒液干燥后，左手拇指壓迫血管近心端，使靜脈血管怒張、明顯，右手用裝有7號(hào)針頭的采血針或注射器沿翼根向翅膀方向，于血管0.3～0.5厘米一旁傾斜刺入皮膚，再與血管平行進(jìn)針0.2～0.4厘米后刺入血管，然后逐步放松按壓，緩慢抽取血液。進(jìn)針不宜過深，針頭的切口面應(yīng)向上。采血完畢后，用棉球壓迫采血部位1～2分鐘止血，同時(shí)可起到消毒作用。

3.采血時(shí)間。一般為豬、禽進(jìn)行免疫接種后抗體的高峰期進(jìn)行血樣采集。提前通知被采血單位或養(yǎng)殖戶在采血當(dāng)天采血前不要飼喂畜禽，被采樣畜禽禁食（空腹）8小時(shí)后進(jìn)行采血，一天中多選擇在早上或午后采血。

三、血清制備

1.血樣靜置。豬樣品每份采集全血不少于3毫升，禽樣品每份采集全血不少于2毫升。用一次性無菌注射器采血后把注射器活塞往后拉，直接去掉內(nèi)芯，可形成封閉的離心管，再加針頭帽，最后針頭朝上傾斜30～45°擺放，在室溫（20～25℃）下放置2～3小時(shí)，待血清自然析出。

使用一次性采血針連接真空采血管采集血液樣品后，把采血針取下，直接將采血管與地面成30～45°斜放，在室溫下放置2～3小時(shí)，待血清自然析出。

2.血樣運(yùn)輸。采血后室溫靜置10～15分鐘，待血液凝固后才能運(yùn)送。運(yùn)送血樣樣品時(shí)一定要輕拿輕放，不要發(fā)生劇烈震動(dòng)。使用血液樣品專用運(yùn)輸箱運(yùn)送更好。能在4小時(shí)內(nèi)運(yùn)輸?shù)竭_(dá)實(shí)驗(yàn)室的，只需冷藏后運(yùn)輸；不能在4小時(shí)內(nèi)送達(dá)的，則要做冷凍處理后再冷藏運(yùn)輸，必須在24小時(shí)內(nèi)送到。

3.實(shí)驗(yàn)室血清制備。血樣運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室后，接收的樣品若血清析出良好，可直接將血清轉(zhuǎn)入塑料離心管，按實(shí)驗(yàn)室規(guī)定程序編號(hào)檢測；接收的樣品若血清析出較差或室外氣溫過低，可放入37℃恒溫箱中1小時(shí)或25～37℃水浴鍋中1小時(shí)作預(yù)處理，再用離心機(jī)1500～2000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，以分離血清。在實(shí)驗(yàn)室，若短時(shí)間保存，4℃冷藏即可，時(shí)間最多不能超過1個(gè)月；若長時(shí)間保存，可在-20℃冷凍保存。血清由室溫轉(zhuǎn)入-20℃或由-20℃轉(zhuǎn)入室溫時(shí)，須經(jīng)過冷藏并搖勻處理，切忌反復(fù)凍融。