唐艷萍 謝雨萱 蔡政民 蘇程琳 譚曉玉 張力圖 利基林

(廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院實驗研究部，南寧市 530021，E-mail：tangyanping1986@126.com)

論著·臨床研究

肝癌患者術前血清胸苷激酶1表達水平及其臨床意義▲

唐艷萍 謝雨萱 蔡政民 蘇程琳 譚曉玉 張力圖 利基林

(廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院實驗研究部，南寧市 530021，E-mail：tangyanping1986@126.com)

目的 探討肝細胞肝癌患者術前血清胸苷激酶1(TK1)表達水平及其臨床意義。方法 采用免疫印跡增強化學發(fā)光法檢測125例肝細胞肝癌患者(肝癌組)、30例肝臟良性病變患者(肝臟良性病變組)和40例健康體檢者(健康對照組)血清TK1水平。分析肝癌組患者TK1水平與臨床病理特征的關系。結果 肝癌組血清TK1水平和陽性表達率均明顯高于肝臟良性病變組和健康對照組(P<0.05)，而肝臟良性病變組與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。巴塞羅那臨床肝癌分期為(B+C)期肝癌患者血清TK1水平高于(0+A)期肝癌患者(P<0.05)。結論 檢測血清TK1對肝癌的診斷具有一定的臨床參考價值。

肝細胞肝癌；血清胸苷激酶1

肝細胞肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一。大部分患者就診時病情已屬中晚期，失去了最佳治療時機，早期明確診斷及正確治療是影響預后的關鍵，因此，尋找對肝癌早期診斷有輔助作用的血清腫瘤標志物具有重要的意義。胸苷激酶1(thymidine kinase 1，TK1)是一種與細胞DNA合成和增殖密切相關的激酶，其表達水平與DNA合成呈正相關。檢測血清中TK1含量的變化反映患者體內腫瘤細胞的增殖速度，可作為腫瘤細胞增殖水平的監(jiān)控指標，也有助于臨床評估腫瘤的增殖度惡性程度[1]。本研究應用免疫印跡增強化學發(fā)光法檢測125例初治原發(fā)性肝癌患者術前的血清TK1水平，并與肝臟良性疾病患者和健康體檢者的血清TK1水平進行比較，以探討血清TK1在診斷肝癌中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年1月至2015年5月于廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院住院治療的肝細胞肝癌患者125例(肝癌組)，其中男性107例、女性18例，年齡23～79歲，中位年齡50歲。全部病例均經(jīng)肝穿刺活檢或術后病理確診，能夠進行病理分級且無異議，且臨床病史資料完整。另選取肝臟良性疾病患者30例(肝臟良性病變組)，其中男性18例、女性12例，年齡27～85歲，中位年齡56歲，肝血管瘤11例，肝囊腫12例、肝腺瘤3例和肝硬化4例，均經(jīng)胸腹部CT、磁共振等輔助檢查排除腫瘤。選取健康體檢者40例作為健康對照組，其中男性27例、女性13例，年齡24～70歲，中位年齡48歲，均無心、胃、肺的不良疾病，同時受試者均無肝部疾病史，且排除貧血、女性月經(jīng)期等處于細胞增殖狀態(tài)。3組性別構成、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 主要試劑及儀器 TK1檢測試劑盒(生產批號：NT3160105A)和CIS系列化學發(fā)光數(shù)字成像分析儀均由深圳市華瑞同康生物技術有限公司提供。

1.3 檢測方法 采用免疫印跡增強化學發(fā)光法檢測血清TK1值。所有受試者均于清晨空腹采集靜脈血2 ml，血標本置于真空采血管中，室溫下靜置1 h；4 000 r/min常溫離心10 min，分離血清，貯存于-20℃?zhèn)溆谩z測模板加標準品、待測樣品，室溫晾干20～30 min；稀釋液振搖洗膜2次，5 min/次；加入一抗，室溫振搖反應2 h；漂洗后加二抗室溫反應40 min；洗滌，加入鏈酶親核素一酶復合物，室溫反應1 h；洗滌，加入 電化學發(fā)光發(fā)光劑過膜浸濕1 min，上機檢測。TK1>2 pmol/L即為TK1陽性。

1.4 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料呈非正態(tài)分布，采用中位數(shù)表示，比較采用Kruskal-Wallis檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 肝癌組、肝臟良性病變組與健康對照組血清TK1表達水平的比較 肝癌組TK1水平和陽性表達率均高于肝臟良性病變組與健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。肝臟良性病變組與健康對照組TK1水平和陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組血清TK1表達水平的比較

注：與肝癌組比較，*P<0.05。

2.2 血清TK1水平與肝癌臨床病理特征之間的關系 根據(jù)性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤數(shù)目、HBsAg、 甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)、有無包膜、有無癌栓、有無肝硬化、組織分化程度及巴塞羅那臨床肝癌(Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC)分期等分組比較，結果顯示，BCLC分期(B+C)期肝癌患者血清TK1水平高于(0+A)期肝癌患者(P<0.05)，但不同性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、AFP水平、HBsAg水平以及有無癌栓、肝硬化及組織分化者的TK1濃度比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同肝癌臨床病理特征 患者的血清TK1水平比較[中位數(shù)(最小值，最大值)]

3 討 論

TK1與細胞增殖密切相關，其存在于細胞質中，是DNA合成過程中嘧啶補救途徑的限速酶，它在三磷酸腺苷和鎂離子參與的條件下，催化脫氧胸苷為脫氧胸苷一磷酸進而形成DNA合成所必需的脫氧胸苷三磷酸[1]。正常細胞中TK1受細胞周期的調控，在G1晚期時開始升高，在DNA 合成期開始急劇升高直至S和S2交界處，從G2晚期開始細胞中的TK1急劇降解，直至降低到G1前期最低水平[2]。對于腫瘤患者而言，處于S期、G2期的細胞比例高，原來依賴于后期促進復合物介導的泛素-蛋白酶體降解途徑等在內的一系列細胞周期調控機制被打亂，使得TK1在腫瘤細胞的G1/S期交界處開始升高并持續(xù)至G2或M期。因此，健康人靜止細胞及血清中的TK1濃度極低，一旦細胞發(fā)生癌變，惡性腫瘤患者TK1的含量隨著細胞的急劇增殖而升高，超過正常水平的數(shù)倍[3]。血清中TK1的含量在一定程度上能反應體內腫瘤細胞的增殖情況。

作為一種與腫瘤分裂增殖相關的重要新指標，TK1已應用于多種腫瘤的診斷，包括非小細胞肺癌[4]、胃癌[5]、乳腺癌[6]、膀胱癌[7]等。在本研究中，肝癌組患者TK1水平和陽性表達率均顯著高于肝良性疾病組和健康對照組(P<0.05)，這與肝癌患者腫瘤負荷較高、細胞增殖旺盛有關。此外，健康對照組、肝臟良性疾病組及肝癌組的TKl水平依次升高，推測可能與細胞增殖活性的逐步增強有關，但肝臟良性疾病組與健康對照組之間，TK1水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，這提示血清TK1的檢測對肝癌的診斷具有潛在的應用價值。

對于健康人和腫瘤患者血清中TK1水平不同的具體機制有幾種假說，其中最重要的一種假說是與細胞死亡相關：非惡性細胞在細胞周期中的G1/G0期死亡，此時細胞內的 TK1濃度很低；而腫瘤細胞則在S/G2期死亡，此時細胞內TK1濃度較高，在血清中也會產生更多的TK1，所以腫瘤患者STK1明顯高于健康人[8]。另一種推測是血清中可能存在另一個因素能夠影響 TK1的穩(wěn)定性，此因素在健康人和腫瘤患者中作用不同[9]。

值得注意的是，血清TK1水平升高并不完全意味著惡性腫瘤的潛在，TK1在健康人血清中同樣會有一定程度的升高，如獻血者和月經(jīng)期女性，由于骨髓應激產生了新的血細胞也可導致TK1暫時性升高[10]。炎癥和感染也可使TK1水平一定程度地升高，這是由于炎癥激活了免疫系統(tǒng)，導致免疫功能細胞增殖強化，生長因子結合于細胞膜上特定的載體，啟動一系列事件并最終引起細胞增殖[11-12]。因此檢測血清TK1前應排除炎癥、感染、近期出血、女性月經(jīng)期以及乳腺增生、前列腺增生等增殖性疾病情況下細胞生理或病理性增殖所導致血清TK1升高的情況。

目前國內關于TK1與肝癌臨床病理特征相關性的研究報告不多。本研究結果顯示，與BCLC分期0～A期肝癌患者相比，B～C期肝癌患者TK1水平明顯升高(P<0.05)，提示BCLC分期較晚的肝癌患者，血清TK1水平較高，血清TK1水平可能與肝癌患者臨床分期有關。國內有研究表明，血清TK1水平與非小細胞肺癌臨床分期相關[13]，與本研究結果類似。這可能是因為分期越晚的患者其體內腫瘤負荷較高，增殖細胞較多，隨著腫瘤細胞不斷增生、壞死，釋放入血的TK1水平也隨之升高，這提示TK1水平在一定程度上能反映腫瘤發(fā)展過程。BCLC分期是唯一綜合考慮腫瘤情況、肝功能和患者體力的分期系統(tǒng)[14]，有利于判斷病情、選擇治療方案和評估預后。對初治肝癌患者檢測TK1，能反映腫瘤的分期信息，幫助臨床醫(yī)師掌握腫瘤的增殖程度，以及患者獲得更好的治療方法及評估肝癌患者的預后。另外，本研究結果顯示不同性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、AFP水平、HBsAg水平以及有無癌栓、肝硬化及組織分化者的TK1濃度比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示血清TK1水平與性別、年齡、腫瘤大小及腫瘤數(shù)目、AFP、HBsAg、癌栓、包膜、肝硬化及組織分化程度可能無關，說明TK1在一定程度上具有廣泛適用的特點。

與既往王強等[15]、秦繼寶等[16]報告的原發(fā)性肝癌患者血清TK1陽性表達率(分別為86.0%和82.1%)相比，本研究所得的陽性表達率(61.6%)較低，這可能與選擇的樣本標準、收集的臨床數(shù)據(jù)、地域性或者種族性等多因素有關，具體原因有待進一步研究探討。

AFP 是目前公認診斷原發(fā)性肝癌的首選血清腫瘤標志物，但單項腫瘤標志物檢測的敏感性及特異性往往難以滿足臨床對肝癌診斷、鑒別診斷要求。TK1作為一種新的與腫瘤生長相關的血清學標志物，在肝癌患者血清中高表達，對肝癌的診斷和分期評估具有一定的臨床應用價值，故在實際工作中可將血清TK1檢測作為輔助診斷以提高肝癌的診治水平。

[1] 郭麗香,劉樹業(yè).胸苷激酶1-新型的細胞增殖動力學標志[J].哈爾濱醫(yī)藥,2014,34(5):316-317.

[2] 孫啟強,蘭 斌.胸苷激酶1及其在胃癌中表達的研究進展[J].醫(yī)學綜述,2012,18(6):858-860.

[3] Chen ZH,Guan H,Yuan H,et al.Serum thymidine kinase 1 is a reliable maker for the assessment of the risk of developing malignancy:A case report[J].Oncol Lett,2015,10(3):1 669-1 673.

[4] Xu Y,Liu B,Shi QL,et al.Thymidine kinase 1 is a better prognostic marker than Ki-67 for pT1 adenocarcinoma of the lung[J].Int J Clin Exp Med,2014,7(8):2 120-2 128.

[5] 何燕霞,王 凱,鞏姣梅,等.血清PG,CA72-4和TK1對胃癌篩查及診斷價值的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2016,26(2):240-243.

[6] Jagarlamudi KK,Hansson LO,Eriksson S.Breast and prostate cancer patients differ significantly in their serum thymidine kinase 1(TK1) specific activities compared with those hematological malignancies and blood donors:implications of using serum TK1 as a biomarker[J].BMC Cancer,2015,15:66.

[7] 楊 森,陸浩源,白先忠,等.TK1和Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表達及其相關性[J].廣西醫(yī)學,2015,37(1):18-20.

[8] Munch-Petersen B.Enzymatic regulation of cytosolic thymidine kinase 1 and mitochondrial thymidine kinase 2:a mini review[J].Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids,2010,29(4/6):363-369.

[9] He Q,Zhang P,Zou L,et al.Concentration of thymidine kinase 1 in serum(S-TK1) is a more sensitive proliferation marker in human solid tumors than its activity[J].Oncol Rep,2005,14(4):1 013-1 019.

[10]Topolcan O,Holubec L Jr.The role of thymidine kinase in cancer diseases[J].Expert Opin Med Diagn,2008,2(2):129-141.

[11]Chen ZH,Zhou H,Li SL,et al.Serological thymidine kinase 1(STK1) indicates an elevated risk for the development of malignant tumours[J].Anticancer Res,2008,28(6B):3 897-3 907.

[12]Li ZS,Wang YH,Ma J,et al.Transient increase in serum thymidine kinase 1 within one week after surgery of patients with carcinoma[J].Anticancer Res,2010,30(4):1 295-1 299.

[13]唐 興,何靖康,徐澄澄.非小細胞肺癌患者血清胸苷激酶1濃度與臨床分期及病理類型的相關性[J].江蘇醫(yī)藥,2014,40(21):2 555-2 557.

[14]中華人民共和國衛(wèi)生部.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)[J].臨床肝膽病雜志,2011,27(11):1 141-1 159.

[15]王 強,謝躍文,夏 潔.血清TK1、AFP、CEA 聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價值[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2013,34(9):1 101-1 102.

[16]秦繼寶,薄維波.血清AFP、TK1、DKK1聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值[J].臨床檢驗雜志,2014,32(7):545-547.

Preoperative expression level of serum thymidine kinase 1 in hepatocellular carcinoma patients and its clinical significance

TANGYan-ping,XIEYu-xuan,CAIZheng-min,SUCheng-lin,TANXiao-yu,ZHANGLi-tu,LIJi-lin

(DepartmentofLaboratoryResearch,AffiliatedCancerHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To investigate the preoperative expression level of serum thymidine kinase 1(TK1) in patients with hepatocellular carcinoma(HCC) and its clinical significance.Methods The serum levels of TK1 of 125 patients with HCC(HCC group),30 patients with liver benign lesions(liver benign lesion group) and 40 normal individuals(health control group) were detected by enhanced Western blot-chemiluminescence assay.The relationship of TK1 level with clinicopathological features was analyzed in HCC group.Results The serum level and positive expression rate of TK1 in the HCC group were significantly higher than those in the liver benign lesion group and health control group(P<0.05),but no significant different was found between liver benign lesion group and health control group(P>0.05).The serum level of TK1 in HCC patients with Barcelona Clinic Liver Cancer stage(B+C) was higher than that in the patients with stage(0+A)(P<0.05).Conclusion The detection of serum TK1 has a certain clinical reference value in the diagnosis of HCC.

Hepatocellular carcinoma,Serum thymidine kinase 1

廣西科學研究與技術開發(fā)計劃(桂科攻1298003-2-8)

唐艷萍(1986～)，女，碩士，助理研究員，研究方向：腫瘤分子生物學研究。

利基林(1965～)，男，碩士，副主任技師，研究方向：腫瘤分子診斷學研究，E-mail：455620024@qq.com。

R 735.7

A

0253-4304(2016)09-1219-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.09.08

2016-04-28

2016-06-26)