韋 絢 姚 軍 秦秀妹 黃 靜 于路妹 李志勤 熊蔓萍

(桂林醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院，1 婦產(chǎn)科，2 檢驗科，桂林市 541001，E-mail：gxweixuan@163.com)

論著·臨床研究

E-選擇素、血管黏附分子1在生殖道沙眼衣原體感染患者陰道上皮組織中的表達及臨床意義▲

韋 絢1姚 軍1秦秀妹1黃 靜1于路妹2李志勤1熊蔓萍1

(桂林醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院，1 婦產(chǎn)科，2 檢驗科，桂林市 541001，E-mail：gxweixuan@163.com)

目的 探討生殖道沙眼衣原體感染患者陰道上皮組織中E-選擇素、血管黏附分子1(VCAM1)的表達情況及其意義。方法 選取70例生殖道沙眼衣原體感染女性患者為感染組,選取100例健康女性志愿者或無生殖道感染的良性婦科疾病女性為對照組，采用免疫組化法檢測兩組陰道壁結締組織的E-選擇素、VCAM1表達水平。分析E-選擇素及VCAM1的相關性。結果 感染組患者陰道上皮組織中E-選擇素及VCAM1陽性信號的平均灰度值高于對照組(P<0.05)；生殖道沙眼衣原體感染患者陰道黏膜組織中E-選擇素及VCAM1表達呈正相關(r=0.672，P=0.002)。結論 E-選擇素、VCAM1可能參與了生殖道沙眼衣原體感染過程。

生殖道感染；沙眼衣原體；E-選擇素；血管黏附分子1；陰道上皮組織

生殖道沙眼衣原體感染是由沙眼衣原體引起的、以泌尿生殖道部位炎癥為主要表現(xiàn)的性傳播疾病，是女性常見疾病之一，嚴重者可導致輸卵管性不孕、輸卵管妊娠、不良妊娠(如早產(chǎn)、流產(chǎn))等，目前尚無有效的治療方案[1-2]。因此，早期診斷及治療尤為重要。E-選擇素是黏附分子選擇素家族的主要成員之一，在炎癥過程中可以募集炎癥細胞并使其黏附，促使其產(chǎn)生前炎癥因子，進而加重炎癥進程[3-4]。血管黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM1)屬免疫球蛋白超家族，主要分布于內(nèi)皮細胞、上皮細胞、巨噬細胞，主要介導單核細胞、淋巴細胞與內(nèi)皮細胞黏附，在炎癥因子的產(chǎn)生及釋放中具有十分重要的作用[5]。目前關于這兩個因子是否與生殖道沙眼衣原體感染相關尚不清楚[6]。本研究旨在探討E-選擇素、VCAM1在生殖道沙眼衣原體感染患者陰道上皮組織中的表達，以期為生殖道沙眼衣原體感染臨床治療及預后評估提供更有力的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年8月至2015年8月我院婦科門診診斷為生殖道沙眼衣原體感染女性患者70例為感染組。診斷標準：取陰道分泌物采用單克隆抗體快速免疫法檢測結果陽性，陰道分泌物涂片檢查無淋球菌、滴蟲感染存在，并排除其他病原混合感染。選取同期健康的女性志愿者或無生殖道感染的良性婦科疾病女性100例作為對照組。入選病例均有性生活史、非妊娠期、無盆腔放射治療史、無子宮切除史者，年齡18～60歲。排除有腎功能不全及肝功能不全者，存在生殖器官畸形、卵巢功能障礙、子宮內(nèi)膜異位癥、染色體異常者，不孕不育患者，以及合并婦科惡性腫瘤患者。感染組年齡(29.45±5.29)歲，體重指數(shù)(24.11±3.28)kg/m2，妊娠次數(shù)(1.80±0.05)次；對照組年齡(31.43±4.26)歲，體重指數(shù)(23.46±3.44)kg/m2，妊娠次數(shù)(2.10±0.11)次。兩組的年齡、體重、妊娠次數(shù)等臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，所有研究對象均同意組織取材并簽署知情同意書。

1.2 取材 使用不含潤滑劑及消毒劑的窺陰器進行陰道擴張，用干棉簽擦拭凈宮頸外口分泌物，切取陰道后穹隆陰道壁組織0.5 cm×0.5 cm×0.1 cm。用冷無菌0.9%氯化鈉液洗凈血液后切去組織間質，經(jīng)液氮速凍后貯藏于-80℃低溫冰箱中保存待測。

1.3 檢測方法 將陰道鏡下取得的陰道黏膜活檢組織經(jīng)石蠟包埋后切片，用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶聯(lián)結(streptavidin-perosidase，S-P)法檢測E-選擇素及VCAM1表達情況。兔抗人E-選擇素(生產(chǎn)批號：CM250925，福建邁新生物工程公司)及VCAM1單克隆抗體(生產(chǎn)批號：LS-C172656，福建邁新生物工程公司)工作濃度為1 ∶20，S-P免疫組化試劑盒購自北京中杉橋生物公司(生產(chǎn)批號：SP-9001)，實驗步驟按試劑盒說明書進行。陽性對照采用扁桃體石蠟切片組織進行染色，陰性對照則用磷酸緩沖鹽溶液代替一抗進行以上染色法。每張切片隨機選取5個400倍視野，分析各組陰道壁組織中E-選擇素及VCAM1染色的陽性區(qū)平均灰度值。免疫組化染色的強弱與灰度值成正比，陽性物質越高，染色越深，灰度值越大，反之越小。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以(x±s)表示，組間比較采用t檢驗，相關性分析采用Pearson相關分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組陰道上皮組織中E-選擇素及VCAM1的表達情況 E-選擇素及VCAM1染色呈棕黃色顆粒狀，主要定位于細胞膜及細胞質內(nèi)。感染組陰道黏膜組織中E-選擇素及VCAM1陽性信號的平均灰度值高于對照組(P<0.05)，見表1、圖1。

表1 兩組陰道上皮組織中E-選擇素及VCAM1的表達情況(x±s)

注：A、C 沙眼衣原體感染的陰道上皮組織；B、D 正常陰道上皮組織。

圖1 E-選擇素及VCAM1在兩組陰道上皮組織中的表達情況(S-P染色，400×)。

2.2 E-選擇素及VCAM1相關性分析 70例沙眼衣原體生殖道感染患者的陰道上皮組織中，E-選擇素及VCAM1同時表達陽性者占67.1%(47/70)，同時表達陰性者占21.4%(15/70)，兩者的表達水平呈正相關性(r=0.672，P=0.002)。

3 討 論

沙眼衣原體感染是常見的性傳播疾病，在發(fā)達國家，沙眼衣原體感染占性傳播疾病第一位，而我國沙眼衣原體感染率也在增高。其可引起宮頸黏膜炎、子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、盆腔炎，最后導致不孕或輸卵管妊娠[7-8]。因此，早期診斷及評估生殖道沙眼衣原體感染病情，尋找其感染發(fā)生的危險因素及預測指標，有利于預防和及時治療該疾病，保護母嬰健康。

沙眼衣原體感染早期機體存在劇烈的炎癥反應，重復感染會加劇炎癥反應程度，最終導致不可逆的組織損傷及疤痕的形成。沙眼衣原體表面表達脂蛋白可以通過Toll樣受體及 CD14活化單核巨噬細胞，釋放促炎癥因子[9]。在感染早期的宮頸表皮細胞內(nèi)可以觀察到一些促炎癥因子如白細胞介素(interleukin，IL)-8、IL-6、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子及誘導型一氧化氮合酶mRNA 的表達上調(diào)，以及細胞表面的細胞間黏附因子-1(intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1)的表達增多，且ICAM-1能募集循環(huán)中的中性粒細胞到宮頸上皮細胞表面引發(fā)及加劇炎癥反應[10-13]。

E-選擇素是黏附分子選擇素家族的主要成員之一，為細胞表面糖蛋白，存在于活化的血管內(nèi)皮細胞表面。在炎癥過程中，E-選擇素可通過招募Th1亞型淋巴細胞的黏附和聚集，促使其產(chǎn)生前炎癥因子，從而加重炎癥進程，與此同時，炎癥組織釋放的IL-1及腫瘤壞死因子α等細胞因子可活化血管內(nèi)皮細胞，從而反過來刺激E-選擇素的合成[14]。目前關于E-選擇素在沙眼衣原體生殖道感染的炎癥反應中的作用的研究極少[15]。本研究結果顯示，生殖道沙眼衣原體感染患者陰道黏膜組織中E-選擇素陽性信號的平均灰度值高于對照組(P<0.05)，提示E-選擇素在沙眼衣原體生殖道感染患者的陰道上皮組織中高表達，表明E-選擇素在生殖道感染及炎癥反應中發(fā)揮中重要作用，可能是固有性免疫的受體分子。

在炎性細胞因子的作用下，許多類型細胞上的VCAM1表達可迅速上調(diào)[16]。目前研究顯示，VCAM1參與調(diào)節(jié)免疫反應、細胞和組織的分化與發(fā)育、免疫應答、淋巴細胞歸巢、再循環(huán)以及腫瘤的擴散等[17-18]。本研究結果顯示，生殖道沙眼衣原體感染患者陰道黏膜組織中VCAM1陽性信號的平均灰度值高于對照組(P<0.05)，提示VCAM1在沙眼衣原體生殖道感染患者的陰道上皮組織中高表達，提示VCAM1參與了炎癥的發(fā)生發(fā)展。

VCAM1與E-選擇素均是黏附分子，但由于結構不同，又分屬于不同家族，各自在生理、病理過程中所發(fā)揮的作用不盡相同。VCAM1主要在活化的內(nèi)皮細胞上進行表達，并少量表達于上皮細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞等，但需與受體極遲抗原-4結合發(fā)揮作用。而E-選擇素僅表達于活化的血管內(nèi)皮細胞上[19-20]。本實驗結果顯示，VCAM1與E-選擇素水平變化呈正相關(P<0.05)，說明兩者在生殖系統(tǒng)感染變化趨勢一致。

總之，VCAM1與E-選擇素在沙眼衣原體生殖道感染患者陰道上皮組織中高表達，且變化趨勢一致，可能參與了炎癥反應，但其機制尚需要進一步研究。

[1] Joyee AG,Yang X.Role of toll-like receptors in immune responses to chlamydial infections[J].Curr Pharm Des,2008,14(6):593-600.

[2] Wang L,Cui Y,Zhang L,et al.Influence of gender equity awareness on women′s reproductive healthcare in rural areas of midwest China[J].Int J Gynaecol Obstet,2013,123(2):155-159.

[3] 徐靈敏,孫淇青,邵 斌,等.膿毒癥大鼠心肌CD14和血管細胞黏附分子-1的變化與心肌損害的相關性研究[J].中國急救醫(yī)學,2012,32(2):101-103.

[4] Wiesenfeld HC,Hillier SL,Meyn LA,et al.Subclinical pelvic inflammatory disease and infertility[J].Obstet Gynecol,2012,120(1):37-43.

[5] Sethi S,Singh G,Samanta P,et al.Mycoplasma genitalium:an emerging sexually transmitted pathogen[J].Indian J Med Res,2012,136(6):942-955.

[6] Shanmugasundaram U,Critchfield JW,Pannell J,et al.Phenotype and functionality of CD4+and CD8+T cells in the upper reproductive tract of healthy premenopausal women[J].Am J Reprod Immunol,2014,71(2):95-108.

[7] Racicot K,Cardenas I,Wünsche V,et al.Viral infection of the pregnant cervix predisposes to ascending bacterial infection[J].J Immunol,2013,191(2):934-941.

[8] 陳緒蘭.E-選擇素在生殖道沙眼衣原體感染中的作用研究[J].標記免疫分析與臨床,2015,22(3):199-201.

[9] Michalska M,Machtoub L,Manthey HD,et al.Visualization of vascular inflammation in the atherosclerotic mouse by ultrasmall superparamagnetic iron oxide vascular cell adhesion molecule-1-specific nanoparticles[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2012,32(10):2 350-2 357.

[10]付文靜,郭光紅,付愛峰,等.女性生殖道沙眼衣原體感染免疫病理機制研究現(xiàn)狀[J].中國皮膚性病學雜志,2010,24(11):1 061-1 063.

[11]林 松,黎曼儂,李冬云,等.昆明地區(qū)不孕不育癥患者生殖道支原體和沙眼衣原體感染現(xiàn)狀與分析[J].昆明醫(yī)科大學學報,2013,34(5):121-122,127.

[12]Silva J,Cerqueim F,Medeiros R.Chlamydia trachomatis infection:implications for HPV status and cervical cancer[J].Arch Gynecol Obstet,2014,289(4):715-723.

[13]Cohen CR,Sinei SS,Bukusi EA,et al.Human leukocyte antigen classⅡDQ alleles associated with Chlamydia trachomatis tubal infertility[J].Obstet Gynecol,2000,95(1):72-77.

[14]王燕舞,孟運蓮,羅善云.女性生殖道沙眼衣原體感染免疫機制的研究進展[J].國外醫(yī)學婦幼保健分冊,2002,13(1):4-6.

[15]黎 蘋,朱建華,黃元偉.肺炎衣原體對血管內(nèi)皮細胞的感染及其對ICAM-1表達的影響[J].中國病理生理雜志,2004,20(8):1 402-1 406.

[16]賀立新,郭振榮,呂 藝,等.燒傷大鼠早期切痂對內(nèi)皮細胞間粘附分子-1及E-選擇素 mRNA表達影響[J].中華外科雜志,1999,37(11):692-694.

[17]Trifonova RT,Bajpai M,Pasicznyk JM,et al.Biomarkers of leukocyte traffic and activation in the vaginal mucosa[J].Biomarkers,2007,12(6):608-622.

[18]Bas S,James RW,Gabay C.Serum lipoproteins attenuate macrophage activation and Toll-Like Receptor stimulation by bacterial lipoproteins[J].BMC Immunol,2010,11:46.

[19]Huang GT,Eckmann L,Savidge TC,et al.Infection of human intestinal epithelial cells with invasive bacteria upregulates apical intercellular adhesion molecule-1(ICAM)-1 expression and neutrophil adhesion[J].J Clin Invest,1996,98(2):572-583.

[20]王玉賢,李立桃.孕婦生殖道沙眼衣原體感染IL-2、IL-6、IL-8的檢測及意義[J].山西醫(yī)科大學學報,2009,40(5):472-474.

Expression and clinical significance of E-selection and vascular cell adhesion molecule-1 in vaginal epithelium of patients with genital tractChlamydiatrachomatisinfection

WEIXuan1,YAOJun1,QINXiu-zhu1,HUANGJing1,YULu-mei2,LIZhi-qin1,XIONGMan-ping1

(1DepartmentofObstetricsandGynecology,2ClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofGuilinMedicalCollege,Guilin541001,China)

Objective To explore the significance and expression of E-selection and vascular cell adhesion molecule-1(VCAM1) in the vaginal epithelium of patients with genital tractChlamydiatrachomatisinfection.Methods Seventy female patients with genital tractChlamydiatrachomatisinfection were enrolled as infection group,and 100 healthy female volunteers or female patients with benign gynecological diseases but without genital tract infection as control group.Immunohistochemistry was used to detect the expression levels of E-selection and VCAM1 in vaginal wall connective tissues.The correlation of E-selection with VCAM1 was analyzed.Results The average gray values of E-selection and VCAM1 positive signal in vaginal epithelium of the patients in the infection group were higher than those in the control group(P<0.05).In vaginal mucosa tissues of the patients with genital tractChlamydiatrachomatisinfection,E-selection expression positively correlated with VCAM1 expression(r=0.672,P=0.002).Conclusion E-selection and VCAM1 may be involved in the process of genital tractChlamydiatrachomatisinfection. 【Key words】 Genital tract infection，Chlamydiatrachomatis,E-selection,Vascular cell adhesion molecule-1,Vaginal epithelium tissue

廣西醫(yī)藥衛(wèi)生科研課題(Z2014337)

韋絢(1968～)，女，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤。

R 711.31

A

0253-4304(2016)03-0332-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.03.10

2015-12-12

2016-02-16)