秦 臻 吳 成 陳苗苗

(安徽省兒童醫(yī)院消化內(nèi)科，合肥市 230000，E-mail：qinzhenetyy@126.com)

論著·臨床研究

潰瘍性結(jié)腸炎患兒的糞鈣衛(wèi)蛋白和血清白介素-2水平及其臨床意義

秦 臻 吳 成 陳苗苗

(安徽省兒童醫(yī)院消化內(nèi)科，合肥市 230000，E-mail：qinzhenetyy@126.com)

目的 分析潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患兒糞便中鈣衛(wèi)蛋白(FCP)和血清白介素-2(IL-2)水平及其在評估UC活動性及病情嚴(yán)重程度中的臨床意義。方法 選擇23例UC緩解期患兒、41例UC活動期患兒及20例單純腹瀉患兒，檢測其FCP和血清IL-2的水平，同時對活動期UC患兒進行腸鏡檢查，進行內(nèi)鏡分級及臨床嚴(yán)重程度評估。結(jié)果 UC患兒中位FCP水平為451.8 μg/g，顯著高于單純腹瀉患兒的34.6 μg/g(P<0.05)，活動期UC患兒、緩解期UC患兒及單純腹瀉患的FCP水平依次降低(P<0.05)；UC患兒中位IL-2水平為213.0 ng/L，低于單純腹瀉患兒的349.2 ng/L(P<0.05)，活動期UC患兒、緩解期UC患兒及單純腹瀉患的FCP水平依次升高(P<0.05)。64例UC患兒的Mayo評分與FCP水平呈正相關(guān)(P<0.05)，與IL-2水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。在活動期UC患兒中，F(xiàn)CP水平與Mayo評分、臨床嚴(yán)重程度以及內(nèi)鏡下分級呈正相關(guān)性(P<0.05)，而IL-2與Mayo評分、臨床病情分度與內(nèi)鏡下分級負(fù)相關(guān)性(P<0.01)，F(xiàn)CP與IL-2呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論 檢測FCP和IL-2水平有助于判斷患兒活動性和病情嚴(yán)重程度。

潰瘍性結(jié)腸炎；糞便鈣衛(wèi)蛋白；白介素-2；兒童；病情嚴(yán)重度；活動性

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種與免疫、遺傳、環(huán)境等多種因素相關(guān)的腸道非特異性炎癥反應(yīng)性疾病，具有病程長、治療難度大、反復(fù)發(fā)作等特點，尤其是對于兒童患者，且遷延不愈者發(fā)生癌變、出血等嚴(yán)重并發(fā)癥的概率大大增加，因此需科學(xué)評估病情活動性和嚴(yán)重程度，進而指導(dǎo)治療。目前腸鏡及病理檢查是評估UC患兒活動性和嚴(yán)重程度最準(zhǔn)確的方法，但腸鏡是有創(chuàng)檢查，操作中有導(dǎo)致多種并發(fā)癥發(fā)生的可能，患兒及其家長的接受度較低，因此糞便和血清學(xué)檢驗等無創(chuàng)檢查成為近年來關(guān)注的焦點。

鈣衛(wèi)蛋白(calprotectin，CP)是一種來源于中性粒細(xì)胞的炎癥標(biāo)記物，在鈣離子存在時其可獲得良好的穩(wěn)定性，能長期存在于腸道和外界環(huán)境中而不被破壞。國內(nèi)外研究顯示，UC患者糞便鈣衛(wèi)蛋白(fecal calprotectin，F(xiàn)CP)水平明顯升高，F(xiàn)CP與UC活動性有一定相關(guān)性，可以動態(tài)反映UC的活動性[1-2]。白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)是T細(xì)胞分泌的淋巴因子，它可以減少自身免疫抗體的產(chǎn)生，減輕自身免疫對組織的損傷，發(fā)揮保護作用。但是，上述研究多針對成人UC患者，有關(guān)兒童UC的研究報道較少，而鮮有聯(lián)合檢測FCP及IL-2以了解炎癥和免疫在UC發(fā)生發(fā)展中的相互作用的研究。本研究對58例UC患兒進行檢測FCP和血清IL-2，旨在了解FCP、IL-2與兒童UC活動性和嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年10月至2015年2月我院收治的UC患兒64例，年齡7～13(10.3±1.8)歲，男性35例，女性29例。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患兒均符合《對我國炎癥性腸病診治規(guī)范的共識意見》中有關(guān)UC的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他消化系統(tǒng)器質(zhì)性疾病者；合并嚴(yán)重肝腎功能不全者；近期服用非甾體類抗炎藥物者。根據(jù)改良Mayo評分系統(tǒng)將患兒分為緩解期和活動期[4]。其中，緩解期患兒23例，男性13例，女性10例，年齡9～13(10.5±1.4)歲，Mayo評分(5.7±1.1)分；活動期患兒41例，男性22例，女性19例，年齡8～13(10.2±1.7)歲，Mayo評分(1.2±0.3)分?；顒悠诨純壕心c鏡檢查，內(nèi)鏡分級標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[5]，臨床嚴(yán)重程度標(biāo)準(zhǔn)參照上述共識意見；臨床嚴(yán)重程度：輕度6例，中度23例，重度12例；內(nèi)鏡嚴(yán)重程度分級：Ⅰ級4例，Ⅱ級13例，Ⅲ級16例，Ⅳ級8例。選取同期出現(xiàn)腹瀉但腸鏡檢查未見明顯病灶的患兒20例作為對照，其中男性10例，女性10例，年齡8～13(10.5±1.7)歲。3組患者間性別、年齡資料無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性。

1.2 標(biāo)本收集 所有患兒于治療前留取糞便標(biāo)本5～10 g，活動期患兒均在腸鏡檢查前1周內(nèi)留取標(biāo)本，2 h內(nèi)置于-20℃冰箱保存。按照糞便重量(1 g)：萃取液容積(49 ml)的比例加入萃取液，充分震蕩混勻后提取混懸液2 ml，3 000 r/min離心10 min后再次提取上清液1 ml，置于-20℃冰箱待檢。抽取患者治療前清晨空腹靜脈血4 ml，3 000 r/min離心10 min、分離血清，分裝乙二胺四乙酸管后置于-20℃冰箱待檢。上述所有操作均為治療前進行，于標(biāo)本留取后72 h內(nèi)完成。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測FCP及IL-2 (1)FCP試劑盒購自北京海瑞翔天生物制劑有限公司，酶標(biāo)儀為伯樂公司USA Bio-Rad 550型。將提取液常溫解凍，按1 ∶50的比例稀釋，常規(guī)ELISA法流程檢測FCP，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作。酶標(biāo)儀設(shè)置為405 nm進行測定吸光度(A值)。標(biāo)準(zhǔn)液包括7個濃度，最高濃度標(biāo)準(zhǔn)液的A值為1.2～1.5。計算標(biāo)準(zhǔn)曲線并換算標(biāo)本鈣衛(wèi)蛋白濃度。(2)血清IL-2采用ELISA法測定，試劑盒購自上海研域生物試劑有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 15.0 軟件進行統(tǒng)計分析。不符合正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)(四分位數(shù)間距)[M(P25～P75)]表示，采取Kruskal-Wallis秩和檢驗，兩兩比較采取秩次轉(zhuǎn)換后的SNK-q檢驗方法。相關(guān)系數(shù)用Spearman相關(guān)分析計算并進行檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 UC患兒和單純腹瀉患兒的FCP、IL-2水平比較 (1)64例UC患兒的中位FCP水平為451.8 μg/g，高于單純腹瀉患兒的34.6 μg/g(H=8.236，P=0.029)。其中活動期UC患兒及緩解期患兒的FCP水平均高于單純腹瀉患兒(P<0.05)；活動期UC患兒的FCP水平高于緩解期UC患兒(P<0.05)。(2)UC患兒的中位IL-2水平為213.0 ng/L，低于單純腹瀉患兒的349.2 ng/L(H=6.018，P=0.019)。其中活動期UC患兒及緩解期患兒的IL-2水平均低于單純腹瀉患兒(P<0.05)；活動期UC患兒的IL-2水平低于緩解期UC患兒(P<0.05)。見表1。

表1 3組FCP和IL-2水平比較[M(P25～P75)]

注：*與緩解期UC相比，P<0.05；#與單純腹瀉患兒相比，P<0.05。

2.2 UC患兒FCP、IL-2與UC活動性的相關(guān)性 對64例UC患兒Mayo評分與FCP進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示Mayo評分與FCP水平呈正相關(guān)(r=0.612，P=0.038)。43例活動期UC患兒中，Mayo評分與FCP水平亦呈正相關(guān)(r=0.837，P=0.022)。而64例患兒中的IL-2與病情活動性(Mayo評分)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.540，P=0.007)，43例UC活動期患兒Mayo評分與IL-2水平亦呈負(fù)相關(guān)(r=-0.667，P=0.005)。

2.3 活動期 UC患兒的FCP水平與臨床嚴(yán)重程度、內(nèi)鏡分級的相關(guān)性 43例活動期UC患兒中，F(xiàn)CP水平與臨床嚴(yán)重程度及內(nèi)鏡分級呈正相關(guān)(r=0.663，P<0.026；r=0.746，P<0.021)。

2.4 活動期UC患兒 IL-2水平和臨床嚴(yán)重程度、內(nèi)鏡分級的相關(guān)性 43例活動期UC患兒中，IL-2水平和臨床嚴(yán)重程度、內(nèi)鏡分級呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.713，P=0.001，r=-0.809，P=0.003)。FCP與IL-2呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.538，P=0.012)。

3 討 論

兒童UC發(fā)病率雖然低于中青年人群，但是由于發(fā)病年齡過早，后期繼發(fā)多種嚴(yán)重并發(fā)癥的概率大大增加，所以更加強調(diào)病情評估和科學(xué)治療。如何選擇非侵入性檢查方法幫助臨床評估成為目前研究的重點。炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答失衡是UC發(fā)生發(fā)展中兩個重要特征，從炎癥和免疫的角度出發(fā)進行相關(guān)檢測可能獲得一定突破。CP分布于溶酶體外的細(xì)胞液中，占細(xì)胞總蛋白的5%～10%，在許多炎癥的情況下CP水平升高，是急性炎癥活化的良好標(biāo)記物[6]。由于和鈣離子螯合，它具有較強的抗熱性和抗蛋白酶活性，不被細(xì)菌和溶菌酶分解，體外存在時間長，穩(wěn)定性強，使得檢測糞便中FCP成為可能。對于UC患兒而言，糞便標(biāo)記物比血清標(biāo)記物更能直觀地反應(yīng)腸道黏膜炎癥反應(yīng)程度，而且穩(wěn)定性、可靠性高。

國內(nèi)外研究顯示，F(xiàn)CP和腸黏膜內(nèi)CP表達(dá)水平呈正相關(guān)性，兩者在UC患者中明顯升高，檢測FCP水平可用于UC的輔助診斷、病情評估和預(yù)后判斷。其中，韓瑋等[7]分別用免疫組化和ELISA法檢測UC患者腸黏膜FCP水平，發(fā)現(xiàn)UC患者腸黏膜FCP表達(dá)水平明顯高于正常人群。FCP可以用于UC診斷，Tibble等[8]認(rèn)為FCP診斷UC的敏感性和特異性可達(dá)50%和90%。除此之外，鄶國虎等[9]還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)CP與UC患者內(nèi)鏡分級、組織學(xué)嚴(yán)重程度有關(guān)，F(xiàn)CP與腸鏡下分級的相關(guān)系數(shù)高于傳統(tǒng)炎癥標(biāo)記物C反應(yīng)蛋白和紅細(xì)胞沉降率，了解FCP水平有助于判斷疾病活動性。但是，上述研究均針對成人UC患者，而本研究檢測兒童UC FCP水平，結(jié)果顯示，64例UC患兒中位FCP水平為451.8 μg/g，與國內(nèi)外報道的差別不大[10]，其水平顯著高于單純腹瀉的患兒(P<0.05)，考慮與UC腸黏膜中性粒細(xì)胞聚集有關(guān)，進一步證實UC患兒高炎癥反應(yīng)的特點。此外，本研究結(jié)果顯示，在活動期UC患兒、緩解期UC患兒、單純腹瀉患兒中FCP水平呈遞減的趨勢(P<0.05)，UC患兒的FCP水平與Mayo評分呈正相關(guān)(P<0.05)，而活動期UC患兒Mayo評分與FCP水平呈正相關(guān)(P<0.05)。由此可見，F(xiàn)CP水平隨UC病情活動性程度變化而變化，F(xiàn)CP在UC活動期增高，緩解后降低，了解FCP可以間接判斷UC的活動性。此外，活動期UC患兒的FCP水平也隨著臨床嚴(yán)重程度以及內(nèi)鏡下分級的增高而升高(P<0.05)。這表明FCP對于判斷活動期UC患兒的臨床病情、內(nèi)鏡表現(xiàn)嚴(yán)重程度也有一定意義，因此，在臨床上可以嘗試根據(jù)FCP水平?jīng)Q定是否需要應(yīng)用激素或單克隆抗體藥物以及選擇藥物使用的劑量等。但是，不同程度UC患兒FCP的診斷臨界值以及是否具有臨床實際指導(dǎo)價值仍有待于進一步研究。

除了炎癥反應(yīng)外，免疫應(yīng)答也是UC演變不可或缺的一部分。目前的觀點認(rèn)為，UC患者腸道黏膜局部免疫狀態(tài)失衡，腸腔內(nèi)菌群抗原發(fā)生紊亂性免疫應(yīng)答，進而引起效應(yīng)T細(xì)胞失控，表現(xiàn)為抑炎性細(xì)胞因子降低和促炎性細(xì)胞因子活化[11]。IL-2是Th1細(xì)胞分泌的特征性細(xì)胞因子，有關(guān)其在UC發(fā)展中的作用及意義的研究較少，但是大部分研究表明IL-2作為抑炎性因子可以減少自身免疫抗體的產(chǎn)生，并減輕自身免疫對組織的損傷，以發(fā)揮黏膜保護作用。鄒陽等[12]通過對UC大鼠模型研究后發(fā)現(xiàn)，大鼠腸黏膜IL-2含量較正常大鼠明顯降低，而通過有效治療，IL-2水平再次升高，這很好地體現(xiàn)了UC大鼠在不同階段機體免疫應(yīng)答的變化。在本研究中，UC患兒血清中位IL-2為213.0 ng/L，低于單純腹瀉患兒的349.2 ng/L(P<0.05)，且活動期UC患兒IL-2與病情活動性、臨床嚴(yán)重程度與內(nèi)鏡下分級均呈負(fù)相關(guān)性(P<0.01)。這提示UC患兒機體免疫狀態(tài)紊亂，了解IL-2水平是否降低有助于判斷病情有無進展。值得注意的是，F(xiàn)CP升高和IL-2降低分別是UC患兒炎癥反應(yīng)增強和自身免疫低下的表現(xiàn)，活動期UC患兒中兩者水平呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05)，即病情越重的患兒FCP更高而IL-2更低。因此，將兩者聯(lián)合檢測時，有助于更加準(zhǔn)確地做出病情評估。

總之，了解FCP和IL-2水平有助于判斷患兒活動性和病情嚴(yán)重程度，且FCP和IL-2水平檢測具有安全無創(chuàng)、準(zhǔn)確可靠的優(yōu)點。

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Levels of fecal calprotectin and serum interleukin-2 in children with ulcerative colitis and its clinical significance

QINZhen,WUCheng,CHENMiao-miao

(DepartmentofGastroenterology,AnhuiprovincialChildren′shospital,Hefei230000,China)

Objective To investigate the levels of fecal calprotectin(FCP) and serum interleukin-2(IL-2) in children with ulcerative colitis(UC),and its clinical significance for evaluating the activity and severity of UC.Methods Twenty-three children in the remission stage of UC,41 children with active UC and 20 children with diarrhea alone were enrolled.The levels of FCP and serum IL-2 were detected in all children.For children with active UC,the enteroscopy was conducted,then the endoscopic grading and clinical severity were evaluated.Results The median level of FCP in the children with UC was 451.8 μg/g,and was significantly higher than that in the children with diarrhea alone(34.6 μg/g,P<0.05).The level of FCP decreased in the order of the children with active UC,the children in the remission stage of UC and the children with diarrhea alone(P<0.05).The median level of IL-2 in the children with UC was 213.0 ng/L,and was significantly lower than that in the children with diarrhea alone(349.2 ng/L,P<0.05).The level of IL-2 increased in the order of the children with active UC,the children in the remission stage of UC and the children with diarrhea alone(P<0.05).In the 64 children with UC,the Mayo score positively correlated with the FCP level(P<0.05),and negatively correlated with the IL-2 level(P<0.05).For the children with active UC,the FCP level positively correlated with the Mayo score,disease severity and endoscopic grading(P<0.05),but the IL-2 level negatively correlated with the Mayo score,disease severity and endoscopic grading(P<0.01),and the FCP level negatively correlated with IL-2(P<0.05).Conclusion The detection of FCP and IL-2 levels is helpful for evaluating the activity and severity of UC.

Ulcerative colitis,Fecal calprotectin,Interleukin-2,Children,Disease severity,Activity

秦臻(1979～)，女，本科，主治醫(yī)師，研究方向：兒童炎癥性腸病。

吳成(1963～)，男，本科，主任醫(yī)師，研究方向：兒童消化系統(tǒng)疾病的研究，E-mail：12052449@qq.com。

R 574.621；R 446.6

A

0253-4304(2016)05-0671-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.05.20

2015-11-25

2016-02-20)