程雪菊 徐鳳娟 黃珊珊

(江蘇省太倉市第一人民醫(yī)院婦科，太倉市 215400，E-mail：zscxzety@163.com)

論著·臨床研究

薄層液基細胞學技術(shù)聯(lián)合第2代雜交捕獲乳頭狀瘤病毒DNA檢測在宮頸癌前病變及宮頸癌篩查的應用價值▲

程雪菊 徐鳳娟 黃珊珊

(江蘇省太倉市第一人民醫(yī)院婦科，太倉市 215400，E-mail：zscxzety@163.com)

目的 探討薄層液基細胞學(TCT)技術(shù)聯(lián)合第2代雜交捕獲乳頭狀瘤病毒DNA(HCⅡ-HPV)檢測在宮頸癌前病變及宮頸癌篩查中的應用價值。方法 選取110例進行篩查的女性，均行TCT、HCⅡ-HPV檢測及陰道鏡下病理檢查，分析TCT、HCⅡ-HPV檢測方法與病理結(jié)果的符合情況；以病理結(jié)果為金標準，分析 TCT、HCⅡ-HPV及兩者聯(lián)合對宮頸癌前病變的診斷效能。結(jié)果 TCT檢測中僅高度鱗狀上皮內(nèi)病變和鱗狀上皮癌與對應的病理分級符合率均高(100%)，HCⅡ-HPV僅與宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變Ⅲ、原位癌兩個病理分級的陽性符合率較高(80%以上)，但聯(lián)合診斷與病理診斷各項分級的陽性符合率均較高，均達90%以上。聯(lián)合診斷的靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值均高，且高于單一檢測方法。結(jié)論 TCT和HCⅡ-HPV聯(lián)合檢測可提高診斷的靈敏度和特異度，增加宮頸癌及癌前病變的陽性檢出率，降低漏診率。

癌前病變；宮頸癌；薄層液基細胞學技術(shù)；第2代雜交捕獲乳頭狀瘤病毒脫氧核糖核酸

宮頸癌是婦科常見腫瘤，在出現(xiàn)癌變之前宮頸組織往往經(jīng)歷各種組織病理學改變，被視為癌前病變[1]。如能對不同級別和種類的癌前病變進行篩查和診斷，將對腫瘤的早期診斷和治療起到至關(guān)重要的作用，從而明顯改善患者預后。病理組織學檢查雖然是金標準，但由于為有創(chuàng)檢查，部分患者不能接受，且耗時較長，因此無法作為篩查手段[2-3]。超薄液基細胞學(thin liquid-based cytology，TCT)檢查是將液體儲存于宮頸細胞，自動制成細胞單層、圖像清晰的薄片，進而行細胞學檢查，相關(guān)研究顯示TCT可提高異常宮頸細胞的檢出率[4]。第2代雜交捕獲(hybridization capture Ⅱ，HCⅡ)人乳頭狀瘤病毒DNA(human papillomavirus DNA，HPV)檢測是采用熒光定量PCR技術(shù)對細胞進行擴增，觀察基因改變情況，具有較高的診斷靈敏度。本研究對110例女性采用TCT與HCⅡ-HPV檢測，探討其在宮頸癌及癌前病變篩查中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年1月至2015年1月在我院接受檢查的女性共110例，其中絕經(jīng)后婦女54例，絕經(jīng)前婦女56例，年齡39～68(58.4±6.8)歲，臨床表現(xiàn)為白帶異常、宮頸炎、接觸性出血、陰道流血等。納入標準：(1)無宮頸手術(shù)史或子宮切除史；(2)無盆腔放療史。排除標準：(1)1周內(nèi)使用抗生素者；(2)處于月經(jīng)期者；(3)妊娠期婦女。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準，并簽訂醫(yī)患知情同意書。

1.2 檢測方法

1.2.1 TCT檢查：在檢查前3 d內(nèi)不進行陰道沖洗，24 h禁止性行為?；颊呷〗厥?，使用窺器打開陰道暴露宮頸，用棉球擦去宮頸表面分泌物，使用專用刷順時針轉(zhuǎn)動3～5圈從而收集患者宮頸轉(zhuǎn)化區(qū)細胞，然后立即將上述細胞標本保存至專用保存瓶中。如遇分泌物較多或出血時，用棉球輕擦，如取材過程中出現(xiàn)宮頸出血，須立即停止。將宮頸刷的尖端放入頸管內(nèi)，兩邊緊貼宮頸的外口取材。取材后將采集刷置入裝有細胞保存液的小瓶中漂洗，采用全自動薄層細胞制片機制片并檢測。按照2001年巴氏分類系統(tǒng)(The Bethesda System，TBS)[5]中的標準進行細胞學分類，分別為：(1)未見癌細胞或癌前病變細胞正常范圍(within normal limits，WNL)；(2)意義不明的異常鱗狀上皮細胞 (abnormal squamous cells of undetermined significance，ASCUS)；(3)低度鱗狀上皮內(nèi)病變( low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)；(4)高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)；(5)鱗狀上皮癌(squamous-cell carcinoma，SCC)。細胞學診斷處于或高于ASCUS級別可判為陽性。

1.2.2 HCⅡ-HPV檢測：在檢查前3 d內(nèi)不進行陰道沖洗，24 h禁止性行為。患者取截石位，使用窺器打開陰道暴露宮頸，用棉球擦去宮頸表面分泌物，用專用棉簽收集宮頸分泌物，依次裂解-雜交-捕獲-結(jié)合-沖洗-收集信號，然后采用熒光定量PCR技術(shù)進行擴增和雜交捕獲，HCⅡ試劑盒由美國 Digene公司提供(生產(chǎn)批號018RIB)，操作嚴格按說明書進行。共檢測13種高危 HPV亞型，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68。陽性診斷閾值相對光單位/臨界值=1.0。

1.2.3 病理學檢查：在檢查前3 d內(nèi)不進行陰道沖洗，24 h禁止性行為?；颊呷〗厥?，使用窺器打開陰道暴露宮頸，在陰道鏡下采用多點法(0點、3 點、6點、9點)取宮頸組織進行病理組織學檢查，取材后標本用10%甲醛固定，鏡下表現(xiàn)分為正常、低級別[宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ]、中級(CINⅡ)、高級上皮內(nèi)瘤變(CINⅢ)和原位癌，≥CINⅠ為陽性。TCT中，WNL對應的病理分級為“正?！?，ASCUS對應的病理分級為“CINⅠ”，LSIL對應的病理分級為“CINⅡ”，HSIL對應的病理分級為“CINⅢ”，SCC對應的病理分級為“原位癌”。1.2.4 聯(lián)合診斷：TCT及HCⅡ-HPV中有一種或兩種為陽性即定義為陽性，反之則為陰性。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料以頻數(shù)或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗。以病理結(jié)果為金標準，計算以TCT、HCⅡ-HPV及兩者聯(lián)合診斷宮頸癌前病變的靈敏度、特異度等。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 TCT檢測結(jié)果與病理結(jié)果的符合情況 TCT檢測中，LSIL與對應的病理分級符合率均較高，HSIL與SCC與對應的病理分級符合率達100%，見表1。

表1 TCT檢測結(jié)果與病理結(jié)果符合情況(n)

2.2 HCⅡ-HPV檢測結(jié)果與病理結(jié)果的符合情況 110例患者中，HCⅡ-HPV與CIN Ⅲ、原位癌兩個病理分級的陽性符合率較高，見表2。

表2 HCⅡ-HPV檢測結(jié)果與病理結(jié)果符合情況[n(%)]

2.3 TCT及HCⅡ-HPV聯(lián)合檢測與病理結(jié)果的符合情況 聯(lián)合診斷與各項病理分級的陽性符合率均較高，見表3。

表3 聯(lián)合檢測結(jié)果與病理結(jié)果符合情況[n(%)]

2.4 HCⅡ-HPV、TCT及兩者聯(lián)合對宮頸癌前病變診斷效能的比較 聯(lián)合診斷的靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值均較高，均高于單一檢查方法，見表4～7。

表4 TCT與病理檢查結(jié)果比較(n)

表5 HCⅡ-HPV與病理檢查結(jié)果比較(n)

表6 TCT聯(lián)合HCⅡ-HPV檢測與病理結(jié)果比較(n)

表7 HCⅡ-HPV、TCT及兩者聯(lián)合檢查的診斷效能比較(%)

3 討 論

各種癌前病變是宮頸癌產(chǎn)生之前的必經(jīng)階段，但患者在癌前病變階段往往無臨床癥狀或癥狀不典型，因此導致誤診和漏診，待患者出現(xiàn)宮頸癌特異癥狀而就診時，已錯過最佳治療時間，嚴重影響了患者的生存質(zhì)量[6]，因此宮頸癌的早期診斷對治療有至關(guān)重要的作用。病理組織學檢查是診斷宮頸癌的金標準，但病理檢查耗時長，且患者往往不愿接受診斷性取材，因此普及率不高，在篩查和隨訪中價值較小。如何尋找一種簡便、快速、靈敏的診斷方法一直是學界的研究熱點之一。TCT是基于巴氏涂片法基礎(chǔ)上產(chǎn)生的一種新的細胞檢測技術(shù)，它改變了傳統(tǒng)的涂片方法，將標本取出后即放入細胞保存液中，有效保留了全部標本，同時采用專用儀器程序化高精度地制成2 cm的薄層涂片，既減少了耗時、簡化操作，同時顯著提高了檢出陽性率[7-8]。葉健如等[9]采用TCT檢測了20 852例患者，發(fā)現(xiàn)其診斷靈敏度、特異度和準確度較高，分別達到81.8%、73.6%和75.5%。HCⅡ-HPV檢測是基于PCR技術(shù)而建立的一種新型核酸檢測方法。宮頸癌與人乳頭瘤病毒感染具有密切關(guān)系[10]。因此若能探測到宮頸癌前病變患者中HPV基因表達升高，將對癌前病變的診斷和高危病人的篩選起到重要的輔助作用。因此采用TCT和HCⅡ-HPV聯(lián)合檢測，具有一定的臨床意義[11-12]。

HPV病毒是一種雙鏈DNA病毒，迄今為止共發(fā)現(xiàn)200余種亞型，可分為高危型和低危型。在本研究中，也出現(xiàn)部分病例HPV表達升高，而組織學和TCT診斷級別較低的病例，藍松等[13]也報告了這一現(xiàn)象，考慮主要與一過性HPV感染有關(guān)，從而導致了假陽性。TCT檢測的靈敏度較高，而特異度較低[14]，而HCⅡ-HPV檢測雖然特異度高，但靈敏度較低，所以有必要采用兩種方法聯(lián)合診斷，以提高診斷靈敏度和特異度。TCT檢測中，僅LSIL、HSIL與SCC與對應的病理分級符合率較高，HCⅡ-HPV僅與CIN Ⅲ、原位癌兩個病理分級的陽性符合率較高，但聯(lián)合診斷與各項病理分級的陽性符合率均較高，均達90%以上。進一步分析發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合診斷的靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值均較高，切高于單一檢測方法，而Leung等[14]的研究結(jié)果與本研究結(jié)果相似，提示 TCT聯(lián)合HCⅡ-HPV檢測對宮頸癌前病變有顯著診斷價值。

綜上所述，TCT和HCⅡ-HPV檢測操作方便，耗時少，兩者聯(lián)合檢測可有效彌補各自的不足，提高診斷的靈敏度和特異度，增加宮頸癌及癌前病變的陽性檢出率，降低漏診率。將其應用于宮頸癌的篩查中，對于早期發(fā)現(xiàn)、診斷和治療宮頸癌具有重要的臨床意義。

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Application value of thin liquid-based cytology combined with hybridization capture Ⅱ of human papillomavirus DNA detection in screening of cervical precancerous lesions and cervical cancer

CHENGXue-ju,XUFeng-juan,HUANGShan-shan

(DepartmentofGynaecology,theFirstPeople′sHospitalofTaicang,Taicang215400,China)

Objective To investigate the application value of thin liquid-based cytology(TCT) combined with hybridization capture Ⅱ of human papillomavirus DNA(HCⅡ-HPV) detection in the screening of cervical precancerous lesions and cervical cancer.Methods A total of 110 females underwent screening were enrolled,and received TCT,HCⅡ-HPV detection,and pathological examination under vaginoscope.The coincidence between the result of TCT/HCⅡ-HPV and pathological result was analyzed.Taking the pathological result as the golden standard,the diagnostic efficacy of TCT,HCⅡ-HPV and their combination for cervical precancerous lesions was analyzed.Results In TCT,only the coincidence rate of high-grade squamous intraepithelial lesion and squamous-cell carcinoma with corresponding pathological grade were high(100%).While in HCⅡ-HPV,only the positive coincidence rates of with two pathological grades including cervical intraepithelial neoplasia Ⅲ and carcinoma in situ were high(>80%).But in the combination test,positive coincidence rates of all pathological grades were high(>90%).The sensitivity,specificity,positive predictive value,and negative predictive value of combined detection were high,and higher than those of any single detection.Conclusion The detection of TCT combined with HCⅡ-HPV can improve the diagnostic sensitivity and specificity,increase the positive detection rate of cervical cancer and precancerous lesions,and decrease rate of missed diagnosis. 【Key words】 Cervical precancerous lesions,Cervical cancer,Thin liquid-based cytology,Hybridization capture II human papillomavirus DNA

江蘇省蘇州市科技計劃項目(H1612)

程雪菊(1969～)，女，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤診治。

R 737.33

A

0253-4304(2016)12-1661-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.12.10

2016-07-01

2016-09-28)