尤佳，單穎

(1.遼寧醫(yī)學院，遼寧錦州121000;2.錦州市疾病預防控制中心，遼寧錦州121000)

2009至2015年度遼寧省錦州市流感樣病例和病原學特征分析

尤佳1，2，單穎1*

(1.遼寧醫(yī)學院，遼寧錦州121000;2.錦州市疾病預防控制中心，遼寧錦州121000)

了解遼寧省錦州市2009至2015年度流感流行特征及優(yōu)勢毒株的分布情況，為流感的預警和防治提供依據(jù)。統(tǒng)計錦州市2009至2015年度流感樣病例(ILI)監(jiān)測數(shù)據(jù)及病原學結果，分析ILI百分比(ILI%)、病毒分離率及各亞型的變化規(guī)律。共監(jiān)測ILI 51 277例，ILI%為2.28%，主要集中于0～15歲年齡段，占56.72%;采集8 254份ILI咽拭子標本，其中陽性467份，病毒分離率為5.66%，其中新甲型H1N1型192份、季節(jié)性H3型186份、B型Yamagata系37份、B型Victoria系52份。2009年和2013年以新甲型H1N1 (55.73%，83.33%)為主，2011年以BY(74.42%)為主，其他年份以季節(jié)性H3型為流感優(yōu)勢毒株，BV在人群中流行趨勢減弱，新甲型H1N1、BY在人群中偶有檢出。2010至2015年各月份ILI%均顯著低于2009年，提示2009年后流感病毒活動相對穩(wěn)定;ILI%與病毒分離率呈正相關(rs=0.347;P=0.039)，ILI%的變化能夠較好地反映當?shù)亓鞲胁《镜幕顒忧闆r。新甲型H1N1型、季節(jié)性H3型、B型混合存在，季節(jié)性H1型消失。

流感;流感樣病例;流感病毒分離率;監(jiān)測

流行性感冒(influenza)簡稱流感，是流感病毒引起的急性呼吸道疾病，具有傳染性強、傳播速度快等特點，是世界上第一個實行全球監(jiān)控的傳染?。?］。流感病毒的流行主要取決于毒株抗原性及類型的變異、人群的免疫程度、環(huán)境及社會因素等［2］。遼寧省錦州市在2005年開展了流感監(jiān)測工作，2009年納入國家流感監(jiān)測網，現(xiàn)對2009至2015年度錦州市流感樣病例(influenza-like illness，ILI)時間分布和人群分布的監(jiān)測，分析錦州市流感樣病例的變化特征，為流感的防控提供基礎數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 資料來源

數(shù)據(jù)來源于遼寧省錦州市疾病預防控制中心和錦州市中心醫(yī)院、遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院的流感監(jiān)測工作。由“中國疾病預防控制信息系統(tǒng)”中的“中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)”直接導出資料，含錦州市2009至2015年度流感流行病學和病原學數(shù)據(jù)。哨點醫(yī)院上報ILI 51 277例，門診和急診就診總數(shù)2 248 991例，實驗室分離467株流感病毒。

1.2 監(jiān)測內容與方法

1.2.1 器材和試劑CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，H1、H3、B型流感病毒的抗血清，H1、H3、B型流感病毒的標準抗原，0.25%EDTA-胰酶，含10%胎牛血清DMEM細胞培養(yǎng)液。

1.2.2 ILI監(jiān)測哨點醫(yī)院的發(fā)熱門診、內科診室和感染性疾病科開展監(jiān)測工作。按照ILI定義:體溫≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其他實驗室確定診斷依據(jù)的急性呼吸道感染病例。每天按科室登記各年齡組的ILI數(shù)和病例就診總數(shù)，根據(jù)各診室的登記表錄入“中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)”。

1.2.3 標本采集兩家哨點醫(yī)院在每年4至9月采集5～15份/月ILI病例標本，10月至次年3月采集10～15份/周ILI病例標本。ILI病例標本采集呼吸道標本(多為咽拭子)。采集時，醫(yī)生左手持壓舌板壓病人舌頭，右手用拭子擦咽扁桃體及咽后壁，后放于采樣液中，反復擠壓拭子頭部，折斷拭子尾部。標本采集后在4℃條件下48 h內送市CDC流感網絡實驗室。

1.2.4 病毒的分離實驗室收到樣品后分裝成3份，用于MDCK細胞接種、雞胚接種、－80℃保存待復核。用犬腎傳代細胞(MDCK)進行病毒分離:用移液管吸去細胞培養(yǎng)瓶中Hank’s液。吸疑似標本1 mL于細胞培養(yǎng)瓶中。搖動數(shù)次后放于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中吸附1～2 h。倒出液體，用6 mL Hank’s液清洗細胞2遍，再向細胞培養(yǎng)瓶中加入6 mL生長液。置于33～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。細胞出現(xiàn)75%～100%病變時收獲細胞培養(yǎng)物。再進行血凝試驗方法(HA):對于HA≥8的細胞培養(yǎng)液，采用血凝抑制試驗(HI)對病毒進行分型。

1.2.5 病毒的鑒定將收獲的細胞培養(yǎng)物進行血凝試驗(HA)。將微量板橫向放置:垂直A1～H1為第1列，平行A1～A12為A行。8道加樣器加樣，吸取PBS 50 μL加入微量板第2列，依次加入至最后一列。待檢病毒液100 μL加入第1列對應的孔中。用8道加樣器從第1列取50 μL病毒液，加到第二列相應各孔，混勻。依此倍比稀釋法。最后加50 μL 1%的紅細胞懸液于微量板中，混合。室溫30～60 min，觀察紅細胞凝集現(xiàn)象。以出現(xiàn)完全凝集的最高稀釋度為終點，其倒數(shù)即為病毒HA滴度。對于HA≥8的細胞培養(yǎng)液，采用血凝抑制試驗(HI)對病毒進行分型。紅細胞凝集素抗原與特異性抗體(抗A(H1N1)亞型、抗A(H3N2)亞型、抗B Yamagata、抗B Victoria)結合抑制病毒引起的紅細胞凝集。HI效價是指抑制紅細胞凝集的最高稀釋度倒數(shù)。

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計Excel 2003和SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 流感監(jiān)測概況

2009至2015年兩家哨點醫(yī)院共監(jiān)測ILI51 277例，占門急診就診總數(shù)比例(ILI%)2.28%。2011至2015年度ILI%變化趨勢較為平穩(wěn)。2009至2015年度ILI%差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.079，P=0.799)，見表1。

2.2 ILI年齡構成特征

2009年0～14歲年齡組ILI比例為34.10%，而其他各年度均在60.00%左右;15～24歲年齡組比例為40.87%，是2009年ILI的主要構成人群，而其他各年度均在8.00%左右;2009～2015年度25歲以上人群構成比例差異不大。見表2。

表1 2009至2015年度錦州市ILI發(fā)病數(shù)及ILI%情況Table 1The ILI incidence and case ILI%in Jinzhou from 2009 to 2015

表2 2009至2015年度錦州市ILI年齡分布Table 2The age distribution of case ILI%in Jinzhou from 2009 to 2015

2.3 流感季節(jié)性分布特征

對2009至2015年度按周ILI%差異進行統(tǒng)計，差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=234.32，P =0.000)。2009年41至48周ILI%較高，其中第42周的ILI%為9.3%;2011至2015年度各月份ILI%較比2010年呈下降趨勢，提示2011至2015年度的流感病毒活動較2010年有所減弱。見圖1。

圖1 2009至2015年度錦州市ILI%周次分布Fig.1The Weekly distribution of ILI%in Jinzhou from 2009 to 2015

2.4 實驗室病原學檢測情況

2009至2015年度錦州市流感監(jiān)測網絡實驗室共檢測ILI標本8 254份，分離出流感病毒467株，陽性率為5.66%，其中新甲型H1N1型192份，占41.11%;季節(jié)性H3型186份，占39.83%; B型Yamagata系37份，占7.92%;B型Victoria系52份，占11.13%。2009年和2013年以新甲型H1N1(55.73%，83.33%)為主，2011年以BY (74.42%)為主，其他年份以季節(jié)性H3型為流感優(yōu)勢毒株，BV在人群中流行逐漸減弱，新甲型H1N1、BY在人群中偶可檢出。見表3、圖2、圖3。流感病毒分離陽性率峰值出現(xiàn)在每年11月至次年2月份，與ILI%高峰期相符合，兩者呈正相關(rs=0.347;P=0.039)。

表3 2009至2015年度錦州市流感病原學監(jiān)測結果及分型Table 3The pathogenic results and classification of influenza monitoring in Jinzhou from 2009 to 2015

圖2 2009至2015年度各年錦州市流感病原學檢測結果Fig.2The pathogenic results of influenza monitoring in Jinzhou from 2009 to 2015

圖3 2009至2015年度各月錦州市流感病原學檢測結果Fig.3The pathogenic results of influenza monitoring each month in Jinzhou from 2009 to 2015

3 討論

國內外研究發(fā)現(xiàn)，癥狀監(jiān)測依據(jù)特定臨床癥候群進行非特異監(jiān)測，此監(jiān)測方式不依賴特定的診斷，具有敏感度高和實時性強等特點。目前，應用最為廣泛的癥狀監(jiān)測方法是流感樣病例監(jiān)測［3］。Vanhems等［4］研究表明流感樣病例監(jiān)測較實驗室監(jiān)測結果，可提早2周預測出流感的流行。

本研究結果顯示，錦州市2009和2010年度ILI%較高，2011至2015年度ILI%變化趨勢較為平穩(wěn)。2009年ILI%的波動范圍較大，為1.0%～9.3%。從數(shù)據(jù)中分析可知，2009年10月流感在錦州市處于強勢活動期，ILI%超過歷年同期水平。2010年ILI數(shù)較多主要是受到2009年新甲型H1N1流行的余波影響。2011至2015年ILI%在0.8%～4.3%范圍內波動，且各周ILI%較2010年呈下降趨勢，提示2011至2015年度的流感病毒活動較2010年有所減弱。2009年流感病例主要集中于15～24歲組，與2011至2015年度相比年齡構成發(fā)生了變化，其以0～15歲人群為(56.72%)。此結果與李靜等［5］、蘇楊等［6］報告數(shù)據(jù)基本相同。這與兒童年齡小，機體免疫力較差，多為在校學生或托幼機構兒童，容易發(fā)生交叉感染有關。結果提示15歲以下兒童是流感預防的主要人群，應對其進行重點監(jiān)測。史恒越［7］對遼寧省阜新市2010至2014年度流行性感冒監(jiān)測結果顯示，0～4歲幼兒是流感的高發(fā)人群，其次是15歲以下的兒童。

每年的ILI季節(jié)性變化規(guī)律除2009年第42周出現(xiàn)高峰外，其他各年變化規(guī)律基本一致，為第52周至次年的1～6周ILI%較高，提示流感主要發(fā)生于冬春季節(jié)，這與錦州市位于中國的北方，冬春季氣候寒冷，流感病毒可在環(huán)境中存活較長時間有關。我市ILI%相對較低的原因，可能是兩家監(jiān)測哨點醫(yī)院兒科監(jiān)測科室設置相對較少，而兒科診室ILI%明顯高于內科診室［8］。

從流感病毒病原學監(jiān)測情況分析，7個監(jiān)測年度，新甲型H1N1、季節(jié)性H3N2和B型流感病毒在錦州市先后引起不同程度流行，呈現(xiàn)交替或混合流行的態(tài)勢。2009年和2013年以新甲型H1N1(55.73%，83.33%)為主，且2009年的毒株分離率最高(15.87%)，由新甲型H1N1病毒亞型引起，人群無免疫力，導致傳染性強，傳播迅速，極易發(fā)生大范圍流行［9］。2011年以BY(74.42%)為主，究其原因可能是自2010年起，WHO將新甲型H1N1流感毒株作為推薦株應用于季節(jié)性流感疫苗的生產，故2011年一部分人群對其已經有了免疫力。其他年份以季節(jié)性H3型為流感優(yōu)勢毒株，BV在人群當中流行逐漸減弱，新甲型H1N1、BY在人群中偶可檢出。此結果與王宇報道的基本一致［10］。由此可見，錦州市甲流疫情結束后，2010年甲型流感病毒主要以新甲型H1N1與季節(jié)性H3N2兩種優(yōu)勢株存在，后轉為BY為優(yōu)勢毒株，之后各年以新甲型H1N1、季節(jié)性H3N2及B型交替流行，B型流行趨勢較弱。從流感毒株各年的變化趨勢分析，每年春季流感的流行株將成為當年冬季流感流行的優(yōu)勢株，據(jù)此可初步預測2016年度流感流行優(yōu)勢株為BV亞型。不同年份優(yōu)勢毒株有所不同，這與流感病毒的亞型復雜，品種繁多，存在不同的優(yōu)勢毒株，受環(huán)境因素的影響，病毒優(yōu)勢毒株隨著年份、季節(jié)的不同而不同有關［11］。司虹等［12］監(jiān)測報告顯示2010至2014年度大連市流感的流行趨勢是季節(jié)性H3N2、B型、新甲型H1N1混合存在，主要發(fā)生在冬春兩季。而葛愛華等［13］在分析江蘇省2009至2012年流感情況時發(fā)現(xiàn)毒株以B型和季節(jié)性H3N2交替出現(xiàn)為主，偶有新甲型H1N1散發(fā)，冬季1至2月和夏季8月是兩個小流行高峰。郎中凱等［14］報道重慶市2010至2015年以新甲型H1N1、B型、季節(jié)性H3N2型混合流行，出現(xiàn)冬夏季流行高峰。由此可見，在優(yōu)勢毒株的分布情況方面，北方與南方結果相一致;而流行高峰期南方與北方地區(qū)略有不同，推其原因可能是南北氣候的差異所致。本研究病原學結果與ILI%呈正相關。歐才好等［15］監(jiān)測結果顯示流感樣病例的百分比(ILI%)與H1N1流感病毒存在相關性，這說明可以用流感樣病例監(jiān)測數(shù)據(jù)來預測流感的流行趨勢。

綜上所述，ILI和病原學監(jiān)測是防控流感的有效方法。ILI是呼吸道疾病流行的預警信號，病原學監(jiān)測為及早發(fā)現(xiàn)變異株、推薦疫苗組分、確定流行株及疫情預測、預警提供基礎。

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Analysis of Influenza-Like Cases＆the Aetiology Features in Jinzhou，Liaoning 2009－2015

YOU Jia1，2，SHAN Ying1
(1.Liaoning Medical Coll.，Jinzhou 121001;2.Jinzhou Ctr.for Disease Ctrl.＆Prevent＇n，Jinzhou 121001)

In order to understand the epidemiological features of influenza and the distribution of the dominant strain of influenza in Jinzhou，so as to provide scientific evidence for the early warning and control influenza epidemic effectively.The analysis was conducted on the surveillance and aetiological detection data of influenza like illness(ILI)，monitoring proportion of ILI cases in outpatient visits，the rate of virus isolation and variation of influenza virus subtypes.A total of 51 277 ILI cases were reported in Jinzhou from 2009 through 2015.The ILI cases accounted for 2.28%of the total outpatient visits，mainly in the group of 0 to 15 ages，accounting for 56.72%.Among the 8 254 swabs detected during this period，467 were positive for influenza viruses，including 192 cases of influenza A (H1N1)，186 cases of seasonal H3N2 subtype，37 cases of type B influenza(Yamagata)，and 52 cases of type B influenza(Victoria).The average rate of virus isolation was 5.66%.Pandemic strain of influenza was influenza A (H1N1)in 2009 and 2013.Type B Yamagata lineage was prevalent in 2011，accounting for 74.42%.In other years seasonal H3N2 was the predominant strain，showing a downward trend of type B Victoria lineage，and influenza A (H1N1)，type B Yamagata lineage can be detected occasionally.The monthly ILI proportion from 2010 to 2015 was lower than that in 2009，suggesting that the influenza activity was relatively stable after 2009.The ILI proportion waspositively correlated with the virus isolation rate(rs=0.347;P=0.039).ILI proportion can truly reflect the degree of local influenza activity.The influenza A(H1N1)，seasonal H3N2 subtype and type B influenza were present mixed，and seasonal H1N1 subtype disappeared.

influenza;influenza-like cases;influenza virus isolation rate;monitor

Q939.93;R511.7

A

1005－7021(2016)04－0053－05

10.3969/j.issn.1005－7021.2016.04.009

遼寧省科技廳聯(lián)合基金項目(2015020354)

尤佳女，主管檢驗師，碩士。研究方向為流感病原學檢測。Tel:0416-2332132，E-mail:250050302@qq.com

*通訊作者。女，教授，博士，碩士生導師。研究方向為抗感染免疫。E-mail:1822518917@qq.com

2016-03-04;

2016-05-02