從Agilent 1100到ACQUITY Arc

鹽酸甲氧氯普胺及相關(guān)物質(zhì)分析的HPLC方法轉(zhuǎn)換

本文將鹽酸甲氧氯普胺相關(guān)物質(zhì)分析的HPLC方法從Agilent 1100系統(tǒng)轉(zhuǎn)換到ACQUITY?ArcTM系統(tǒng)，此系統(tǒng)成功重現(xiàn)了Agilent 1100 LC的色譜分離，獲得了可靠、穩(wěn)定且準確的結(jié)果。

用于測試制藥原料和最終產(chǎn)品的分析方法常常需要在機構(gòu)間轉(zhuǎn)換，或者轉(zhuǎn)換至使用不同供應(yīng)商儀器的合同實驗室。因此對于分析實驗室來說，成功實現(xiàn)方法轉(zhuǎn)換對于確保產(chǎn)品一致性和合規(guī)性來說至關(guān)重要。有效的方法轉(zhuǎn)換能夠讓同一分析方法始終得出相當?shù)慕Y(jié)果，不受儀器、實驗室或樣品來源的影響。這對于免去昂貴且耗時的方法重復(fù)驗證步驟來說也是非常重要。

本文介紹了從Agilent 1100系列LC系統(tǒng)到ACQUITY Arc系統(tǒng)的鹽酸甲氧氯普胺相關(guān)物質(zhì)分析的HPLC方法轉(zhuǎn)換。是否成功實現(xiàn)方法轉(zhuǎn)換的評判方法是通過檢驗色譜分離結(jié)果是否相似以及驗證系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果是否符合USP通用章節(jié)〈621〉色譜法1中定義的要求。

圖1.從Agilent 1100系列LC系統(tǒng)到ACQUITY Arc系統(tǒng)的方法轉(zhuǎn)換中，含1.0%相關(guān)物質(zhì)的0.5 mg/ml甲氧氯普胺API的色譜數(shù)據(jù)。

表1.梯度條件

表2.方法轉(zhuǎn)換中USP指定的鹽酸甲氧氯普胺相關(guān)物質(zhì)的列表

實驗部分

儀器和試劑

LC 系統(tǒng)：配備四元泵和DAD檢測器的Agilent 1100系列LC系統(tǒng)配備2998 PDA和ACQUITY QDa檢測器、被動預(yù)加熱器以及流路1的ACQUITY Arc系統(tǒng)。

色 譜 柱： XSelectTMCSH C18，4.6×150 mm，5 μm；柱溫：45℃；流速：2.9 ml/min；進樣體積：10.0μl；流動相：A：0.1%甲酸水溶液，B：0.1%甲酸的甲醇溶液；清洗專用沖洗液：水/甲醇（50：50），樣品清洗液：50：50，水/甲醇；密封清洗液：水/乙腈（90：10）；PDA檢測條件：λ范圍：210～400 nm，提取270 nm的譜圖；采樣速率：20 pt/ s；質(zhì)譜檢測：ACQUITY QDa檢測器(僅ACQUITY Arc系統(tǒng))；電離模式：ESI+、ESI-；采集范圍：100～440 m/z。

圖2.通過質(zhì)譜檢測，使用ACQUITY QDa檢測器獲得的質(zhì)譜數(shù)據(jù)確證峰。Empower 3軟件的質(zhì)譜分析窗口顯示了單個結(jié)果的UV和質(zhì)譜數(shù)據(jù)。

表3. 針對Agilent 1100 系列 LC系統(tǒng)和ACQUITY Arc系統(tǒng)間的方法轉(zhuǎn)換，使用系統(tǒng)適應(yīng)性溶液重復(fù)進樣五次得到的系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果

結(jié)果與分析

本研究中使用的鹽酸甲氧氯普胺的相關(guān)化合物列于表2。分離儲液使用甲醇配制，濃度為1.0 mg/ml。用水將甲氧氯普胺儲液稀釋至0.5 mg/ml，相關(guān)物質(zhì)的加標量為1.0%。系統(tǒng)適應(yīng)性測試制備溶液將各種儲液均移至一個樣品瓶中，用水稀釋，使每種分析物的濃度均為0.05 mg/ml。然后使用標準稀釋液(50：50,甲醇/水)將混合溶液稀釋至15 μg/ ml，以進行系統(tǒng)適應(yīng)性測定。

首先在Agilent 1100系列LC系統(tǒng)上運行HPLC方法，然后轉(zhuǎn)換至ACQUITY Arc系統(tǒng)。ACQUITY Arc系統(tǒng)采用了新型Multi-flow pathTM技術(shù)，該技術(shù)可高效轉(zhuǎn)換使用上一代LC儀器開發(fā)的傳統(tǒng)方法，用于HPLC方法轉(zhuǎn)換的儀器條件見上文。

Agilent 1100系 列 LC系 統(tǒng) 和ACQUITY Arc系統(tǒng)得到的樣品(含0.5 mg/ml的甲氧氯普胺API和1.0%相關(guān)物質(zhì))色譜數(shù)據(jù)如圖1所示。數(shù)據(jù)表明，ACQUITY Arc系統(tǒng)重現(xiàn)了Agilent 1100系列LC系統(tǒng)的色譜分離。采用質(zhì)譜檢測的方法，使用與ACQUITY Arc系統(tǒng)聯(lián)用的ACQUITY QDa檢測器得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)確證甲氧氯普胺及其相關(guān)物質(zhì)的鑒定結(jié)果。Empower?3軟件的質(zhì)譜分析窗口(圖2)展示了單個結(jié)果的UV和質(zhì)譜數(shù)據(jù)。輔以質(zhì)譜數(shù)據(jù)的UV檢測可快速確證樣品組分。

ACQUITY Arc系統(tǒng)上HPLC方法的性能表現(xiàn)是根據(jù)USP通用章節(jié)〈621〉色譜法1中的要求使用系統(tǒng)適應(yīng)性溶液重復(fù)進樣五次所得的系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果進行評判，同時按此要求與Agilent1100系列LC系統(tǒng)所得的實驗結(jié)果進行比對。

兩個系統(tǒng)所得的系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果均符合USP規(guī)定，結(jié)果匯總于表3。在ACQUITY Arc系統(tǒng)上運行方法時的保留時間和峰面積重復(fù)性良好，RSD遠低于小于2.0%的USP規(guī)定，并且與Agilent 1100系列LC系統(tǒng)相當。兩個系統(tǒng)的結(jié)果中所有峰之間的USP分離度值相當，表明方法轉(zhuǎn)換時無分離度損失。USP峰拖尾因子也相當。

得益于獨有的Multi-fow path技術(shù)，ACQUITY Arc系統(tǒng)能夠從各種平臺輕松接受并重現(xiàn)方法且無需折中方法完整性。ACQUITY Arc系統(tǒng)具有強大的LC性能，能夠通過整合諸如ACQUITY QDa檢測器和Empower色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)(CDS)軟件等新技術(shù)來保障實驗室投資。

小結(jié)

本文證明從Agilent 1100系列LC系統(tǒng)轉(zhuǎn)換到了ACQUITY Arc系統(tǒng)，能 夠成功重現(xiàn)Agilent1100系列LC系統(tǒng)的 色譜分離水平，并且其系統(tǒng)適應(yīng)性符合USP規(guī)定。滿足系統(tǒng)適應(yīng)性要求對于確 保實驗室始終符合良好實驗室規(guī)范來說 至關(guān)重要。此外,與UV檢測配合使用 的ACQUITY QDa檢測器能夠通過質(zhì)譜 檢測快速確證峰。 LP

本文資料由沃特世公司提供。