劉瀾，李珊珊，王亞芳，彭金山，郭志紅，張俊儒，何誠

(1.大北農(nóng)集團(tuán)動物保健技術(shù)研究中心，北京 101407；2. 北京市農(nóng)業(yè)局，北京 100029；3.北京市獸藥監(jiān)察所，北京 102629；4.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京 100083)

扶正解毒顆粒對人工感染雞傳染性法氏囊病的療效觀察

劉瀾1，李珊珊2，王亞芳3，彭金山2，郭志紅3，張俊儒1，何誠4

(1.大北農(nóng)集團(tuán)動物保健技術(shù)研究中心，北京 101407；2. 北京市農(nóng)業(yè)局，北京 100029；3.北京市獸藥監(jiān)察所，北京 102629；4.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京 100083)

為評價扶正解毒顆粒的臨床治療效果，試驗設(shè)扶正解毒顆粒低、中和高劑量組、扶正解毒散對照組、黃芪多糖對照組(黃芪多糖口服液)、陽性對照組(攻毒不給藥)、陰性對照組(不攻毒不給藥)。結(jié)果顯示，扶正解毒顆粒低、高劑量組雞成活率顯著高于陽性對照組(P<0.05)；扶正解毒顆粒中、高劑量組相對增重率顯著高于陽性對照組(P<0.05)；扶正解毒顆粒各劑量組免疫器官指數(shù)均顯著高于陽性對照組(P<0.05)；扶正解毒顆粒各劑量組病變指數(shù)均極顯著低于陽性對照組(P<0.01)；扶正解毒顆粒各劑量組法氏囊病毒含量均低于扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組。結(jié)果表明，扶正解毒顆粒對治療雞傳染性法氏囊病有效，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

扶正解毒顆粒；人工感染；雞傳染性法氏囊

雞傳染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease，IBD)是危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的主要傳染病之一，曾被認(rèn)為是與雞新城疫(New Castle Disease，ND)、雞馬立克氏病(Marek's Disease of Chicken，MD)并列在一起的危害養(yǎng)雞業(yè)的三大傳染病。IBD是一種危害青年雞的烈性、高度接觸性的病毒病[1]，該病發(fā)病率高(可達(dá)100%)，而死亡率不高(多為5%左右，也可達(dá)20～30%)，衛(wèi)生條件差且繼發(fā)感染時死亡率可升至40%以上，在雛雞甚至可達(dá)80%以上。其最大的危害是破壞雞的中樞免疫器官-法氏囊，表現(xiàn)為法氏囊淋巴組織和淋巴細(xì)胞壞死，耐過雞的法氏囊組織受損，造成嚴(yán)重的、長期的免疫抑制，使機(jī)體對疫苗的免疫反應(yīng)降低、對細(xì)菌和病毒等病原體的易感性增加，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

近年來，國內(nèi)眾多研究者在中獸醫(yī)理論指導(dǎo)下對IBD進(jìn)行研究，目前普遍認(rèn)為該病是正虛邪實的證型，屬溫病范疇。治療擬扶正兼祛邪，標(biāo)本兼治。扶正解毒顆粒即是依照此組方，方中黃芪補(bǔ)中益氣，淫羊藿溫腎助陽，板藍(lán)根清熱解毒、涼血消腫以祛邪，三藥合用，共奏扶正祛邪之功[2]。本研究按照農(nóng)業(yè)部《實驗臨床試驗技術(shù)規(guī)范》(試行)和農(nóng)業(yè)部《獸用中藥、天然藥物臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》要求對扶正解毒顆粒進(jìn)行試驗，以評價扶正解毒顆粒治療人工感染雞傳染性法氏囊病的臨床療效。

1 材料和方法

1.1 材料 試驗動物：22日齡SPF雞，雄性140只，購自北京梅里亞維通實驗動物技術(shù)有限公司，動物合格證號為SYXK(京)2009-0003。

試驗藥物：扶正解毒顆粒，1 g顆粒相當(dāng)于1.36 g原生藥材，由北京大北農(nóng)動物保健科技有限責(zé)任公司研制生產(chǎn)，批號：121102。扶正解毒散，由北京大北農(nóng)動物保健科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號：130816。黃芪多糖口服液：1 mL相當(dāng)于原生藥材1.50 g，由山東明發(fā)獸藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：20130820。

飼料：購自北京科澳協(xié)力飼料有限公司，飼料合格證號為SYXK(京)2009-0012。

傳染性法氏囊病毒(IBDV)：IBDV-LX 株，104.0ELD50/0.2 mL，由北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所劉爵教授惠贈。

1.2 方法

1.2.1 試驗設(shè)計與分組

1.2.1.1 雞舍溫度和濕度 溫度采用室內(nèi)暖氣和空調(diào)相結(jié)合，溫度控制在22～25℃，濕度控制在40～70%。SPF雞只購進(jìn)后在雞舍適應(yīng)性飼喂3 d，正式投入試驗。將雞隨機(jī)分成7組，每組20只。第1-3組為扶正解毒顆粒試驗組，即扶正解毒顆粒低劑量組、中劑量組和高劑量組；第4組為扶正解毒散對照組；第5組為黃芪多糖對照組(黃芪多糖口服液)；第6組為陽性對照組(攻毒不給藥)；第7組為陰性對照組(不攻毒不給藥)。具體情況見表1。

表1 扶正解毒顆粒臨床治療試驗分組及攻毒情況

1.2.1.2 飼養(yǎng)方式 扶正解毒顆粒低、中和高劑量組飼養(yǎng)在1號隔離器內(nèi)；扶正解毒散、黃芪多糖對照組和陽性對照組飼養(yǎng)在2號隔離器內(nèi)；陰性對照組飼養(yǎng)在3號隔離器內(nèi)。飼喂的飼料和飲水經(jīng)消毒后通過傳遞窗放入隔離器內(nèi)。溫度和濕度分別保持在20～25℃ 和40～60%。

1.2.2 攻毒感染 根據(jù)參考文獻(xiàn)[3-4]方法，取IBDV-LX株感染后的法氏囊組織進(jìn)行研磨，制備的IBDV懸液經(jīng)慶大霉素處理30 min，制備攻毒法氏囊液體。除陰性對照組外，其余6組通過滴鼻、點眼方式接種法氏囊病毒，每只0.2 mL。攻毒后詳細(xì)觀察記錄雞只狀況，給藥結(jié)束后繼續(xù)觀察4 d，第5 d測定體重后，實施安樂死，剖檢檢查，記錄病變情況。

1.3 測定指標(biāo)與方法 存活率：每日記錄各組死亡情況，試驗結(jié)束后統(tǒng)計各組存活率；相對增重率：分別稱取試驗前、試驗結(jié)束后每組雞只重量，計算平均增重；免疫器官指數(shù)：試驗結(jié)束后每組剖檢10只雞，稱取法氏囊、脾臟及胸腺重量，計算免疫器官指數(shù)。計算公式為：免疫器官指數(shù)=免疫器官濕重/體重×100。

病變評分：剖檢觀察雞的法氏囊、胸腺、胸肌、腿肌出血病變，腎臟腫脹病變，評定病變情況[5]。具體評分標(biāo)準(zhǔn)為：法氏囊評分，滲出1～2分，出血1～2分，干酪樣物質(zhì)1～2分，膠凍樣物質(zhì)1～2分，漿葡萄樣計6分；腎臟評分，腫大計0.5分，出血計0.5分，最高6分；腿肌、胸肌評分，按出血點數(shù)目計分。

IBDV病毒含量測定：給藥結(jié)束后5 d，每組隨機(jī)取4只雞，稱取0.5 g法氏囊組織，加入定量滅菌生理鹽水進(jìn)行研磨，以此作原液進(jìn)行10倍梯度稀釋，取0.2 mL液體接種10日齡SPF雞胚絨毛尿囊膜，每隔12 h照蛋一次,記錄死亡SPF雞胚，采用Reed和Muench法計算ELD50。Reed-Muench計算方法：距離比例=(高于50% 的死亡百分率-50%)/(高于50% 的死亡百分率-低于50% 的死亡百分率)。lgELD50=高于50%的病毒稀釋度的對數(shù)+距離比例×稀釋系數(shù)的對數(shù)[6]。

1.4 數(shù)據(jù)分析 對試驗結(jié)果進(jìn)行生物統(tǒng)計分析，計量資料采用SPSS 18.0 檢驗比較各組間的差異。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)病情況與臨床癥狀 攻毒感染48 h后，雞只出現(xiàn)發(fā)蔫現(xiàn)象，羽毛蓬松，感染雞群不如陰性對照組活潑；72 h后，感染組發(fā)蔫雞只增多，全群不活躍，吃食和飲水均顯著減少，羽毛蓬松，個別雞只流涎并伴有啄肛現(xiàn)象，表現(xiàn)出典型的傳染性法氏囊病變特征,具體情況見表2。

表2 扶正解毒顆粒臨床治療試驗第3天觀察記錄

2.2 存活率和相對增重率 試驗第4天雞只開始出現(xiàn)死亡，死亡高峰出現(xiàn)在第4天到第5天，扶正解毒顆粒各劑量組第5天死亡結(jié)束，扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組到第6天死亡結(jié)束，陽性對照組第8天死亡結(jié)束，具體存活情況見表3。經(jīng)卡方檢驗(SPSS18.0)分析，扶正解毒顆粒低、高劑量組存活率高于陽性對照組，差異顯著(P<0.05)。扶正解毒顆粒低、中、高劑量組、扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組之間均無顯著性差異(P>0.05),但是扶正解毒顆粒3個劑量組存活率均高于黃芪多糖對照組。這表明給予扶正解毒顆粒能在一定程度上保護(hù)雞群免受IBD的影響，減少感染雞只死亡和降低發(fā)病病程。

表3 扶正解毒顆粒臨床治療試驗存活率情況

(1)相同的大寫字母代表各組間沒有差異；不同的大寫字母表示各組間差異顯著(P<0.05)；(2)與陽性對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量以及扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組P值分別為：0.038，0.088，0.041，0.088和0.160；與扶正解毒散對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組P值分別為：0.429，1.000，0.705；與黃芪多糖對照組相比, 扶正解毒顆粒低、中、高劑量組P值分別為：0.256，0.723，0.465。

統(tǒng)計增重及相對增重率情況見表4。對各組雞只均重及相對增重率采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，各組雞只初始重量沒有顯著差異(P>0.05)；扶正解毒顆粒中、高劑量組相對增重率高于陽性對照組，呈現(xiàn)顯著差異(P<0.05)；扶正解毒顆粒低劑量組、扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組相對增重率高于陽性對照組，但差異不顯著(P>0.05)；扶正解毒顆粒低、中、高劑量組增重率均高于扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組，但差異不顯著(P>0.05)。

表4 扶正解毒顆粒臨床治療試驗增重情況分析

同上。經(jīng)統(tǒng)計分析，與陽性對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組以及扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組的P值分別為：0.087，0.030，0.025，0.612，0.342。與扶正解毒散對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組的P值分別為：0.191，0.069，0.057；與黃芪多糖對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組的P值分別為：0.454，0.207，0.182。

2.3 免疫器官指數(shù)及病變情況 免疫器官指數(shù)結(jié)果見表5。各組雞法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)經(jīng)單因素方差分析，扶正解毒顆粒低、中和高劑量組均顯著高于陽性對照組(P<0.05)。扶正解毒顆粒低、中和高劑量組與扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組均沒有顯著差異(P>0.05)。試驗結(jié)果表明，扶正解毒顆粒可提高IBDV感染雞的免疫器官指數(shù)，與扶正解毒散和黃芪多糖兩個對照藥物效果沒有顯著差異。

病變指數(shù)結(jié)果見表6。經(jīng)單因素方差分析，扶正解毒顆粒低、中和高劑量組病變指數(shù)均極顯著低于陽性對照組(P<0.01)；扶正解毒顆粒低、中和高劑量組均極顯著低于扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組(P<0.01)。試驗結(jié)果表明，扶正解毒顆粒可顯著降低IBDV感染雞的病變指數(shù)，且顯著好于扶正解毒散和黃芪多糖兩個對照藥物。

2.4 IBDV病毒效價測定 IBDV病毒效價測定結(jié)果見表7。扶正解毒顆粒各劑量組法氏囊病毒含量分別為-3.9，-3.6 和-3.5 ELD50/g，扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組均為-4.5 ELD50/g。扶正解毒顆粒低、中和高劑量組均低于扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組。

表5 扶正解毒顆粒臨床治療試驗免疫器官指數(shù)結(jié)果

同上。經(jīng)統(tǒng)計分析，與陽性對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組及扶正解毒散對照組、黃芪多糖對照組的P值分別為：法氏囊指數(shù)，0.048，0.046，0.049，0.458，0.387；脾臟指數(shù)，0.033，0.01，0.026，0，0.009；胸腺指數(shù)，0.028，0.044，0.048，0.328，0.028。與扶正解毒散對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組的P值分別為：法氏囊指數(shù)，0.118，0.109，0.371；脾臟指數(shù)，0.091，0.262，0.126；胸腺指數(shù)，0.185，0.252，0.318；與黃芪多糖對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組的P值分別為：法氏囊指數(shù)，0.188，0.173，0.499；脾臟指數(shù)，0.491，0.873，0.585；胸腺指數(shù)，0.892，0.789，0.665。

表6 扶正解毒顆粒臨床治療試驗病變指數(shù)結(jié)果

同上。經(jīng)統(tǒng)計分析，與陽性對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組及扶正解毒散對照組、黃芪多糖對照組的綜合得分P值分別為：0.002，0.003，0，0.416，0.125；與扶正解毒散對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組的P值分別為：0，0，0；與黃芪多糖對照組相比，扶正解毒顆粒低、中、高劑量組的P值分別為：0，0，0。

表7 雞胚半數(shù)致死量測定結(jié)果

3 討論

工感染法氏囊強(qiáng)毒株LX后，感染雞只出現(xiàn)死亡，陽性對照組雞法氏囊病變嚴(yán)重，存活率只有55%，這與劉爵[7]等報道的基本一致，說明本次試驗法氏囊LX毒株發(fā)病模型復(fù)制比較成功。

法氏囊、脾、胸腺是重要的免疫器官。法氏囊是禽類所特有的B細(xì)胞分化中樞免疫器官，對機(jī)體體液免疫起著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用?，F(xiàn)代免疫學(xué)證明，脾臟是體內(nèi)最大的免疫器官，與體液免疫和細(xì)胞免疫均有密切關(guān)系。中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對脾亦極為重視，認(rèn)為“脾為后天之本，生化之源”、“正氣根于腎，生于脾”、“脾為之衛(wèi)，內(nèi)傷脾胃，百病由生”。胸腺影響著T細(xì)胞的分化，是免疫功能器官之母，因此其對機(jī)體免疫功能也有著極為重要的作用。IBDV主要侵害法氏囊，也損傷脾、胸腺等免疫器官，基于這些特點，選擇法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)檢驗IBDV對雞免疫器官的影響及感染IBDV后藥物對免疫器官的保護(hù)作用和對機(jī)體免疫的調(diào)節(jié)作用。本研究通過對免疫器官指數(shù)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，感染IBDV后法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著降低，與現(xiàn)有報道一致。與陽性對照組相比，扶正解毒顆粒各劑量組的法氏囊指數(shù)均有顯著升高，扶正解毒散對照組和黃芪多糖組的法氏囊指數(shù)也有所升高，但未表現(xiàn)顯著差異。說明扶正解毒顆粒能顯著保護(hù)IBDV對雛雞法氏囊侵襲造成的損傷，且效果好于扶正解毒散和黃芪多糖；與陽性對照組相比，扶正解毒顆粒各劑量組、扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組的脾臟指數(shù)均有顯著升高，與陰性對照組一致。說明扶正解毒顆粒各劑量組、扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組均能顯著保護(hù)IBDV對雛雞脾臟侵襲造成的損傷；與陽性對照組相比，給藥后扶正解毒顆粒各劑量組和黃芪多糖對照組的胸腺指數(shù)均有顯著升高，扶正解毒散對照組的胸腺指數(shù)也有所升高，但未表現(xiàn)顯著差異。說明扶正解毒顆粒和黃芪多糖能顯著保護(hù)IBDV對雛雞胸腺侵襲造成的損傷，且效果好于扶正解毒散。綜合來看，無論是扶正解毒顆粒還是扶正解毒散、黃芪多糖，口服后均能提高免疫器官指數(shù)，防止免疫器官的萎縮而發(fā)揮抗病毒功效，尤以扶正解毒顆粒效果最優(yōu)。

進(jìn)一步對病變指數(shù)進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，扶正解毒顆粒高劑量組最低，而后依次是扶正解毒顆粒低、中劑量組和扶正解毒散對照組、黃芪多糖對照組。說明給藥能有效減輕感染雛雞靶器官的病理變化，其中扶正解毒顆粒效果最好。對IBDV病毒含量分析發(fā)現(xiàn)，各藥物組均低于陽性對照組，而且扶正解毒顆粒低、中和高劑量組低于扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組。說明各藥物均對IBDV在雛雞體內(nèi)的增殖具有抑制作用，有效保護(hù)了雛雞免受IBDV感染的影響，且扶正解毒顆粒效果要優(yōu)于扶正解毒散和黃芪多糖。

對人工感染IBDV雛雞存活率進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，扶正解毒顆粒低、高劑量組雞成活率顯著高于陽性對照組(P<0.05)，扶正解毒顆粒各劑量組與扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組無顯著性差異(P>0.05)；相對增重率方面，扶正解毒顆粒中、高劑量組顯著好于陽性對照組(P<0.05)，扶正解毒顆粒各劑量組與扶正解毒散對照組和黃芪多糖對照組無顯著性差異(P>0.05)。說明扶正解毒顆粒能在一定程度上可以減少感染雛雞的死亡，增加感染雛雞的平均體重。田美湛等[8]2007年報道添加1%、0.5%的扶正解毒散超微粉混飼投喂對雞IBDV抗體水平、脾臟代償性增重以及平均增重效果均較突出。田美湛等[9]2008年報道添加1%的扶正解毒散超微粉對人工感染IBDV 的病雞具有一定的保護(hù)率和治愈率，效果顯著高于感染對照組，證明扶正解毒散超微粉對雞IBD 有良好的治療作用。本試驗結(jié)果與報道基本一致。

扶正解毒顆粒各劑量組之間，無論在存活率、相對增重率及免疫器官指數(shù)、病變指數(shù)及病毒效價上均沒有顯著差異，說明扶正解毒顆粒在2～8 g/L之間飲水給藥均能有效治療雞傳染性法氏囊病，從用藥成本考慮，我們建議治療雞傳染性法氏囊病，飲水給藥每升水添加扶正解毒顆粒2～4 g。

綜上所述，扶正解毒顆粒飲水給藥對人工感染IBDV的雛雞具有良好的治療效果，可用于臨床法氏囊免疫失敗和繼發(fā)性法氏囊病，效果好于扶正解毒散和黃芪多糖口服液，且使用安全、質(zhì)量可控，因此扶正解毒顆粒具有廣闊的應(yīng)用前景。

[1] Saif Y M，F(xiàn)adly A M，Glisson J R，etal.《禽病學(xué)》第十二版(蘇敬良等譯)[M] ．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012：210．

[2] 中國獸藥典委員會．中華人民共和國獸藥典 二〇一〇年版第二部 [S]．

[3] 卡爾尼克 B. W. 《禽病學(xué)》第9版(高福等譯) [M]. 北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社, 1999.

[4] 劉爵, 韋莉, 姚煒光, 等. 雞傳染性法氏囊病超強(qiáng)毒感染后SPF雞免疫器官病理學(xué)觀察[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2002，33(04)：371-376.

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[6] 中國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典 二〇一〇年版第三部[S] .

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[8] 田美湛，張秀英，蔣月，等．扶正解毒散超微粉對人工感染傳染性法氏囊病預(yù)防試驗[J] . 中國獸藥雜志，2007，41(11)：31-33.

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(編輯：陳希)

Clinical Efficacy of Fuzheng Jiedu Granules on Chickens Infected by IBDV

LIU Lan1, LI Shan-shan2, WANG Ya-fang3, PENG Jin-shan2,GUO Zhi-hong3, ZHANG Jun-ru1, HE Cheng4

(1.Dabeinonganimalhealthtechnologyresearchcenter,Beijing101407,China; 2.BeijingMunicipalBureauofAgriculture,Beijing100029,China; 3.BeijingInstituteofveterinarydrugcontrol,Beijing102629,China; 4.ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083,China)

Chickens artificially infected with infectious bursal disease virus (IBDV) were treated with Fuzheng Jiedu granules by the oral administration to evaluate the clinical efficacy and provide scientific basis for the clinical application of Fuzheng Jiedu granules. Low, middle and high 3 dosage groups of Fuzheng Jiedu granules, Fuzheng Jiedu powder group, astragalus polysaccharide group (astragalus polysaccharide oral solution), positive and negative controls were run concurrently. The results showed that the survival rate of chickens of low and high dosage groups of Fuzheng Jiedu granules were significantly higher than the positive control (P<0.05), that the relative weight gain rate of middle and high dosage groups of Fuzheng Jiedu granules were significantly higher than the positive control (P<0.05), that the index of immune organs of 3 dosage groups of Fuzheng Jiedu granules were significantly higher than the positive control (P<0.05), that the lesion index of 3 dosage groups of Fuzheng Jiedu granules were significantly lowest than the positive control (P<0.01), that the IBDV content of 3 dosage groups of Fuzheng Jiedu granules were lower than the Fuzheng Jiedu powder group and the astragalus polysaccharide group. In summary, it is effective for Fuzheng Jiedu granules against Infectious Bursal Disease Virus. It has broad application prospects in the poultry industry.

Fuzheng Jiedu granules ；artificial infection ；IBD

劉瀾，推廣研究員，從事獸藥研發(fā)工作。E-mail：liulan@dbn.com.cn

2016-07-04

A

1002-1280 (2016) 09-0041-06

S853.7