何燕超， 揭志軍， 施勁東， 梅周芳， 錢 凌， 黃琦慧， 鄢莉宏

復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，上海 200240

論 著

慢性阻塞性肺疾病患者外周血Th17/CD25+Foxp3+Treg比率的變化

何燕超， 揭志軍， 施勁東， 梅周芳， 錢 凌， 黃琦慧， 鄢莉宏*

復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，上海 200240

目的：研究慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)患者外周血中CD25+Foxp3+Treg和Th17細(xì)胞介導(dǎo)的免疫失衡與該疾病進(jìn)展之間的相關(guān)性。方法：選擇2012年1月至2015年3月在上海市閔行區(qū)江川社區(qū)及復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院接受門診或住院治療的穩(wěn)定期和急性發(fā)作期COPD患者共69例，同時(shí)收集吸煙或不吸煙的健康對(duì)照者各20例。測(cè)定受試者的肺功能。采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定受試者外周血中Th17和CD25+Foxp3+Treg占CD4+細(xì)胞的百分比，分析Th17/CD4+和CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率以及Th17/CD25+Foxp3+Treg比值在不同分組中的變化及其臨床意義。結(jié)果：與健康對(duì)照組相比，穩(wěn)定期COPD患者外周血中Th17/CD4+和Th17/CD25+Foxp3+Treg明顯升高(P<0.05)，而CD25+Foxp3+Treg/CD4+明顯降低(P<0.05)；急性發(fā)作期COPD患者的Th17/CD4+、CD25+Foxp3+Treg/CD4+和Th17/CD25+Foxp3+Treg均比對(duì)照組明顯升高(P<0.05)。輕度、中度、重度和極重度的COPD患者中Th17/CD4+和Th17/CD25+Foxp3+Treg逐步升高(P<0.05)，而CD25+Foxp3+Treg/CD4+逐步降低(P<0.05)；COPD患者的Th17/CD4+和Th17/CD25+Foxp3+Treg與肺功能負(fù)相關(guān)(P<0.05)，CD25+Foxp3+Treg/CD4+與肺功能正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論：Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡參與了COPD的疾病進(jìn)展過(guò)程，提示Th17/CD25+Foxp3+Treg免疫調(diào)節(jié)治療可能成為COPD治療的新途徑。

慢性阻塞性肺疾??；免疫調(diào)節(jié)；Th17細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一種以持續(xù)氣流受限為特征的可以防治的呼吸系統(tǒng)疾病。近年來(lái)，COPD的發(fā)病率和病死率居高不下，成為備受關(guān)注的疾病之一[1]。越來(lái)越多的研究證明，CD4+T細(xì)胞在COPD相關(guān)的慢性炎性反應(yīng)中發(fā)揮作用[2]。輔助性T 細(xì)胞17(T helper cell 17，Th17)是CD4+T細(xì)胞的一種亞型。在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)的作用下， CD4+T細(xì)胞可以表達(dá)核孤兒受體家族成員RORγt并向Th17分化，隨后分化成熟的Th17分泌細(xì)胞因子IL-17A，從而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)[3]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)是CD4+T細(xì)胞的另一種亞型，它是一種重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞。Treg中異位表達(dá)的叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子p3(forkhead or winged helix transcription p3，F(xiàn)oxp3)可以通過(guò)接觸抑制、分泌抑制性因子IL-10和TGF-β，維持免疫環(huán)境的穩(wěn)態(tài)[4]。Th17/Treg平衡是Th1/Th2經(jīng)典模型的補(bǔ)充，Th17/Treg平衡在機(jī)體免疫應(yīng)答和免疫耐受中具有重要作用[5]。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)各個(gè)階段的COPD患者外周血中Th17/CD25+Foxp3+Treg的百分比，探討COPD的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制，并試圖尋找可以干預(yù)COPD進(jìn)展的有效靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年1月至2015年3月在上海市閔行區(qū)江川社區(qū)及復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院接受門診或住院治療的COPD患者69例。所有病例均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，且均不合并支氣管哮喘、其他肺部疾病、心力衰竭及自身免疫性疾病。除19例急性發(fā)作期COPD(acute exacerbation of COPD，AECOPD)患者外，所有50例穩(wěn)定期COPD(stable COPD，SCOPD)患者均完成肺功能檢查，相關(guān)指標(biāo)包括一秒用力呼氣容積(forced expiratory volume in one second，F(xiàn)EV1)、用力肺活量(forced vital capacity，F(xiàn)VC)、FEV1占預(yù)計(jì)值的百分比(EFV1%pred)、FVC占預(yù)計(jì)值的百分比(FVC%pred)以及FEV1/FVC比率。根據(jù)COPD全球策略(Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease，GOLD)的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(依據(jù)肺功能評(píng)估氣流受限程度)，將SCOPD患者分為GOLD1級(jí)(輕度)11例、GOLD2級(jí)(中度)14例、GOLD3級(jí)(重度)11例和GOLD4級(jí)(極重度)14例。同時(shí)，收集在本院體檢中心進(jìn)行體檢的非吸煙健康志愿者及肺功能正常的吸煙者各20例，作為對(duì)照組；所有對(duì)照均不合并其他疾病。本研究方案經(jīng)上海市第五人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。所有入組患者及對(duì)照的具體臨床資料見(jiàn)表1。

1.2 主要試劑和設(shè)備 流式細(xì)胞術(shù)使用的所有抗體以及細(xì)胞刺激培養(yǎng)所需的豆蔻酰佛波醇乙酯(phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA)、離子霉素、布雷菲德菌素A(Brefeldin A，BFA)和Fix&Perm Kit Reagent均購(gòu)自美國(guó)BD公司；淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll-Hypaque)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；人Treg染色試劑盒購(gòu)自美國(guó)eBioscience公司。流式細(xì)胞儀(FACScalibur)購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.3 標(biāo)本收集與處理 采集受試者外周血3 mL，置入肝素鋰抗凝管內(nèi)。將外周血用0.9%氯化鈉溶液等倍稀釋后，將其沿離心管邊緣輕輕加至Ficoll-Hypaque分離液上面，室溫500×g離心20 min，分離白膜層細(xì)胞即為外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)。用RPMI 1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3～5次后，用含有10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度為1×106個(gè)/mL，將細(xì)胞鋪至24孔板中培養(yǎng)，用于流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。

1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th17/CD4+細(xì)胞比率 將細(xì)胞密度為1×106個(gè)/mL的新鮮PBMC接種于24孔板，每孔100 μL，然后分別加入1 μg/mL離子霉素、50 ng/mL PMA和1 μg/mL BFA，于37℃和5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞6 h。分別加入PE標(biāo)記的鼠抗人CD8單克隆抗體和FITC標(biāo)記的鼠抗人CD3單克隆抗體，4℃避光反應(yīng)30 min，用PBS緩沖液洗滌。用固定破膜試劑盒(Fix & Perm Kit)中的Reagent A固定，Reagent B破膜，然后加入APC標(biāo)記的鼠抗人IL-17A單克隆抗體或同型IgG1標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)抗體，4℃避光反應(yīng)30 min，用PBS緩沖液洗滌。最后用0.4 mL PBS重懸細(xì)胞，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+CD8-IL-17A+細(xì)胞(即Th17)占CD3+CD8-細(xì)胞(即CD4+T細(xì)胞)的百分比(簡(jiǎn)稱Th17/CD4+比率)；每次檢測(cè)均設(shè)立同型對(duì)照。

參數(shù)對(duì)照組非吸煙者吸煙者SCOPD組輕度中度重度極重度AECOPD組n20201114111419年齡(歲)64±566±765±666±466±468±568±5性別(男/女)16/420/09/212/210/110/415/4吸煙指數(shù)0480532677562554637FEV1/L3．2±0．52．8±0．1a2．1±0．3ab1．8±0．2abc1．2±0．1abcd0．8±0．1abcde?FEV1%pred/%101．8±4．099±2．3a87．1±5．7ab64．5±8．8abc40．0±6．5abcd25．1±3．5abcde?FVC/L3．8±0．63．6±0．23．2±0．4ab3．0±0．5ab2．6±0．5abcd2．1±0．6abcde?FVC%pred/%103．0±4．4101．6±3．191．2±6．9ab90．3±10．1ab77．3±2．9abcd73．5±7．4abcd?FEV1/FVC/%85．9±5．480．1±3．3a67．3±1．8ab58．7±6．9abc49．5±9．6abcd37．8±9．0abcde?

aP<0.05與非吸煙者比較；bP<0.05與吸煙者比較；cP<0.05與輕度COPD組比較；dP<0.05與中度COPD組比較；eP<0.05與重度COPD組比較。吸煙指數(shù)=每天吸煙支數(shù)×吸煙年數(shù)，所有COPD組中戒煙者的吸煙指數(shù)為戒煙前的吸煙指數(shù)；FEV1：1秒用力呼氣容積；FVC：用力肺活量；FEV1%pred：1秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值的百分比；FVC%pred：用力肺活量占預(yù)計(jì)值的百分比

1.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD25+Foxp3+Treg/CD4+細(xì)胞比率 將細(xì)胞密度為1×106個(gè)/mL的新鮮PBMC接種于24孔板，每孔100 μL，然后加入PE標(biāo)記的鼠抗人CD25單克隆抗體和FITC標(biāo)記的鼠抗人CD4單克隆抗體，4℃避光反應(yīng)30 min，用PBS緩沖液洗滌。用Treg染色試劑進(jìn)行破膜、固定，PBS洗滌、離心后，加入APC標(biāo)記的鼠抗人Foxp3單克隆抗體及同型IgG1標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)抗體，4℃避光30 min，用PBS緩沖液洗滌。最后用0.4 mL含1%多聚甲醛溶液的PBS重懸細(xì)胞，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細(xì)胞的百分比(簡(jiǎn)稱CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率)；每次檢測(cè)設(shè)立同型對(duì)照。

2 結(jié) 果

2.1 受試者臨床資料分析 本實(shí)驗(yàn)共納入受試者109例，其中對(duì)照組40例，SCOPD患者50例，AECOPD患者19例。在對(duì)照組中，吸煙者的FEV1、FEV1%pred和FEV1/FVC比率均低于非吸煙者，這說(shuō)明吸煙可能引起肺功能下降。SCOPD組的FEV1、FEV1%pred和FEV1/FVC比率均低于對(duì)照組，并隨著COPD分級(jí)增加，肺功能逐步降低(表1)。

2.2 COPD患者外周血中Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡 為了探索Th17/CD25+Foxp3+Treg平衡在COPD發(fā)生及進(jìn)展中的作用，本研究采用流式細(xì)胞術(shù)分析了對(duì)照組、SCOPD組和AECOPD組患者的外周血Th17和CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細(xì)胞的百分率變化。結(jié)果(圖1、表2)顯示：與對(duì)照組相比，SCOPD組的CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率明顯降低(P<0.05)，AECOPD組的CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率明顯升高(P<0.05)，而SCOPD和AECOPD組的Th17/CD4+比率和Th17/CD25+Foxp3+Treg比值均明顯升高(P<0.05)。

圖1 各組受試者的CD25+Foxp3+Treg和Th17細(xì)胞流式檢測(cè)結(jié)果A: CD25+Foxp3+Treg/CD4+; B: Th17/CD4+

細(xì)胞對(duì)照組(n=40)SCOPD組(n=50)AECOPD組(n=19)Th17/%#0．95±0．272．3±1．07a3．48±0．75aCD25+Foxp3+Treg/%#4．11±0．792．62±1．11a5．25±1．37aTh17/CD25+Foxp3+Treg0．24±0．081．22±0．96a0．73±0．33a

#指Th17和CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細(xì)胞的百分比.aP<0.05與對(duì)照組比較

2.3 Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡與SCOPD患者肺功能的關(guān)系 為了探討Th17/CD25+Foxp3+Treg與肺功能的關(guān)系，本研究將對(duì)照組分為非吸煙組和吸煙組，將SCOPD組按肺功能分為輕度、中度、重度和極重度組。分析發(fā)現(xiàn)，Th17/CD4+比率和Th17/CD25+Foxp3+Treg比值在吸煙組高于非吸煙組(P<0.05)，在SCOPD各組均高于非吸煙組(P<0.05)，并且隨著肺功能分級(jí)進(jìn)展，Th17/CD4+比率和Th17/CD25+Foxp3+Treg比值均逐步升高(P<0.05)。CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率在吸煙組高于非吸煙組(P<0.05)，輕度組與非吸煙組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而中度組CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率低于輕度組和非吸煙組(P<0.05)，并且重度組和極重度組的CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率低于中度組(P<0.05，表3)。

細(xì)胞對(duì)照組非吸煙者(n=20)吸煙者(n=20)SCOPD組輕度(n=11)中度(n=14)重度(n=11)極重度(n=14)Th17/%#0．74±0．161．16±0．19a1．12±0．27a1．72±0．33abc2．74±0．48abcd3．54±0．80abcdeCD25+Foxp3+Treg/%#3．83±0．324．37±1．02a3．98±0．413．18±0．78abc1．75±0．19abcd1．66±0．61abcdTh17/CD25+Foxp3+Treg0．19±0．030．28±0．09a0．28±0．05a0．57±0．15abc1．57±0．19abcd2．35±0．87abcde

#指Th17和CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細(xì)胞的百分比.aP<0.05與非吸煙者比較；bP<0.05與吸煙者比較；cP<0.05與輕度COPD組比較；dP<0.05與中度COPD組比較；eP<0.05與重度COPD組比較

2.4 Th17、CD25+Foxp3+Treg、Th17/CD25+Foxp3+Treg與肺功能的相關(guān)性分析 本研究進(jìn)一步分析SCOPD患者外周血Th17/CD4+、CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率、Th17/CD25+Foxp3+Treg比值與肺功能下降程度的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Th17/CD4+比率與FEV1%pred、FVC%pred和FEV1/FVC比率均負(fù)相關(guān)(P<0.05)；CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率與FEV1%pred、FVC%pred和FEV1/FVC比率均正相關(guān)(P<0.05) ；Th17/CD25+Foxp3+Treg比值與FEV1%pred、FVC%pred、FEV1/FVC比率也均負(fù)相關(guān)(P<0.05) 。這些數(shù)據(jù)說(shuō)明，COPD患者體內(nèi)Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡與肺功能下降有高度的相關(guān)性(表4)。

表4 外周血Th17和CD25+Foxp3+Treg與肺功能的相關(guān)性分析

3 討 論

COPD與氣管和肺組織對(duì)香煙煙霧等有害顆粒的異常慢性炎性反應(yīng)有關(guān)[6-7]。這些有害顆粒不僅會(huì)引起上皮細(xì)胞損傷，激活固有免疫，而且會(huì)使機(jī)體自身的抗原性發(fā)生改變，進(jìn)而激活特異性免疫。近期有很多研究顯示，香煙煙霧的刺激會(huì)激活T細(xì)胞免疫[8-9]。Treg對(duì)T細(xì)胞亞群的分化具有重要的調(diào)節(jié)作用，Treg表達(dá)Foxp3后對(duì)Th17有明顯的負(fù)向調(diào)節(jié)作用[4]。因此，研究Th17/Treg平衡在不同階段、不同程度COPD患者體內(nèi)的變化具有重要的臨床意義。已有一些研究[10]發(fā)現(xiàn)，Th17/CD25+Treg平衡在SCOPD患者中有變化，但沒(méi)有研究Foxp3+Treg在COPD患者體內(nèi)的變化。COPD患者的主要臨床表現(xiàn)為氣流受限呈進(jìn)行性進(jìn)展，肺功能的變化是COPD進(jìn)展的重要指標(biāo)。因此，本研究選取了健康對(duì)照人群、SCOPD患者及AECOPD患者作為研究對(duì)象，檢測(cè)各組外周血中Th17和CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細(xì)胞百分比的變化，分析Th17、CD25+Foxp3+Treg與肺功能的相關(guān)性，并從免疫學(xué)角度探索Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡在COPD發(fā)生及進(jìn)展中的病理生理學(xué)機(jī)制。

本研究分析Th17、CD25+Foxp3+Treg在對(duì)照組、SCOPD組和AECOPD組的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SCOPD組的Th17/CD4+比率高于對(duì)照組，而CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率低于對(duì)照組；AECOPD組的Th17/CD4+和CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率均高于對(duì)照組。遂進(jìn)一步分析Th17/CD25+Foxp3+Treg比值，發(fā)現(xiàn)SCOPD組和AECOPD組均高于對(duì)照組。這說(shuō)明COPD患者體內(nèi)處于Th17優(yōu)勢(shì)狀態(tài)，AECOPD患者的CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率升高可能是由于COPD急性發(fā)作的情況下存在其他促CD25+Foxp3+Treg分化的因素(如感染等)。

為了進(jìn)一步探索Th17/CD25+Foxp3+Treg在COPD中的作用，本研究將對(duì)照組分為非吸煙組和吸煙組，將不同嚴(yán)重程度的SCOPD患者按肺功能分級(jí)分為4組。分析發(fā)現(xiàn)，吸煙者的Th17/CD4+、CD25+Foxp3+Treg/CD4+和Th17/CD25+Foxp3+Treg均高于非吸煙者；并且，隨著COPD嚴(yán)重程度的進(jìn)展，Th17/CD4+和Th17/ CD25+Foxp3+Treg在SCOPD組逐步升高；從中度COPD開(kāi)始，CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率明顯下降，并隨著疾病進(jìn)展逐步降低。表1數(shù)據(jù)顯示，吸煙者的FEV1%pred、FEV%pred和FEV1/FVC均低于非吸煙者；結(jié)果提示在COPD前期(FEV1%pred開(kāi)始下降時(shí))已經(jīng)開(kāi)始出現(xiàn)Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡，并且隨著肺功能下降，Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡逐步加重。Wang等[8]通過(guò)香煙煙霧刺激建立小鼠COPD模型，檢測(cè)不同肺功能階段小鼠Th17/CD4+和CD25+Foxp3+Treg/CD4+的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：短期香煙刺激的小鼠PBMC和肺部CD25+Foxp3+Treg、Th17均比對(duì)照組明顯增加，但是Th17/CD25+Foxp3+Treg無(wú)明顯變化；長(zhǎng)期刺激的小鼠PBMC和肺部CD25+Foxp3+Treg比對(duì)照組明顯減少，Th17/CD25+Foxp3+Treg比對(duì)照組明顯升高。本研究結(jié)果與之類似。

從本研究臨床試驗(yàn)和Wang等[8]的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，CD25+Foxp3+Treg的變化不同于Th17呈現(xiàn)一個(gè)穩(wěn)步同方向的變化，而在吸煙組CD25+Foxp3+Treg所占比例相對(duì)于肺功能正常的非吸煙者出現(xiàn)了升高，呈現(xiàn)出一個(gè)波動(dòng)的變化；這表明CD25+Foxp3+Treg可能在Th17/Treg平衡中起到單獨(dú)調(diào)節(jié)作用。已有研究證明，Treg細(xì)胞是體內(nèi)重要的調(diào)節(jié)細(xì)胞，它可以通過(guò)接觸抑制和分泌IL-10而抑制Th17的分化及功能[10-12]。而Th17是一種促炎性反應(yīng)細(xì)胞，它可分泌IL-6和IL-21等因子，激活STAT-3通路，抑制Foxp3的表達(dá)，進(jìn)而抑制Treg分化[13-15]。因此，CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率在吸煙組出現(xiàn)升高，可能是由于CD25+Foxp3+Treg對(duì)Th17分化的抑制作用。COPD前期可能通過(guò)CD25+Foxp3+Treg/CD4+比率升高而抑制Th17分化，從而保護(hù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)；但是隨著COPD進(jìn)展，繼續(xù)升高的Th17反過(guò)來(lái)抑制CD25+Foxp3+Treg的調(diào)節(jié)作用，使內(nèi)環(huán)境失衡；到COPD晚期，Th17/CD25+Foxp3+Treg完全失衡，Th17占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。

本研究中，COPD患者的Th17/CD4+、CD25+Foxp3+Treg/CD4+和Th17/CD25+Foxp3+Treg隨著肺功能分級(jí)逐步變化，因此進(jìn)一步分析COPD患者Th17、CD25+Foxp3+Treg和Th17/CD25+Foxp3+Treg與肺功能的相關(guān)性。結(jié)果顯示，Th17/CD4+和Th17/CD25+Foxp3+Treg均與FEV1%pred、FVC%pred及FEV1/FVC負(fù)相關(guān)，而CD25+Foxp3+Treg/CD4+與FEV1%FVC%pred及FEV1/FVC正相關(guān)。以上結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明，COPD患者體內(nèi)Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡的過(guò)程與肺功能的下降程度高度相關(guān)。

綜上所述，Th17/CD25+Foxp3+Treg失衡參與了COPD患者疾病進(jìn)展的過(guò)程，與肺功能下降高度相關(guān)，CD25+Foxp3+Treg對(duì)Th17/Treg平衡起到了重要的調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果從免疫學(xué)角度為揭示COPD的病理生理機(jī)制提供了新的視角。同時(shí)，本研究也為Th17/CD25+Foxp3+Treg應(yīng)用于臨床評(píng)估COPD的嚴(yán)重程度，指導(dǎo)COPD的治療方案提供了一定的理論依據(jù)。然而，本研究尚存在性別比率不均衡和樣本量小等不足，因此檢測(cè)Th17/CD25+Foxp3+Treg是否可以應(yīng)用于評(píng)估COPD預(yù)后、指導(dǎo)COPD治療，還有待更完善的大樣本研究來(lái)明確。

[1] 黃俊芳, 王廣發(fā).慢性阻塞性肺病全球倡議慢性阻塞性肺病指南(2013更新版)解讀[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版), 2013, 5(3):58-60.

[2] FREEMAN C M, MCCUBBREY A L, CRUDGINGTON S, et al.Basal gene expression by lung CD4+T cells in chronic obstructive pulmonary disease identifies independent molecular correlates of airflow obstruction and emphysema extent[J].PLoS One, 2014, 9(5):e96421.

[3] BEDOYA S K, LAM B, LAU K, et al.Th17 cells in immunity and autoimmunity[J].Clin Dev Immunol, 2013, 2013:986789.

[4] OHKURA N, KITAGAWA Y, SAKAGUCHI S.Development and maintenance of regulatory T cells[J].Immunity, 2013, 38(3):414-423.

[5] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南(2007年修訂版)[J].中華結(jié)核和呼吸雜志, 2007, 46(1):254-261.

[6] HERNANDEZ C P, MORROW K, VELASCO C, et al.Effects of cigarette smoke extract on primary activated T cells[J].Cell Immunol, 2013, 282(1):38-43.

[7] ALMANZAR G, EBERLE G, LASSACHER A, et al.Maternal cigarette smoking and its effect on neonatal lymphocyte subpopulations and replication[J].BMC Pediatr, 2013, 13:57.

[8] WANG H, PENG W, WENG Y, et al.Imbalance of Th17/Treg cells in mice with chronic cigarette smoke exposure[J].Int Immunopharmacol, 2012, 14(4):504-512.

[9] NADIGEL J, PRéFONTAINE D, BAGLOLE C J, et al.Cigarette smoke increases TLR4 and TLR9 expression and induces cytokine production from CD8+T cells in chronic obstructive pulmonary disease[J].Respir Res, 2011, 12:149.

[10] O′SULLIVAN D, PEARCE E L.Fatty acid synthesis tips the TH17-Treg cell balance[J].Nat Med, 2014, 20(11):1235-1236.

[11] VANDER GEEST K S, ABDULAHAD W H, TETE S M, et al.Aging disturbs the balance between effector and regulatory CD4+T cells[J].Exp Gerontol, 2014, 60:190-196.

[12] GUO M M, TSENG W N, KO C H, et al.Th17- and Treg-related cytokine and mRNA expression are associated with acute and resolving Kawasaki disease[J].Allergy, 2015, 70(3):310-318.

[13] ZHOU L, IVANOV I I, SPOLSKI R, et al.IL-6 programs TH-17 cell differentiation by promoting sequential engagement of the IL-21 and IL-23 pathways[J].Nat Immunol, 2007, 8(9):967-974.

[14] YANG X O, PANOPOULOS A D, NURIEVA R, et al.STAT3 regulates cytokine-mediated generation of inflammatory helper T cells[J].J Biol Chem, 2007, 282(13):9358-9363.

[15] KORN T, BETTELLI E, GAO W, et al.IL-21 initiates an alternative pathway to induce proinflammatory TH17 cells[J].Nature, 2007, 448(7152):484-487.

[本文編輯] 葉 婷， 張藝?guó)Q

Change of Th17/CD25+Foxp3+Treg ratio in peripheral blood of patients with chronic obstructive pulmonary disease and its significance

HE Yan-chao, JIE Zhi-jun, SHI Jin-dong, MEI Zhou-fang, QIAN Ling, HUANG Qi-hui, YAN Li-hong*

Department of Respiratory Medicine, Shanghai Fifth People’s Hospital, Fudan University, Shanghai 200240, China

Objective：To investigate the correlationship between peripheral CD25+Foxp3+Treg and Th17 cell-mediated immune imbalance and the progression of chronic obstructive pulmonary disease (COPD).Methods：A total of sixty-nine patients with COPD in stable stage or acute exacerbation of COPD were recruited from Shanghai Fifth People’s Hospital of Fudan University from January 2012 to March 2015.At the same time, the non-smokers and smokers with normal lung function, each 20 cases, were also used as the healthy controls.The pulmonary function of all subjects was evaluated.The percentages of Th17 and CD25+Foxp3+Treg cells in CD4+cells from peripheral blood were determined by flow cytometry.The changes of Th17/CD4+, CD25+Foxp3+Treg/CD4+and Th17/CD25+Foxp3+Treg ratios in the different groups and their clinical significance were analyzed.Results：Compared with the healthy control group, the ratios of Th17/CD4+and Th17/CD25+Foxp3+Treg in peripheral blood of patients with stable COPD were significantly increased (P<0.05), while the ratio of CD25+Foxp3+Treg/CD4+was significantly decreased (P<0.05).The ratios of Th17/CD4+, CD25+Foxp3+Treg/CD4+and Th17/CD25+Foxp3+Treg in patients with acute exacerbation of COPD were all increased as compared with the healthy control (allP<0.05).With the decline of lung function, the ratios of Th17/CD4+and Th17/CD25+Foxp3+Treg were gradually up-regulated in patients with mild, moderate, severe, very severe COPD (P<0.05), while the ratio of CD25+Foxp3+Treg/CD4+was gradually down-regulated (P<0.05).Moreover, the ratios of Th17/CD4+and Th17/CD25+Foxp3+Treg in COPD patients were negatively correlated with lung function (P<0.05), while the ratio of CD25+Foxp3+Treg/CD4+was positively correlated with lung function (P<0.05).Conclusions：Th17/CD25+Foxp3+Treg imbalance involves in the progression of COPD, suggesting that Th17/CD25+Foxp3+Treg immunomodulatory therapy may become a new approach for the treatment of COPD.

chronic obstructive pulmonary disease; immunomodulation; Th17 cells; T-lymphocytes

2016-07-01[接受日期]2016-11-29

上海市閔行區(qū)自然科學(xué)基金(2011MHZ03)，上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)自然基金生物引導(dǎo)類項(xiàng)目(134119b1200)，上海市衛(wèi)生系統(tǒng)優(yōu)秀學(xué)科帶頭人資助項(xiàng)目(13B034)，復(fù)旦大學(xué)青年骨干科研啟動(dòng)基金(11L-34).Supported by Natural Science Foundation of Minhang District in Shanghai (2011MHZ03), Natural Foundation-Biological Guide Project of Shanghai Municipal Science and Technology Commission (134119b1200), Excellent Academic Leaders of Shanghai Health System (13B034) and Foundation of Start-Up Research by Youth Cadre of Fudan University (11L-34).

何燕超，碩士，住院醫(yī)師.E-mail: 360699058@qq.com

*通信作者(Corresponding author).Tel: 021-52880000, E-mail: yanlihong1973@aliyun.com

10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20160709

R 563.9

A