楊 恒

（河南省濟源市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 濟源 454650）

豬場副豬嗜血桿菌的分離鑒定技術(shù)探討

楊 恒

（河南省濟源市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 濟源 454650）

目的：研究和探討豬場副豬嗜血桿菌感染的分離培養(yǎng)鑒定的相關(guān)技術(shù)問題。方法：從山西省多個豬場送檢的270例疑似樣品實施副豬嗜血桿菌檢測。然后再用瓊脂擴散的試驗對分離菌株實施血清型進行鑒別和評定。結(jié)果：在270例疑似樣品中最后分離鑒定出了75株副豬嗜血桿菌，分離率為27.8%。結(jié)論：目前，副豬嗜血桿病有不同程度的感染，有血清1，4、5，12，13型，其中最為流行的是血清4型和血清5型?；忌洗祟惣膊「竟?jié)以及豬的日齡是有關(guān)系的。

豬場；副豬嗜血桿菌；分離鑒定；技術(shù)探討

定居在健康豬的上呼吸道的一種常在菌是副豬嗜血桿菌，它在相應(yīng)的條件下侵入機體并且引發(fā)病豬的多發(fā)性漿膜炎，關(guān)節(jié)炎以及腦膜炎等疾病，近年來，隨著養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的越來越大，患此疾病的病豬也越來越多，這不僅增加了斷奶到保育階段仔豬的發(fā)病率以及死亡率，也增加了養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟損失。此類疾病現(xiàn)已得到越來越多的關(guān)注[1]。本文對相應(yīng)疑似品種采用細菌分離培養(yǎng)結(jié)合多聚酶鏈式反應(yīng)技術(shù)對從山西省11個市的多個豬場送檢的270例樣品實施副豬嗜血桿菌的分離鑒定，然后再用瓊脂擴散的試驗對分離菌株實施血清型進行鑒別和評定，以分析此類疾病的發(fā)生跟季節(jié)以及豬日齡的關(guān)系，了解到副豬嗜血桿菌疾病的流行情況，以達到對此病的防控以及治療，具體報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

從山西省11個市的多個豬場送檢的270例疑似樣品的病豬，具體是采集它們的鼻拭子以及疑似發(fā)病豬，病死豬或者發(fā)病豬的腦，肺臟，關(guān)節(jié)，心臟等。

1.2 方法

副豬嗜血桿菌的標準陽性血清是山東省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所保存提供的。一對特異引物是由上海生物工程有限公司合成的。其中上游引物是5-GTGATGAGGAAGGGTGGT-GT-3；下游引物為5-GGCTTCGTCACCCTCTGT-3。通過無菌的操作采集了多個豬場的鼻拭子和疑似副豬嗜血桿菌病的病死豬或者發(fā)病豬的腦，肺臟，關(guān)節(jié)，心臟等。在腫瘤特異性移植抗原培養(yǎng)基上劃線接種NAD和新生的牛血清，把它放在37℃的培養(yǎng)箱中36～72 h，觀察其菌落特征。然后用革蘭氏染色鏡檢驗其中圓形，光滑濕潤，無色透明的露珠樣菌落，把檢驗出可疑的菌落采取純培養(yǎng)的方式進行培養(yǎng)。然后從副豬嗜血桿菌中分離株培養(yǎng)物中提取其DNA，采取直接煮沸的方法[2]。

1.3 觀察指標

為了確定各分離株的血清類型，根據(jù)特定的方法制備來分離菌株的血清學分型抗原，用各種血清型標準血清對各種分離株，以此來進行瓊脂擴散的試驗。最終統(tǒng)計副豬嗜血桿菌分離出的陽性率。陽性率=（陽性數(shù)/分離株數(shù)）*100%。

1.4 統(tǒng)計學分析

組間差異采用ANOVA對不同時間以及不同年齡段的豬副豬嗜血桿菌的感染陽性率進行分析檢驗，組間差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），調(diào)查分析副豬嗜血桿菌所分離的菌株不同血清型流行病學的情況。

2 結(jié)果

2.1 不同時間的副豬嗜血桿菌分離出菌株的檢測結(jié)果

在270例疑似樣品中最后分離鑒定出了75株為陽性。此種疾病發(fā)病率最高的時候是在每年3，4，10，11，12月份（P<0.05）。由此說明，此疾病的發(fā)病率最低是在夏季，其他季節(jié)發(fā)病率都較高。詳見表1。

表1 不同月份副豬嗜血桿菌分離菌株的檢驗情況

2.2 不同日齡豬副豬嗜血桿菌感染的情況

對75份副豬嗜血桿菌陽性樣品進行統(tǒng)計，有23例的日齡是0～30日，35例日齡是31～50日，13例日齡是51～80，4例日齡是81日以上。從此統(tǒng)計可看出，31～50日齡的小豬是副豬嗜血桿菌的主要感染保育所舍的。

3 討論

現(xiàn)在已知的副豬嗜血桿菌的血清型已經(jīng)有15種，與國內(nèi)外流行的血清型還都不盡相同，所以對此疾病的防治有很大困難。它是豬上呼吸道的一種常在菌，在特定的條件下會侵入機體，從而引起全身性的疾病。其所影響的是2～4周齡的小豬，發(fā)病階段是在斷奶后和保育的時候。本文研究得知，在270例疑似樣品中最后分離鑒定出了75株副豬嗜血桿菌，陽性率為27.8%，通過血清型的鑒別和評定，顯示有血清1，4、5，12，13型，其中最為流行的是血清4型和血清5型，這跟蔡旭旺等人的研究結(jié)果有一定的不同，也許是因為地域不同，環(huán)境差異所導致的。本研究還發(fā)現(xiàn)此種疾病發(fā)病率最高的時候是在每年3，4，10，11，12月份。由此說明，此疾病的發(fā)病率最低是在夏季，其他季節(jié)發(fā)病率都較高，并且此種疾病多發(fā)于31～50日齡的小豬。所以通過本研究可以判定的是此疾病多發(fā)的季節(jié)以及豬的日齡，這為副豬嗜血桿菌病的防治提供了重要線索。

[1]張勇，趙興緒.陜西省規(guī)模豬場副豬嗜血桿菌的分離鑒定及敏感藥物篩選[J].河南農(nóng)業(yè)科學，2016，（4）.

[2]楊春蕾，池晶晶，張莉.天津部分豬場副豬嗜血桿菌的分離鑒定[J].動物醫(yī)學進展，2016，（3）.

（編輯：尹 云）

S858.28

B

1006-799X(2016)22-0099-02

楊 恒（1987-），男，河南濟源人，助理獸醫(yī)師，主要從事動物、動物產(chǎn)品的檢疫工作和其他有關(guān)動物防疫的監(jiān)督管理執(zhí)法工作。