楊華甫，田富明，梁迎東，陳 瑩，藍(lán) 海

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

普洱茶水浸液對脫礦牙釉質(zhì)再礦化的掃描電鏡觀察

楊華甫，田富明，梁迎東，陳 瑩，藍(lán) 海*

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

目的：觀察普洱茶生茶、熟茶不同濃度水浸提取液處理人工齲后的表面形態(tài)，為天然防齲藥物的研究與開發(fā)提供理論依據(jù)。方法：利用化學(xué)試劑人工培養(yǎng)釉質(zhì)脫礦模型，以水為提取液分別提取生茶、熟茶96、48、24、12、6 mg∕mL為實驗溶液，20 mg∕mL氟化鈉為陽性對照，去離子水為陰性對照，共分為12組，經(jīng)體外pH循環(huán)后在掃描電鏡下觀察。結(jié)果：生茶組和熟茶組均隨著濃度的增加牙釉質(zhì)表面的沉積物越多越均勻致密，達(dá)96 mg∕mL時有大量規(guī)則的結(jié)晶生成，熟茶組比生茶組的沉積物更多更厚。氟化鈉組大量的固體物質(zhì)沉積，但結(jié)晶不緊密；去離子水組也有少許稀疏的沉積物，表面不平整，和脫礦后的差別不大。結(jié)論：普洱茶生茶和熟茶水提取液均對人工脫礦釉質(zhì)有再礦化作用，但低濃度效果不明顯。

普洱茶；脫礦；再礦化；掃描電鏡

齲病已被公認(rèn)為世界上一種最常見的慢性感染性疾病，它是發(fā)生于牙齒硬組織中的一種疾病，我國人群患齲齒率為40%，在各種疾病的發(fā)病率中位居前列，而且分布較為廣泛。其發(fā)病機(jī)制為：口腔中的常駐變形鏈球菌和血鏈球菌通過發(fā)酵多種碳水化合物產(chǎn)生酸性物質(zhì)，使菌斑的pH下降到5以下從而導(dǎo)致牙齒硬組織的酸蝕而脫礦，有機(jī)物分解至齲損形成〔1〕。

普洱茶是山茶科山茶屬多年生、常綠、大葉種喬木。普洱茶含有茶多酚、茶生物堿、茶氨酸、礦質(zhì)元素、維生素、氟化物等生理活性物質(zhì)〔2〕，其中茶多酚是普洱茶最主要的活性成分，鄒盛勤通過實驗證實，茶多酚有抑菌抗炎、抗菌防齲的作用〔3〕。茶葉中氟的質(zhì)量分?jǐn)?shù)高達(dá)1×10-4～2×10-4，遠(yuǎn)高于其他植物。氟能增強牙釉質(zhì)結(jié)構(gòu)，提高其抗酸能力，達(dá)到預(yù)防齲齒的目的。本實驗通過掃描電鏡觀察普洱生茶、熟茶處理牙釉質(zhì)齲表面，比較各種溶液處理下釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)變化，探索普洱茶對釉質(zhì)齲的再礦化作用。

1 材料

1.1儀器YMP-2B金相試樣磨拋機(jī)（蘇州歐卡精密光學(xué)儀器有限公司）；電子天平（波特樂-托利多儀器有限公司）；303-A-I型熱點恒溫培養(yǎng)箱（蕭山永發(fā)電氣有限公司）；pH-25數(shù)字酸度計（上海鵬順科學(xué)儀器有限公司）；SY5200D超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；S-3400N型掃描電鏡（日立）。

1.2藥品普洱生茶、熟茶均購于大理沃爾瑪超市，由普洱市圣普茶葉有限公司生產(chǎn)的圣邦普洱茶禮盒（2011年5月28日生產(chǎn)）。

1.3試劑CaCl2、NaH2PO4、CH3COOH、KCl、NaOH、生理鹽水、去離子水，以上試劑均為分析純。

1.4脫礦液、再礦化液的配制脫礦液2.2 mmol∕L CaCl2，2.2 mmol∕L NaH2PO4，50 mmol∕L CH3COOH，用CH3COOH調(diào)至pH為4.5。再礦化液：1.5mmol∕LCaCl2，0.9 mmol∕L NaH2PO4，0.15 mol∕L KCl，用KOH調(diào)至pH為7.0〔4〕。

1.5實驗溶液的配制稱取普洱生茶19.20 g裝入燒杯中加入250 mL去離子水，煮沸1 min，得到200 mL的茶水（因茶葉在沸水中展開要吸收一部分水以及水沸騰蒸發(fā)一部分，所以得到大約200 mL茶水），冷卻至室溫，然后倍比稀釋得到96、48、24、12、6 mg∕mL的生茶溶液，同法制得熟茶各濃度的實驗溶液，密封保存。

2 方法

2.1脫礦標(biāo)本的制備市場購買新鮮牛切牙100顆從牙頸部截去牙根取出牙髓和軟組織，用水清洗干凈后用超聲清洗5 min，在陰暗處晾干，用拋光機(jī)和碳化硅砂紙在流水條件下一次磨平，挑選出無齲齒、氟斑、裂痕的牙齒84顆，開窗3 mm×3 mm，其余部分用無色抗酸指甲油封住。放入100 mL的脫礦液中，置于恒溫箱中37℃恒溫10 d，換液5 d∕次。

2.2體外pH循環(huán)將標(biāo)本隨機(jī)分為12組并進(jìn)行編號，每組7顆進(jìn)行體外pH循環(huán)。過程為：先用100 mL的脫礦液處理4 h，然后分別用100 mL的實驗溶液處理6 h，再浸入100 mL的再礦化中過夜，每換一種溶液前用大量的蒸餾水振蕩沖洗5 min，連續(xù)循環(huán)10 d。用肉眼和掃描電鏡觀察脫礦表面〔5〕。

3 結(jié)果

3.1肉眼觀察牙齒釉質(zhì)表面平整，普洱茶溶液組開窗區(qū)域變?yōu)榧t棕色，并且隨著濃度的增加而顏色加深，熟茶組比生茶組顏色深，而氟化鈉和去離子水組表面顏色沒有明顯變化。

3.2掃描電鏡觀察生茶組和熟茶組均隨著濃度的增加牙釉質(zhì)表面的沉積物越多越均勻致密，達(dá)96 mg∕mL時有大量規(guī)則的結(jié)晶生成，但從圖中可看出，熟茶組比生茶組的沉積物更多更厚。氟化鈉組大量的固體物質(zhì)沉積，但結(jié)晶不緊密；去離子水組也有少許稀疏的沉積物，表面不平整，和脫礦后差別不大。見圖1。

圖1 不同濃度處理液處理脫礦牙釉質(zhì)表面掃描電鏡觀察結(jié)果（×5.00 K,SE）

4 討論

牙齒每天都在進(jìn)行脫礦和再礦化的過程并保持動態(tài)平衡。在此過程中，如果脫礦占據(jù)主導(dǎo)作用，將會導(dǎo)致牙釉質(zhì)缺損。相反，如果再礦化占據(jù)主導(dǎo)作用，牙釉質(zhì)處于一個被修復(fù)的過程〔6〕。如果一個藥物只要對脫礦過程有抑制或?qū)υ俚V化過程有促進(jìn)作用，那么這個藥物就對牙釉質(zhì)礦化方面有積極作用，進(jìn)而抑制齲病的發(fā)生發(fā)展〔7〕。

通過掃描電鏡圖像提示，普洱茶生茶、熟茶均對牙齒有再礦化作用，但熟茶再礦化作用明顯優(yōu)于生茶。有文獻(xiàn)報道，熟茶的最高氟含量是生茶的32.7倍〔8〕，而氟能使牙釉質(zhì)的主要成分羥基磷灰石生成穩(wěn)定性強、晶格更小、硬度更高的氟磷灰石，使牙釉質(zhì)表面存在的脫礦-再礦化這一可逆的生物化學(xué)反應(yīng)向著再礦化方向進(jìn)行〔9〕，利于防齲。另外，普洱熟茶在發(fā)酵的過程中形成了大量的茶褐素較未發(fā)酵普洱生茶提高了8.23倍〔10-11〕，而茶褐素可以和再礦化液中Ca2+結(jié)合〔12〕，形成難溶的配位復(fù)合物，因此也有利于再礦化。但飲茶濃度過高，對牙齒的著色影響程度大，影響美觀。

〔1〕BANKOVA V S，DE CASTRO S L，MARCUCCI M C. Propolis：recent advances in chemistry and plant origin〔J〕. Apidologie，2000，31（1）：3-15.

〔2〕張新富，龔加順，周紅杰，等.云南普洱茶中多酚類物質(zhì)與品質(zhì)的關(guān)系研究〔J〕.食品科學(xué)，2008，29（4）：230-233.

〔3〕鄒盛勤.茶葉的藥用成分、藥理作用及應(yīng)用研究進(jìn)展〔J〕.中國茶葉加工，2004（3）：35-37.

〔4〕楊曉莉，王芳芹，張俊，等.紫地榆不同溶劑提取物對防齲活性部位的研究〔J〕.中成藥，2014，36（10）：2074-2078.

〔5〕陳菲菲，汪大照，張向宇，等.五倍子牙膏對釉質(zhì)礦化作用的影響〔J〕.口腔醫(yī)學(xué)研究，2011，27（4）：269-271.

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〔12〕周花香.普洱茶茶褐素與褐煤黃腐酸對金屬離子絡(luò)合作用的對比研究〔D〕.昆明：昆明理工大學(xué)，2012.

Scanning Electron Microscopic Observation of the Remineralization Effect of Pu'er Tea Aqueous Extract on Demineralized Enamel

Yang Huafu,Tian Fuming,Liang Yingdong,Chen Ying,Lan Hai*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To observe the surface of artificial caries that treated by different concentration of raw and ripe Pu'er tea aqueous extracts for providing a theoretical basis for the research and development of natural anti-caries drug.Methods: Demineralizated enamel cultured by chemical reagents was used as model.With water as the extract,raw and ripe tea with 96，48，24，12，6 mg∕mL were used as test solution.20 mg∕mL NaF as the positive control group and deionized water as the negative control group were divided into 12 groups and observed by scanning electron microscopy after pH extracorporeal circulation.Results:With the increasing concentration of raw and ripe tea,the sediments on enamel surface were more uniform and compact and a large number of regular crystallization generated when the concentration reached up to 96 mg∕mL,and ripe tea group had more and thicker sediments than raw tea;NaF group also had a lot of sediments,but was not compact;deionized water group only had a few sparse sediments with uneven surface,and had little difference after demineralization.Conclusion:Raw and ripe Pu'er tea aqueous extract had the remineralization effect on artificial demineralized enamel,but the low concentration was ineffective.

Pu'er tea;demineralization;remineralization;scanning electron microscope

R780.1

A

2096-2266（2016）12-0050-03

10.3969∕j.issn.2096-2266.2016.12.012

（責(zé)任編輯 李 楊）

大理大學(xué)大學(xué)生科研基金資助項目（KYSX20155096）

2016-02-29

2016-04-11

楊華甫，2012級藥物制劑專業(yè)本科生. *通信作者：藍(lán)海，教授.