白清，郭莉閣

(河南省中醫(yī)院，鄭州 450002)

·基礎(chǔ)研究·

絞股藍(lán)皂苷聯(lián)合非諾貝特灌胃治療大鼠高脂血癥效果觀察

白清，郭莉閣

(河南省中醫(yī)院，鄭州 450002)

目的 觀察絞股藍(lán)皂苷聯(lián)合非諾貝特灌胃治療大鼠高脂血癥的效果。方法 選取SPF級雄性SD大鼠60只，喂以高脂飼料，分為模型組、絞股藍(lán)組、非諾貝特組、聯(lián)合組。模型組給予0.5% CMC-Na溶液灌胃，絞股藍(lán)組給予150 mg/kg絞股藍(lán)皂苷灌胃，非諾貝特組給予30 mg/kg非諾貝特灌胃，聯(lián)合組給予150 mg/kg絞股藍(lán)皂苷+30 mg/kg非諾貝特灌胃。連續(xù)給藥6周，每天灌胃1次。采血分離血清測定TG、TC、LDL-C、HDL-C、載脂蛋白A(apoA)、載脂蛋白B(apoB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)；解剖分離組織、臟器，計(jì)算肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)。結(jié)果 與模型組相比，絞股藍(lán)組、非諾貝特組和聯(lián)合組血清TC、TG、LDL-C低(P均<0.05),非諾貝特組HDL-C高(P<0.05)，非諾貝特組和聯(lián)合組HDL-C/LDL-C高(P均<0.05)；與絞股藍(lán)組相比，聯(lián)合組TC、TG、LDL-C低(P均<0.05)，HDL-C/LDL-C高(P<0.05)。與非諾貝特組相比，聯(lián)合組TC、TG低(P均<0.05)。與模型組相比，絞股藍(lán)組、聯(lián)合組肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)低(P均<0.05),非諾貝特組肝臟系數(shù)低(P<0.05)；與絞股藍(lán)組相比，聯(lián)合組肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)低(P均<0.05)，非諾貝特組肝臟系數(shù)低(P<0.05)。與非諾貝特組相比，聯(lián)合組肝臟系數(shù)低(P<0.05)。與模型組相比，絞股藍(lán)組、非諾貝特組和聯(lián)合組血清apoA高(P均<0.05)，非諾貝特組和聯(lián)合組血清apoB低、apoA/apoB高(P均<0.05)。與絞股藍(lán)組相比，聯(lián)合組血清apoA和apoA/apoB高(P均<0.05)。與非諾貝特組相比，聯(lián)合組apoA/apoB高(P<0.05)。與模型組相比，非諾貝特組、絞股藍(lán)組、聯(lián)合組血清SOD高(P均<0.05)，非諾貝特組、聯(lián)合組血清MDA低(P均<0.05)。與絞股藍(lán)組相比，非諾貝特組、聯(lián)合組血清MDA低(P均<0.05)。與非諾貝特組相比，聯(lián)合組血清SOD、MDA變化不顯著。結(jié)論 非諾貝特與絞股藍(lán)聯(lián)合灌胃可以降低高脂血癥大鼠血脂血清TC、TG、LDL-C、apoB及肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)，提高血清HDL-C和血清apoA，其效果優(yōu)于單用非諾貝特或絞股藍(lán)。

高脂血癥；絞股藍(lán)皂苷；非諾貝特；血脂代謝；載脂蛋白；動物實(shí)驗(yàn)

絞股藍(lán)又名七葉膽、五葉參、七葉參、小苦藥等，根莖或全草可入藥。迄今為止，己從絞股藍(lán)中分離得到將近169種達(dá)瑪烷型絞股藍(lán)皂苷，是人參皂苷的5～6倍[1,2]。絞股藍(lán)所含有的83種與人參皂苷有類似結(jié)構(gòu)骨架的達(dá)瑪烷型皂苷,在降低膽固醇、降血糖、抗炎和免疫調(diào)節(jié)等方面有效[3]。非諾貝特是PPARα激動劑，是臨床上常用的降脂藥[4]。二者聯(lián)合應(yīng)用治療高脂血癥的效果尚不明確。本研究用絞股藍(lán)皂苷聯(lián)合非諾貝特治療大鼠高脂血癥,觀察其治療效果?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量180～220 g，購于武漢生物制品研究所，許可證號：SCXK(鄂)2013-0006。每籠5只，分開飼養(yǎng)。適應(yīng)性喂養(yǎng)期間所有大鼠自由進(jìn)食普通飼料和飲用蒸餾水。飼養(yǎng)環(huán)境：每天12 h黑、白循環(huán)光照，室溫(25±2)℃，相對濕度50%±10%，并定期清潔飼養(yǎng)環(huán)境。絞股藍(lán)皂苷由本實(shí)驗(yàn)室自制(純度>60%)，非諾貝特購自Sigma公司；TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoA、apoB試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。高脂飼料依據(jù)文獻(xiàn)[5,6]說明，按基礎(chǔ)飼料78.8%、豬油10%、蛋黃粉10%、膽固醇1%、膽酸鈉0.2%的比例配制。

1.2 高脂血癥模型建立、分組及用藥方法 所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，改喂高脂飼料，自由進(jìn)食進(jìn)水，喂養(yǎng)4周，建立高脂血癥模型。隨機(jī)分為模型組、絞股藍(lán)組、非諾貝特組、聯(lián)合組，各15只。模型組給予0.5% CMC-Na溶液灌胃，絞股藍(lán)組給予150 mg/kg絞股藍(lán)皂苷灌胃，非諾貝特組給予30 mg/kg非諾貝特灌胃，聯(lián)合組給予150 mg/kg絞股藍(lán)皂苷+30 mg/kg非諾貝特灌胃。連續(xù)給藥6周，每天灌胃1次。飼養(yǎng)方式不變。

1.3 療效觀察方法 各組大鼠給藥6周時(shí)，禁食12 h，乙醚麻醉，摘眼球采血，分離血清。根據(jù)試劑盒方法測定TC、TG、LDL-C、HDL-C、ApoA、ApoB、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),其中TC、TG、LDL-C、HDL-C用過氧化物酶法測定，ApoA、ApoB用免疫比濁法測定，SOD用羥胺法測定，MDA用硫代巴比妥酸法測定。處死各組大鼠，解剖分離肝臟、腎臟，測定大鼠體質(zhì)量、肝臟質(zhì)量、腎臟質(zhì)量，計(jì)算肝臟系數(shù)(肝臟系數(shù)=肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%)、腎臟系數(shù)(腎臟系數(shù)=腎臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠給藥6周時(shí)血脂比較 給藥6周時(shí)各組大鼠血脂見表1。給藥6周時(shí)，與模型組相比，絞股藍(lán)組、非諾貝特組和聯(lián)合組血清TC、TG、LDL-C低(P均<0.05),非諾貝特組HDL-C高(P<0.05)，非諾貝特組和聯(lián)合組HDL-C/LDL-C高(P均<0.05)；與絞股藍(lán)組相比，聯(lián)合組TC、TG、LDL-C低(P均<0.05)，HDL-C/LDL-C高(P<0.05)。與非諾貝特組相比，聯(lián)合組TC、TG低(P均<0.05)。

表1 給藥6周時(shí)各組大鼠血脂比較±s)

注：與模型組比，aP<0.05；與絞股藍(lán)組相比，bP<0.05；與非諾貝特組相比，cP<0.05。

2.2 各組大鼠給藥6周時(shí)肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)比較 給藥6周時(shí)各組大鼠肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)見表2。給藥6周時(shí)，與模型組相比，絞股藍(lán)組、聯(lián)合組肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)低(P均<0.05),非諾貝特組肝臟系數(shù)低(P<0.05)；與絞股藍(lán)組相比，聯(lián)合組肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)低(P均<0.05)，非諾貝特組肝臟系數(shù)低(P<0.05)。與非諾貝特組相比，聯(lián)合組肝臟系數(shù)低(P<0.05)。

表2 給藥6周時(shí)各組大鼠肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)比較±s)

注：與模型組比，aP<0.05；與絞股藍(lán)組相比，bP<0.05；與非諾貝特組相比，cP<0.05。

2.3 各組大鼠給藥6周后血清載脂蛋白比較 給藥6周后各組大鼠血清載脂蛋白水平見表3。給藥6周后，與模型組相比，絞股藍(lán)組、非諾貝特組和聯(lián)合組血清ApoA高(P均<0.05)，非諾貝特組和聯(lián)合組血清ApoB低、ApoA/ApoB高(P均<0.05)。與絞股藍(lán)組相比，聯(lián)合組血清ApoA和ApoA/ApoB高(P均<0.05)。與非諾貝特組相比，聯(lián)合組ApoA/ApoB高(P<0.05)。

2.4 各組大鼠給藥6周后血清SOD、MDA比較 給藥6周后各組大鼠血清SOD、MDA見表4。給藥6周后,與模型組相比，非諾貝特組、絞股藍(lán)組、聯(lián)合

表3 給藥6周時(shí)各組大鼠血清載脂蛋白水平比較±s)

注：與模型組比，aP<0.05；與絞股藍(lán)組相比，bP<0.05；與非諾貝特組相比，cP<0.05。

組血清SOD高(P均<0.05)，非諾貝特組、聯(lián)合組血清MDA低(P均<0.05)。與絞股藍(lán)組相比，非諾貝特組、聯(lián)合組血清MDA低(P均<0.05)。與非諾貝特組相比，聯(lián)合組血清SOD、MDA變化不顯著(P均>0.05)。

表4 各組大鼠血清SOD、MDA比較

注：與模型組比，aP<0.05；與絞股藍(lán)組相比，bP<0.05。

3 討論

高脂血癥是指以血漿中一種或多種脂質(zhì)成分(主要指甘油三酯和膽固醇)異常增高為特征的代謝紊亂綜合征[10]。脂質(zhì)代謝異常是動脈粥樣硬化的首要危險(xiǎn)因素，動脈粥樣硬化則是導(dǎo)致心腦血管疾病的罪魁禍?zhǔn)住DL-C一直被認(rèn)為有致動脈粥樣硬化作用，ApoB是LDL-C的主要成分，故ApoB水平的升高也反映了LDL-C的增高。而HDL被認(rèn)為是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子，HDL-C參與膽固醇逆向運(yùn)轉(zhuǎn)，促進(jìn)動脈壁膽固醇的清除，是膽固醇從細(xì)胞移出不可缺少的接受體。ApoA為HDL-C的主要成分，ApoA既是卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)的激活劑和HDL-C受體的配體，又是HDL-C的主要成分，故ApoA水平的升高也反映了HDL-C的增高。

絞股藍(lán)是名貴中草藥，含有人參皂苷類化合物，抗腫瘤、降血糖[11]、調(diào)節(jié)血脂[12]、抗炎[13]等作用顯著。黃萍等[14]發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)復(fù)方對大鼠性糖尿病腎病模有良好的治療作用，能有效調(diào)節(jié)血糖、血脂代謝，抑制糖尿病腎病大鼠早期腎臟肥大和高濾過，減少尿蛋白的排出，保護(hù)腎功能，延緩糖尿病腎病的發(fā)展。黃曉飛等[15]發(fā)現(xiàn)，絞股藍(lán)膠囊具有良好的降血脂作用，其機(jī)制是其中的活性成分對肝臟中與脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)有調(diào)控作用。非諾貝特是PPARα激動劑，是臨床上常用的降脂藥，其調(diào)節(jié)血脂的作用主要體現(xiàn)在降低TC、升高HDL-C。近年來多項(xiàng)研究顯示非諾貝特除了降脂作用，還具有抗氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)、抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、抗凋亡等作用，并可降低2型糖尿病血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)[7～9]。

本研究結(jié)果顯示,給藥6周后，與模型對照組相比，絞股藍(lán)組TC、LDL-C顯著降低；與單獨(dú)應(yīng)用非諾貝特的調(diào)脂作用相似，說明絞股藍(lán)皂苷的調(diào)脂作用確切。聯(lián)合組與絞股藍(lán)組相比較，肝重和肝臟系數(shù)都明顯降低，但單用絞股藍(lán)或非諾貝特者肝臟重量降低不明顯，說明兩者聯(lián)用有一定的增效作用。經(jīng)給藥治療調(diào)節(jié)脂代謝后，與模型組相比，絞股藍(lán)組ApoA顯著升高，但絞股藍(lán)組ApoB、ApoA/ApoB變化不顯著，這可能與給藥劑量有關(guān)。

高脂飲食在許多組織中能夠引起氧化應(yīng)激效應(yīng)。當(dāng)機(jī)體氧化應(yīng)激水平升高后,體內(nèi)氧自由基增多,使得脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA增加。MDA水平可反映機(jī)體過氧化的程度,從而間接地反映機(jī)體血管老化的程度。在生理狀態(tài)下,機(jī)體也會有自由基產(chǎn)生,但體內(nèi)存在的抗氧化酶系統(tǒng)能清除氧自由基,因此不會引起組織細(xì)胞過氧化而導(dǎo)致?lián)p傷。SOD是這些抗氧化酶的主要代表。本研究結(jié)果顯示，給藥6周后，非諾貝特組、聯(lián)合組大鼠血清MDA均降低(P<0.05)，聯(lián)合組與模型組相比血清MDA顯著降低(P<0.05)，而其余組降低不明顯，說明絞股藍(lán)聯(lián)合非諾貝特可以提高高脂血癥大鼠血清SOD水平，降低血清MDA水平。

調(diào)脂藥物是否聯(lián)合應(yīng)用，也是臨床上歷來存在分歧的問題。本研究結(jié)果顯示，絞股藍(lán)皂苷與非諾貝特聯(lián)合應(yīng)用6周后，大鼠血清各項(xiàng)檢測指標(biāo)略優(yōu)于單用絞股藍(lán)組，提示調(diào)脂治療可以聯(lián)合用藥。本研究僅比較了聯(lián)合用藥與單藥絞股藍(lán)治療大鼠高血脂癥的療效及安全性，觀察的時(shí)間較短，遠(yuǎn)期的療效和安全性尚需進(jìn)一步研究。

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國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(81303096)。

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R589.2

A

1002-266X(2016)47-0029-03

2016-01-12)