谷偉，戶(hù)國(guó)，孫鵬，白慶利，王炳謙

（中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所淡水魚(yú)類(lèi)育種國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150070）

褐鱒Salmo trutta血液生理生化指標(biāo)的測(cè)定

谷偉，戶(hù)國(guó)，孫鵬，白慶利，王炳謙

（中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所淡水魚(yú)類(lèi)育種國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150070）

選擇健康的體質(zhì)量約為336g的褐鱒Salmo trutta 20尾，雌雄各半，在常規(guī)環(huán)境中暫養(yǎng)觀察10d，禁食12h后，尾靜脈采血，利用BT-2100全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定16項(xiàng)血液生理值，利用DXC800型貝克曼全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定31項(xiàng)血清生化值，以建立2齡褐鱒的血液正常生理生化指標(biāo)。結(jié)果表明：雌雄褐鱒血液生理指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05），但血液中Mg、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）和直接膽紅素（DBIL）含量及白球比（A/G）顯著差異（P＜0.05），說(shuō)明褐鱒生理指標(biāo)不受性別影響，而某些生化指標(biāo)卻受性別的影響。

褐鱒；血液生理指標(biāo)；血液生化指標(biāo)

血液是動(dòng)物生命的核心，有運(yùn)輸、調(diào)節(jié)機(jī)體溫度、防御、調(diào)節(jié)滲透壓和酸堿平衡的功能。魚(yú)類(lèi)血液指標(biāo)是反映魚(yú)體生理狀態(tài)的標(biāo)尺，與代謝、營(yíng)養(yǎng)狀況及疾病有密切關(guān)系?？筛鶕?jù)血液生理生化指標(biāo)評(píng)價(jià)魚(yú)類(lèi)的生理、營(yíng)養(yǎng)及對(duì)環(huán)境的適應(yīng)狀況，在養(yǎng)殖中有助于預(yù)防和控制魚(yú)類(lèi)疾病[1-4]。大量研究表明：不同魚(yú)類(lèi)或同種魚(yú)類(lèi)的不同種群的血液學(xué)指標(biāo)會(huì)因生物和環(huán)境條件的改變而變化[5-10]。因此，測(cè)定養(yǎng)殖條件下魚(yú)類(lèi)血液指標(biāo)就顯得尤為重要。

褐鱒Salmo trutta原產(chǎn)于歐洲、非洲北部和西亞地區(qū)[11]，在我國(guó)僅見(jiàn)于西藏亞?wèn)|縣，是十九世紀(jì)由英國(guó)人引種至此形成的種群，命名為亞?wèn)|鮭[12]，1992年被列入西藏自治區(qū)二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)水生動(dòng)物[13]。褐鱒營(yíng)養(yǎng)豐富，氨基酸種類(lèi)齊全，是一種優(yōu)質(zhì)脂肪酸的食物源[14]，我國(guó)已對(duì)其養(yǎng)殖、遺傳和生物學(xué)開(kāi)展了相關(guān)研究工作[15-18]。本研究通過(guò)測(cè)定褐鱒的血液常規(guī)值范圍，建立褐鱒的血液生理生化指標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)，以期為褐鱒養(yǎng)殖和疾病防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)在中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所渤海冷水性魚(yú)類(lèi)試驗(yàn)站進(jìn)行。選用體質(zhì)健壯的2+齡雌雄褐鱒，體質(zhì)量分別為（334±61.86）g和（338±46.32）g，體長(zhǎng)分別為（28.77±1.28）cm和（29±1.31）cm。試驗(yàn)開(kāi)始前各取10尾，于4m× 1.50m×0.60m、水深0.45m的水泥池中暫養(yǎng)10d，試驗(yàn)用水的pH 6.9～7.6，溶氧 9.8～11.5mg/L，水溫6～8.5℃。

1.2 血樣制備

禁食12h的試驗(yàn)魚(yú)取出后，立即放入裝有0.5mL/L的苯氧乙醇溶液中麻醉30min，經(jīng)尾靜脈采血8～9mL，立刻分裝到采血管中。其中，3.5mL血樣置于含有肝素鈉的采血管中抗凝，1mL加入到含EDTA的采血管中抗凝，3mL血樣于4℃下自然析出血清，經(jīng)離心后取適量血清用于測(cè)定生化指標(biāo)。

1.3 生理生化指標(biāo)及其測(cè)定方法

參照徐革鋒等[19]的方法測(cè)定16項(xiàng)生理指標(biāo)：中性粒細(xì)胞比率（NE，%）、淋巴細(xì)胞比率（LYM，%）、單核細(xì)胞比率（MO，%）、嗜酸性細(xì)胞比率（EO，%）、嗜堿性細(xì)胞比率（BA，%）、紅細(xì)胞數(shù)（RBC，1012/L）、血紅蛋白含量（HGB，g/L）、紅細(xì)胞壓積（HCT，%）、紅細(xì)胞體積（MCV，fl）、紅細(xì)胞蛋白含量（MCH，pg）、紅細(xì)胞蛋白濃度（MCHC，%）、紅細(xì)胞分布寬度（RDW，%）、血小板數(shù)（PLT）、血小板壓積P（CT）、血小板體積（MPV），和血小板分布寬度（PDW）。

參照張永泉等[20]的方法用DXC800型貝克曼全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)BECKMAN公司）測(cè)定31種血液生化指標(biāo)，具體參數(shù)如下：總蛋白（TP，g/L）、白蛋白（ALB，g/L）、球蛋白（GLB，g/L）、白球比A/G、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT，IU/L）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST，IU/L）、谷草轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST/ALT）、r-谷氨酪轉(zhuǎn)肽酶（GGT，IU/L）、堿性磷酸酶（ALP，IU/L）、鉀（K，mmol/L）、鈉（Na，mmol/L）、氯（Cl，mmol/L）、鈣（Ca，mmol/L）、磷（P，mmol/L）、鎂（Mg，mmol/L）、尿素氮（BUN，mmol/L）、肌酐（CREA，μmol/L）、尿酸（URIC，μmol/L）、血漿滲透壓（OSM，m OSM/L）、葡萄糖（GLU，mmol/L）、血淀粉酶（PAMY，IU/L）、總膽紅素（TBIL，μmol/L）、直接膽紅素（DBIL，μ mol/L）、間接膽紅素（IBIL，μmol/L）、甘油三酯（TG，mmol/L）、總膽固醇（CHOL，mmol/L）、高密度脂蛋白（HDL，mmol/L）、低密度脂蛋白（LDL，mmol/L）、乳酸脫氫酶（LDH，IU/L）、肌酸激酶（CK，IU/L），和a-羥丁酸脫氨酶（HBDH，IU/L）。

1.4 血液流變學(xué)指標(biāo)測(cè)定

在室溫條件下，選用10s-1、60s-1和150s-1三個(gè)切變率（γ）測(cè)定全血粘度ηb。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD）表示，用SAS9.0統(tǒng)計(jì)軟件處理分析，利用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，采用Duncan多重比較進(jìn)行兩兩比較，當(dāng)P＜0.05時(shí)差異顯著，P＜0.01時(shí)差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 褐鱒血液的生理指標(biāo)

雌雄褐鱒血液生理指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05），其中雄褐鱒的HGB、MCH和MCHC值高于雌性，而雌性褐鱒僅PLT高于雄性（表1）。

2.2 褐鱒血液的生化指標(biāo)

雌雄褐鱒血液生化指標(biāo)見(jiàn)表2。由表2可知：雌雄個(gè)體的Mg、TP、ALB、GLB、A/G和DBIL指標(biāo)呈顯著性差異（P＜0.05），其余指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 褐鱒血液流變學(xué)指標(biāo)

雌雄褐鱒在10s-1、60s-1和150s-1三個(gè)切變率下的全血粘度曲線（圖1），隨著切變率的增加呈典型的對(duì)數(shù)模式降低，雌雄褐鱒方程分別為：

y=12.23+63.65/x，R2=0.9404；

y=13.79+76.83/x，R2=0.9302。

從圖1中看出，在不同切變率下，雌褐鱒血液的全血粘度值低于雄性個(gè)體。

圖1 雌雄褐鱒在不同切變率下的全血粘度Fig.1 Blood viscosity of male and female brown trout Salmo truttas under different shearing rates

表1 雌雄褐鱒血液生理指標(biāo)比較Tab.1 Comparison of blood physiological indices between male and female brown trout Salmo truttas

表2 雌雄褐鱒血液生化指標(biāo)比較Tab.2 Comparison of serum biochemical indices between male and female brown trout Salmo truttas

3 討論

3.1 褐鱒血液生理指標(biāo)

目前認(rèn)為，魚(yú)類(lèi)血液的某些性狀指標(biāo)與其活動(dòng)能力及食性密切相關(guān)，大多數(shù)情況下，活動(dòng)能力強(qiáng)的魚(yú)類(lèi)高于活動(dòng)能力弱的魚(yú)類(lèi)[21]。本研究中，褐鱒血液生理特點(diǎn)與其活動(dòng)特性也表現(xiàn)出了上述規(guī)律。褐鱒泳動(dòng)迅捷，喜逆流，可離水1m多高，頗具垂釣價(jià)值。從表1可知，雄褐鱒的HGB、MCH和MCHC三個(gè)指標(biāo)高于雌性，而雌褐鱒僅PLT指標(biāo)高于雄性，但差異均不顯著，說(shuō)明褐鱒性別對(duì)血液生理指標(biāo)沒(méi)有顯著影響。通常情況下，魚(yú)類(lèi)血液中的血紅蛋白數(shù)量與魚(yú)類(lèi)耐低氧能力和水環(huán)境中的含氧量有關(guān)[22]。美洲紅點(diǎn)鮭Salvelinus fontinalis血紅蛋白含量為（118.60±14.14）g/L，紅細(xì)胞血紅蛋白為（106.85±12.74）pg，平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度為（79.93±8.78）%[23]。虹鱒Oncorhynchus mykiss血紅蛋白含量為（101.85±3.53）g/L[19]。山女鱒 Oncorhynchus masou血紅蛋白含量為（107.33±23.00）g/L，平均紅細(xì)胞血紅蛋白為（235.12±76.32）pg[24]。本研究中，褐鱒血紅蛋白含量為45.4～66.55g/L，平均紅細(xì)胞血紅蛋白為63.42～95.66pg，平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度為153.2%～179.88%。褐鱒的紅細(xì)胞數(shù)量及血紅蛋白含量較低，耐低氧能力較其他幾種冷水性魚(yú)類(lèi)差，這與實(shí)際情況一致。所以，在褐鱒養(yǎng)殖中要注意保證水中的溶氧量，尤其在活魚(yú)運(yùn)輸過(guò)程中。與某些魚(yú)類(lèi)相似的是，褐鱒白細(xì)胞中的淋巴細(xì)胞數(shù)量比例較大（86.84%～88.81%），單核細(xì)胞（6.13%～6.32%）和嗜中性粒細(xì)胞（3.67%～5.1%）次之，嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞占比最小。淋巴細(xì)胞數(shù)量比例較大時(shí)有三種情況，即嗜中性粒細(xì)胞高，單核細(xì)胞低；單核細(xì)胞高，嗜中性粒細(xì)胞低；嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞均高而淋巴細(xì)胞偏低[21]。本研究中，褐鱒血液白細(xì)胞的分類(lèi)計(jì)數(shù)中單核細(xì)胞高，嗜中性粒細(xì)胞低。

3.2 褐鱒血液的生化指標(biāo)

眾所周知，血液中各種無(wú)機(jī)離子的濃度對(duì)魚(yú)體滲透壓和血液pH的調(diào)控及應(yīng)激反應(yīng)有重要作用。本研究結(jié)果顯示，雌性褐鱒僅Mg2+含量顯著高于雄性褐鱒，其他離子濃度水平雌雄間無(wú)顯著性差異，無(wú)機(jī)離子濃度水平與尾崎久雄研究結(jié)果[25]基本一致。

魚(yú)體血糖（GLU）水平為衡量機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況的指標(biāo)，與生長(zhǎng)速度有直接關(guān)系，血糖含量高，意味著魚(yú)攝食積極、生長(zhǎng)迅速、運(yùn)動(dòng)活潑、健康狀況良好[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，雌雄褐鱒的血糖含量無(wú)顯著性差異，高于其他鮭科魚(yú)類(lèi)，這與褐鱒機(jī)警、快速泳動(dòng)的生活特性相一致。

雌雄褐鱒的TP、ALB、GLB、A/G和DBIL指標(biāo)差異顯著（表2）（P＜0.05），這表明褐鱒血液生化指標(biāo)在正常情況下雌雄有別，以生化指標(biāo)的變化作為疾病診斷的依據(jù)時(shí)，不能以單一性別判斷。同時(shí)，也可利用血液指標(biāo)值判斷魚(yú)的性別。球蛋白作為魚(yú)類(lèi)的免疫成分，增高意味著免疫力增強(qiáng)。雌雄褐鱒的球蛋白含量分別為（25.8±7.11）g/L和（10.9±5.44）g/L，且差異顯著，說(shuō)明雌性個(gè)體較雄性個(gè)體抗性更強(qiáng)，這與養(yǎng)殖中的觀察一致，也可能與性腺發(fā)育中蛋白質(zhì)合成加快有關(guān)。

綜上所述，本研究結(jié)果與養(yǎng)殖實(shí)踐中雌雄褐鱒的表現(xiàn)基本一致。本實(shí)驗(yàn)獲得的生理生化數(shù)據(jù)作為褐鱒血液常值，可為疾病診斷、防控和養(yǎng)殖實(shí)踐提供參考。

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Physiological and Biochemical Indices of Brown Trout Salmo trutta

GU Wei,HU Guo,SUN Peng,BAI Qing-li,WANG Bing-qian
（National and Local Joint Engineering Laboratory of Freshwater Fish Breeding,Heilongjiang River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,China）

The normal physiological（16 items）and biochemical（31 items）indices were determined in blood sampled from caudal veins of twenty healthy two-year old brown trout Salmo trutta with body weight of about 336g（ratio of male to female=1:1）cultured in conventional environment for 10 days by an automatic animal analyzer and by automatic Beckmann-DXC800 BT-2100 analyzer after the fish were fasted for 12 h.The results showed that there were no significant differences in blood physiological indices between male and female（P＞0.05）.However,significant differences in serum biochemical indices including levels of Mg,total protein（TP）, albumin（ALB）,globulin（GLB）,and direct bilirubin（DBIL）and albumin/globulin（A/G）value were observed between male and female（P＜0.05）,suggesting that blood physiological indices between male and female be coincident basically,being not affected by gender.The male and female brown trout,however,had some different serum biochemical indices.

Salmo trutta;physiological index;biochemical index

S965.1

A

1005-3832（2016）05-0012-05

2016-03-25

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專(zhuān)項(xiàng)（201403012）；農(nóng)業(yè)部948引進(jìn)項(xiàng)目（2014-Z57）.

谷偉(1978-)，男，助理研究員，碩士，從事冷水魚(yú)遺傳育種研究.E-mail:guwei@hrfri.ac.cn

王炳謙，研究員.E-mail:bingqianwang@yeah.net