馬坤

（普萊柯生物工程股份有限公司，河南 洛陽(yáng) 471000）

仔豬流行性腹瀉發(fā)病診斷及感染毒株S基因特點(diǎn)分析

馬坤

（普萊柯生物工程股份有限公司，河南 洛陽(yáng) 471000）

2016年2月，江蘇某豬場(chǎng)發(fā)生仔豬病毒性腹瀉，臨床表現(xiàn)為拉黃色、灰色水樣糞便，個(gè)別嘔吐，嚴(yán)重者脫水死亡。年齡越小，癥狀越重，以產(chǎn)房仔豬最為嚴(yán)重，發(fā)病率和死亡率最高。筆者對(duì)發(fā)病場(chǎng)進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，臨床解剖，實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)，陽(yáng)性抗原S基因測(cè)序及變異特點(diǎn)分析，最終診斷此次疫病為新流行變異豬流行性腹瀉病毒（PEDV）毒株感染引起的仔豬流行性腹瀉。

豬流行性腹瀉；發(fā)病診斷；基因變異分析

豬流行性腹瀉，英文縮寫(xiě)為PED（Porcine Epidemic Diarrhea），是由豬流行性腹瀉病毒引起的一種接觸性急性腸道傳染病。1971年首發(fā)于英國(guó)，20世紀(jì)80年代初我國(guó)陸續(xù)發(fā)生本病。臨床變化和癥狀與豬傳染性胃腸炎極為相似。以嘔吐、水樣腹瀉、脫水為特征，糞便顏色有黃色、黃綠色、灰色等，在我國(guó)多發(fā)生在每年12月份至翌年2月份，夏季也有嚴(yán)重發(fā)病案例。各種年齡的豬均易感，在本病暴發(fā)的豬場(chǎng)，一般先感染肥育豬，然后到種豬最后到哺乳仔豬的感染過(guò)程，但以哺乳仔豬的致死率最高，其中7日齡內(nèi)仔豬感染后迅速脫水死亡，損失慘重。尤其2010年以來(lái)以變異型豬流行性腹瀉病毒引起的仔豬流行性腹瀉，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1 臨床癥狀

2016年2月初江蘇某規(guī)模豬場(chǎng)發(fā)生病毒性腹瀉，臨床癥狀為黃色、灰色水樣腹瀉，脫水，個(gè)別有嘔吐。年齡越小，癥狀越重，以產(chǎn)房仔豬最為嚴(yán)重，發(fā)病率和死亡率最高。少數(shù)病豬出現(xiàn)體溫升高1～2℃，精神沉郁，食欲減退或不食。

2 剖檢病變

共剖檢10頭發(fā)病豬，剖檢變化主要為脫水、消瘦、腸管膨脹擴(kuò)張，腸壁變薄、透明、腸黏膜出血脫落，小腸內(nèi)充滿大量黃色、紅色帶泡沫水樣液體，腸系膜淋巴結(jié)出血腫大（圖1—圖10）。

圖1 腸管膨脹，腸系膜淋巴結(jié)出血

圖2 腸黏膜脫落、腸系膜淋巴結(jié)出血

圖3 腸道出血、充滿紅色水樣液體

圖4 腸腔充滿黃色水樣液體

圖5 胃腸脹氣、腸系膜淋巴結(jié)出血

圖6 腸黏膜脫落、腸壁變薄

圖7 腸黏膜脫落、腸壁透明

圖8 腸道充滿黃色帶泡沫液體

圖9 腸壁變薄、充滿黃色水樣液體

圖10 腸道出血、膨脹

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

采集剖檢豬的腸內(nèi)容物及送檢的發(fā)病豬糞便，用國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心診斷實(shí)驗(yàn)室自建的PCR方法檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）和豬輪狀病毒（PoRV）。

4 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果

病料分8個(gè)待檢樣品，其中剖檢大箱-保育豬腸內(nèi)容物編號(hào)16106-1，大箱-小豬腸內(nèi)容物編號(hào)16106-2，大箱-糞便編號(hào)為16106-3和16106-4，小箱-2份腸內(nèi)容物編號(hào)16106-5，小箱-3份腸內(nèi)容物編號(hào)16106-6，大箱-腸內(nèi)容物/糞便編號(hào)16106-7，小箱-5份腸內(nèi)容物編號(hào)16106-8。PEDV的PCR檢測(cè)結(jié)果：除16106-1外，其余均為陽(yáng)性，如圖11；TGEV和PoRV的PCR檢測(cè)結(jié)果均為陰性，如圖12、圖13。

圖11 PEDV PCR產(chǎn)物凝膠電泳

圖12 TGEV PCR產(chǎn)物凝膠電泳

圖13 PoRV PCR產(chǎn)物凝膠電泳

根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合流行病學(xué)特征、臨床癥狀和剖檢變化確診為PEDV感染引起的仔豬流行性腹瀉。

5 陽(yáng)性樣品16106-3測(cè)序結(jié)果及分析

5.1 PEDV陽(yáng)性樣品測(cè)序結(jié)果

測(cè)序獲得PEDV陽(yáng)性樣品16106-3的S基因的部分序列，長(zhǎng)為543 bp。

5.2 測(cè)序結(jié)果與已知PEDV分離株之間S基因序列同源性分析

將PEDV陽(yáng)性樣品16106-3與已分離的PEDV代表毒株S基因核苷酸序列進(jìn)行同源性比較（圖14）。結(jié)果顯示，16106-3與31株P(guān)EDV代表株的基因序列同源性均高于77.1%，但各序列之間存在少量突變、插入或缺失，導(dǎo)致同源性也不盡相同。目前，PEDV的商品化弱毒疫苗主要有我國(guó)的CV777株、日本的83P-5株和韓國(guó)的DR13株，P16106-3與其同源性分別是77.8%、77.1%和77.5%，而與近幾年流行毒株USA_MN、CH_FJND-3、CH_GD-A、TW_Yun lin-91、TW_Chiayi-32等的同源性均高于93.1%，這說(shuō)明與近些年流行的美洲株、中國(guó)大陸株和臺(tái)灣株親緣關(guān)系較近，而與我國(guó)以前的地方流行株，如CH_S、JS-2004、JS2008等親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，均不高于77.1%。

圖14 不同PEDV毒株之間S基因核苷酸序列同源性分析

5.3 測(cè)序結(jié)果與已知PEDV分離株之間S基因核苷酸序列的進(jìn)化樹(shù)分析

PEDV不同毒株S基因核苷酸序列進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn)（圖15），PEDV陽(yáng)性樣品16106-3與中國(guó)流行株CH_FJND-3處于同一個(gè)分支。

圖15 不同PEDV毒株之間S基因核苷酸序列的進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果

5.4 16106-3核苷酸序列與已知PEDV毒株全基因序列比對(duì)分析

PEDV陽(yáng)性樣品16106-3核苷酸序列與其它毒株相應(yīng)序列的比對(duì)分析結(jié)果顯示，PEDV陽(yáng)性樣品16106-3的核苷酸序列在180 bp和340 bp處，分別有3 bp、12 bp的堿基缺失。此外16106-3與中國(guó)近些年（2011年以后）流行株CH_FJND-3、CH_GD-A、TW_Yunlin-91、TW_Chiayi-32等一樣，在470 bp處有6 bp堿基缺失，而與中國(guó)早前流行的CH_S、JS-2004、JS2008等毒株在200 bp和240 bp處分別有數(shù)量不等的堿基突變不同。推測(cè)PEDV陽(yáng)性樣品16106-3可能屬于中國(guó)近些年引起仔豬病毒性腹瀉的流行毒株。

6 討論與分析

我國(guó)自2010年年底開(kāi)始至今，新流行變異株引起的仔豬流行性腹瀉給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成很大損失，尤其是造成了產(chǎn)房仔豬大批死亡。因?yàn)樾铝餍凶儺愔暝诨蛐蛄猩习l(fā)生變異導(dǎo)致其抗原性也發(fā)生了一定的改變，所以以CV777疫苗株為代表的早期疫苗的免疫效果不是很理想，因此盡早研發(fā)出新變異株的有效疫苗尤為重要。當(dāng)前形勢(shì)下針對(duì)該疫病的防控，不光要采取增加免疫次數(shù)和免疫劑量等強(qiáng)化免疫方式，還要做好飼養(yǎng)管理和豬場(chǎng)生物安全等綜合防控措施。針對(duì)發(fā)病豬場(chǎng)，隔離、消毒，及時(shí)準(zhǔn)確的診斷，無(wú)其它病原基礎(chǔ)上的母豬返飼，高效自家苗免疫，補(bǔ)液增能和控制繼發(fā)感染治療，病死豬的無(wú)害化處理，以及完善的綜合防控措施的實(shí)施為該病的控制發(fā)揮了重要作用。

（編輯：郭玉翠）

全球高血壓患者激增至11億

發(fā)展中國(guó)家增幅大 中國(guó)占五分之一強(qiáng)

【法新社巴黎11月16日電】根據(jù)周三公布的一份研究報(bào)告，全球飽受高血壓之苦的人數(shù)近40年來(lái)增加一倍，高達(dá)10億多，其中大多數(shù)人生活在發(fā)展中國(guó)家。

早在1975年，高血壓主要影響富裕國(guó)家。時(shí)至今日，情況發(fā)生了根本性的轉(zhuǎn)變，中低收入國(guó)家患高血壓人數(shù)的增長(zhǎng)令人瞠目。

研究報(bào)告主要作者、倫敦帝國(guó)理工學(xué)院教授馬吉德·伊扎蒂指出，高血壓是腦血管意外和心血管疾病的主要風(fēng)險(xiǎn)因素，每年可造成約750萬(wàn)人死亡。

【法新社巴黎11月16日電】研究人員周三稱，過(guò)去40年全球高血壓患者人數(shù)幾乎翻了一番，南亞和非洲是高血壓患者人數(shù)增加最多的地區(qū)。

研究報(bào)告主要作者伊扎蒂說(shuō)：“從全球看，高血壓不再是西方世界或富國(guó)才有的健康問(wèn)題。對(duì)世界上最貧困國(guó)家及其民眾來(lái)說(shuō)，高血壓也是嚴(yán)重問(wèn)題。”

據(jù)醫(yī)學(xué)雜志《柳葉刀》公布的這份報(bào)告稱，1975至2015年，成年高血壓患者人數(shù)從5.94億增至11億。

研究發(fā)現(xiàn)，澳大利亞、加拿大、德國(guó)和日本等高收入國(guó)家同期的高血壓患病率“明顯下降”。撒哈拉以南非洲國(guó)家、南亞國(guó)家和一些太平洋島國(guó)等中低收入國(guó)家的高血壓患者人數(shù)增幅最大。

2015年，成年高血壓患者中有一多半（約5.9億人）生活在東亞、東南亞和南亞地區(qū)，其中有2.26億人生活在中國(guó)，1.99億人生活在印度。

高血壓患者罹患心臟病、中風(fēng)、腎病和癡呆癥的風(fēng)險(xiǎn)更高。

據(jù)世界衛(wèi)生組織稱，血壓值升至或超過(guò)140/90即可認(rèn)定為高血壓。該機(jī)構(gòu)設(shè)定了一個(gè)目標(biāo)：到2025年高血壓患者人數(shù)要減少25%。

但伊扎蒂說(shuō)，如果不推行“有效政策”讓最貧困群體改善飲食—特別是要減少鹽攝入量并吃得起水果蔬菜，世界衛(wèi)生組織制定的目標(biāo)將“不太可能實(shí)現(xiàn)”。

研究報(bào)告使用的數(shù)據(jù)來(lái)自生活在200個(gè)國(guó)家的1 910萬(wàn)名18歲及以上年齡受訪者。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2016-11-17）

S858.28

A

1002-1957(2016)06-0113-03

2016-10-10

馬 坤（1983-），男，安徽毫州人，獸醫(yī)師，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，碩士，主要從事豬疫苗銷售技術(shù)服務(wù)工作.E-mail：abcmakun306@163.com