周遠(yuǎn)成，王 翱，蔡雨函，李 碧，卓秀萍，牛 婷，鐘 穎

（1.畜禽生物制品四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610299；2.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川 成都 610065；3.四川華神獸用生物制品有限公司四川省動(dòng)物生物制品工程技術(shù)研究中心，四川 成都 610299）

gE抗體陽(yáng)性仔豬免疫偽狂犬病活疫苗后的抗體變化規(guī)律

周遠(yuǎn)成1，2，3，王 翱1，3，蔡雨函1，3，李 碧1，3，卓秀萍1，3，牛 婷1，3，鐘 穎1，3

（1.畜禽生物制品四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610299；2.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川 成都 610065；3.四川華神獸用生物制品有限公司四川省動(dòng)物生物制品工程技術(shù)研究中心，四川 成都 610299）

偽狂犬?。≒seudorabies）最早發(fā)生于1813年，1894年瑞士首次使用“偽狂犬病”這個(gè)詞命名該病。1902年Aujeszky通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)該病病原為病毒，此后研究人員證實(shí)該病病原為皰疹病毒，將其命名為豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV），也稱豬皰疹病毒1型[1]。在我國(guó)，1947年時(shí)劉永純首次在上海分離到PRV，1956年國(guó)營(yíng)寶泉嶺農(nóng)場(chǎng)暴發(fā)豬偽狂犬病，1957年四川華陽(yáng)出現(xiàn)此病，此后PRV一直在我國(guó)流行。近年來(lái)豬偽狂犬病呈現(xiàn)新的流行趨勢(shì)，新流行的PRV致病力強(qiáng)于經(jīng)典流行毒株，通過(guò)分子流行病學(xué)對(duì)其主要致病力和免疫保護(hù)相關(guān)基因進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)新流行的PRV毒株具有多個(gè)新的變異位點(diǎn)[2-5]。變異偽狂犬病病毒的流行給我國(guó)生豬養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

疫苗免疫是防止傳染性疾病的最有效手段。目前國(guó)內(nèi)廣泛使用的偽狂犬病疫苗主要有弱毒活疫苗SA215株、HB98株、HB2000株、Barha（或Barha K61株）、Bucharest株以及鄂A株和閩A株滅活疫苗。《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》將豬偽狂犬病列為重點(diǎn)疫病，2020年全國(guó)所有的種豬場(chǎng)需要達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。在此背景下本試驗(yàn)開(kāi)展了相關(guān)研究工作，測(cè)試了gE抗體陽(yáng)性仔豬免疫偽狂犬病活疫苗后的抗體變化趨勢(shì)，為偽狂犬病病毒免疫、凈化和gE陰性仔豬的培育提供了重要的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

28日齡已斷奶仔豬（長(zhǎng)白、大約克、杜洛克三元雜種仔豬）30頭購(gòu)于四川某豬場(chǎng)，飼養(yǎng)于畜禽生物制品四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)動(dòng)物房（四川省成都市雙流區(qū)黃甲鎮(zhèn)），整個(gè)試驗(yàn)期間維持圈舍溫度為25℃，自由采食、飲水。試驗(yàn)時(shí)間為2016年6—9月。

1.2 抗體檢測(cè)試劑盒

PRV gE抗體檢測(cè)試劑盒和PRV gB抗體檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于IDEXX公司。

1.3 試驗(yàn)用疫苗和稀釋液

豬偽狂犬病活疫苗（撲偽優(yōu)）購(gòu)于四川華神獸用生物制品有限公司，對(duì)照疫苗購(gòu)于國(guó)內(nèi)某廠商，IM101疫苗稀釋液由畜禽生物制品四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室制備提供。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)動(dòng)物篩選 采集gE抗體陽(yáng)性的種豬所產(chǎn)斷奶仔豬血清，使用gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)試所有待檢血清的gE抗體，選擇gE抗體陽(yáng)性的仔豬30頭，開(kāi)展本試驗(yàn)。

1.4.2 分組和免疫 將30頭仔豬隨機(jī)分為3組，每組10頭，分別標(biāo)記為1、2、3組，其中第1組為撲偽優(yōu)組，免疫豬偽狂犬病活疫苗SA215株（使用IM101稀釋液稀釋該疫苗）；第2組對(duì)照疫苗組，免疫對(duì)照國(guó)產(chǎn)疫苗（使用疫苗配套稀釋液稀釋該疫苗）；第3組為空白對(duì)照組，僅注射IM101稀釋液。免疫方式均為肌肉注射，免疫劑量均為2 mL/頭。

1.4.3 抗體檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析 分別在免疫時(shí)（4周齡）、免疫后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周采集血清，按照偽狂犬病病毒gE抗體檢測(cè)試劑盒和gB抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行g(shù)B和gE抗體的檢測(cè)并計(jì)算相應(yīng)的S/N值。如果S/N≤0.6判定為陽(yáng)性，0.6＜S/N≤0.7判定為可疑，應(yīng)重新檢測(cè)，S/N＞0.7判定為陰性。根據(jù)判定結(jié)果計(jì)算不同采血時(shí)間點(diǎn)的抗體陽(yáng)性率。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 免疫后gB抗體變化規(guī)律

本次試驗(yàn)選擇的均為gE陽(yáng)性仔豬，免疫前測(cè)定所有試驗(yàn)豬gB抗體也均為陽(yáng)性。4周齡時(shí)免疫，然后每周采集血清使用ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定所有仔豬的血清抗體。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在免疫后1～4周對(duì)照疫苗組和空白對(duì)照組S/N輕微升高，免疫4周以后迅速升高，在免疫后7周時(shí)全部升高至0.7以上，此時(shí)對(duì)照疫苗組和空白對(duì)照組所有豬gB抗體均變?yōu)殛幮?。隨著S/N的升高，對(duì)照疫苗組和空白對(duì)照組gB抗體陽(yáng)性率持續(xù)下降，在免疫后7周（10周齡）時(shí)，對(duì)照疫苗組gB抗體陽(yáng)性率下降至60%，空白對(duì)照組下降至50%。對(duì)照疫苗組于免疫后8周gB抗體陽(yáng)性率變?yōu)?，而空白對(duì)照組則在免疫后9周時(shí)降至0。而撲偽優(yōu)組gB抗體S/N值在整個(gè)免疫后10周內(nèi)無(wú)較大波動(dòng)，S/N值平均值均＜0.2，一直維持在較低水平，gB抗體陽(yáng)性率一直維持為100%陽(yáng)性。gB抗體測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 仔豬免疫后gB ELISA S/N值變化趨勢(shì)

圖2 仔豬免疫后gB抗體陽(yáng)性率變化趨勢(shì)

2.2 免疫后gE抗體變化規(guī)律

本試驗(yàn)中所選擇的gE抗體陽(yáng)性仔豬在4周齡時(shí)免疫偽狂犬病病毒活疫苗，免疫后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定gE抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所有試驗(yàn)組免疫后gE抗體的S/N值均隨著時(shí)間的增加逐漸增大。撲偽優(yōu)組和空白對(duì)照組在免疫后3周時(shí)S/N值平均值上升至0.6以上，而對(duì)照疫苗組則在免疫后5周上升至0.6以上。gE抗體陽(yáng)性率隨著仔豬日齡的增加逐漸下降，對(duì)照疫苗組在免疫后5周gE陽(yáng)性率變?yōu)?，所有仔豬gE抗體轉(zhuǎn)陰，而撲偽優(yōu)組和空白對(duì)照組則在免疫后6周全部轉(zhuǎn)陰。3個(gè)試驗(yàn)組中g(shù)E抗體S/N值和gE抗體陽(yáng)性率雖然在轉(zhuǎn)陰時(shí)間點(diǎn)上有細(xì)微差異，但是其變化趨勢(shì)一致。gE抗體測(cè)定分析結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4。

圖3 仔豬免疫后gE抗體S/N值變化趨勢(shì)

圖4 仔豬免疫后gE抗體陽(yáng)性率變化趨勢(shì)

3 討論

2011年前后全國(guó)各地均有偽狂犬病暴發(fā)的報(bào)道，不同豬場(chǎng)由于豬群群體免疫力的差異，呈現(xiàn)不同的臨床癥狀，但所有豬場(chǎng)均出現(xiàn)種豬群或肥育豬群gE抗體陽(yáng)性率突然升高?；诋?dāng)前我國(guó)偽狂犬病病毒的流行特征和流行趨勢(shì)，為了解豬狂犬病病毒gE抗體陽(yáng)性母豬所產(chǎn)仔豬的免疫情況，本試驗(yàn)使用gE抗體陽(yáng)性種豬所產(chǎn)仔豬進(jìn)行疫苗免疫試驗(yàn)，測(cè)定了gE抗體陽(yáng)性仔豬免疫偽狂犬病活疫苗后的抗體變化趨勢(shì)。結(jié)果表明，偽狂犬病病毒gE抗體陽(yáng)性母豬分娩的仔豬可以通過(guò)初乳獲得母源的gE抗體，但隨著日齡的增加gE抗體陽(yáng)性率會(huì)逐步下降，在一定條件下gE抗體可以完全轉(zhuǎn)陰。該試驗(yàn)同時(shí)也間接證實(shí)，gE抗體陽(yáng)性母豬在分娩期和哺乳期不會(huì)排毒感染初生仔豬（不同豬群的不同感染狀態(tài)下可能存在差異），初生仔豬的gE抗體完全來(lái)源于母乳。

在本試驗(yàn)中，除了測(cè)定gE抗體的變化趨勢(shì)外，還進(jìn)行了gB抗體的測(cè)定。已有數(shù)據(jù)表明，gE抗體陽(yáng)性豬群中種豬的中和抗體效價(jià)顯著高于gE陰性仔豬，因此在哺乳期，gE抗體陽(yáng)性母豬所產(chǎn)仔豬的母源抗體會(huì)高于gE陰性仔豬。如果免疫時(shí)間選擇不合理或者選擇的疫苗不能避免母源抗體的干擾，使用肌肉注射免疫后進(jìn)入仔豬體內(nèi)的病毒會(huì)完全被母源抗體中和而不能發(fā)揮作用。本試驗(yàn)測(cè)試結(jié)果表明，該豬場(chǎng)仔豬首次肌肉注射免疫應(yīng)在10周齡時(shí)進(jìn)行。但不同豬場(chǎng)由于種豬的免疫差異存在著不同的規(guī)律，養(yǎng)豬從業(yè)者需要根據(jù)豬場(chǎng)的實(shí)際情況調(diào)整具體的免疫程序方能達(dá)到有效免疫，防止偽狂犬病的暴發(fā)。

[1]Barbara E Straw,Jeffery J Zimmerman,Sylvie D'Allaire,等主編.豬病學(xué)[M].第9版.趙德明，張仲秋，沈建忠，譯.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008：465-476.

[2]An T Q,Peng J M,Tian Z J,et al.EmergInfectDis[J],2013,19(11): 1749-1755.

[3]Yu X,Zhou Z,Hu D,et al.Emerg Infect Dis[J],2013,19(11): 1749-1755.

[4]Luo Y,Li N,Cong X,et al.Vet Microbiol[J],2014,174(1-2): 107-115.

[5]Wang Y,Qiao S,Li X,et al.Virus Genes[J],2015,50(3):401-409.

[6]陳陸，郭萬(wàn)柱，徐志文，等.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展[J],2005（5）：52-56.

（編輯：郭玉翠）

S858.28

A

1002-1957(2016)06-0093-02

2016-09-20收稿，2016-10-08修回

四川省科技支撐計(jì)劃（2015NZ0105，2016RZ0081）；科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目（專項(xiàng)）（2014CC0056）

周遠(yuǎn)成（1984-），男，四川金堂人，博士，主要從事動(dòng)物傳染病和動(dòng)物生物制品研究工作.E-mail：abtczyc＠163.com