陳瑋粲，李曄

(保定市第一中心醫(yī)院，河北 保定 071000)

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慢性牙周炎患者病損局部Th1和Th17細(xì)胞表達(dá)

陳瑋粲，李曄

(保定市第一中心醫(yī)院，河北 保定 071000)

目的：研究慢性牙周炎患者病損局部的Th1細(xì)胞及Th17細(xì)胞表達(dá)情況，為臨床診治牙周炎提供參考。方法：選擇2013年2月至2015年7月本院收治慢性牙周炎患者70例作為實(shí)驗(yàn)組，同期在本院進(jìn)行體檢的健康者70例作為對照組，對兩組被檢者均給予齦溝液標(biāo)本采集，觀察Th細(xì)胞相關(guān)因子IFN-γ、TNF及IL-17表達(dá)情況并進(jìn)行對比。結(jié)果：慢性牙周炎患者中，Th1細(xì)胞IFN-γ表達(dá)為(0.19±0.05)，高于對照組(P<0.05)；TNF表達(dá)為(0.33±0.05)，高于對照組(P<0.05)；Th17細(xì)胞中IL-17為(0.58±0.12)pg/μL，高于對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：慢性牙周炎患者病損局部均有Th1和Th17細(xì)胞高表達(dá)，提示Th1細(xì)胞及Th17細(xì)胞可能是導(dǎo)致牙周炎發(fā)生的關(guān)鍵因子，共同發(fā)揮致病作用。

慢性牙周炎；牙周炎；Th1細(xì)胞；Th17細(xì)胞

牙周炎是一種發(fā)生在牙周組織的疾病，為感染性病變，包括有慢性牙周炎及侵襲性牙周炎等。慢性牙周炎可以發(fā)生在各個(gè)年齡段，且多為成年人，在35歲以上發(fā)病率有顯著升高，炎癥程度與局部刺激因素基本一致[1]。慢性牙周炎患者臨床表現(xiàn)主要為牙齦炎癥，并伴有牙周附著喪失和牙槽骨吸收，嚴(yán)重的患者還會出現(xiàn)有牙齒移位及松動(dòng)，最終導(dǎo)致牙齒缺失[2]。導(dǎo)致慢性牙周炎發(fā)病的原因尚不清楚，既往臨床認(rèn)為是致病菌導(dǎo)致疾病發(fā)生，但是也存在微生物感染解釋不清的情況[3]。為更好地研究慢性牙周炎的發(fā)病原因，本文選擇2013年2月至2015年7月保定市第一中心醫(yī)院收治的70例慢性牙周炎患者作為實(shí)驗(yàn)對象，給予齦溝液標(biāo)本采集，觀察Th細(xì)胞相關(guān)因子對慢性牙周炎患者的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 資料

選擇2013年2月至2015年7月保定市第一中心醫(yī)院收治的70例慢性牙周炎患者作為實(shí)驗(yàn)組，同期在我院進(jìn)行體檢的70例健康者作為對照組。

慢性牙周炎入選標(biāo)準(zhǔn)：患者口腔衛(wèi)生較差，有牙齦的顏色、形狀和性質(zhì)的變化，至少有1個(gè)位點(diǎn)探診深度在4 mm以上，臨床附著喪失為4 mm以上，余留牙在14個(gè)以上，經(jīng)過X線顯示患者有牙槽骨的吸收[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：侵襲性牙周炎，合并糖尿病，合并高血壓及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，合并全身系統(tǒng)疾病，妊娠期及哺乳期，近半年內(nèi)有牙周治療病史，近3個(gè)月內(nèi)服用有抗生素等藥物，吸煙。

健康者入選標(biāo)準(zhǔn)：全口牙探診深度在3 mm以下，無附著喪失，無免疫系統(tǒng)疾病，無病毒及細(xì)菌感染，無惡性腫瘤，無吸煙等。實(shí)驗(yàn)經(jīng)過倫理委員會批準(zhǔn)，且患者知情同意。兩組患者一般資料見表1，P>0.05，具有可比性。.

表1 慢性牙周炎患者及健康者一般資料比較(n=70)

1.2 方法

對所有被檢者均給予齦溝液的檢查。使用25號吸潮紙消毒滅菌后，稱重。使用手工潔治器對牙面菌斑去除后，在牙周袋的最深點(diǎn)進(jìn)行性采樣。試紙尖要沿著牙面輕輕地插入到牙周袋，遇到阻力后要停留半分鐘，取出后稱重，并記錄。如果有血液和唾液污染則棄掉。對慢性牙周炎患者要選取牙周病牙，健康者隨機(jī)選取任意牙。使用ELISA法檢測對細(xì)胞因子Th1及Th17細(xì)胞因子檢測[5]。實(shí)驗(yàn)試劑及器材：ELISA試劑盒(上海裕平生物科技公司生產(chǎn))、恒溫箱、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀、精密移液器、蒸餾水、一次性試管、吸水紙。實(shí)驗(yàn)方法：①標(biāo)準(zhǔn)品稀釋及加樣：測樣品孔中加入50 μL的稀釋液和10 μL的樣品進(jìn)行稀釋；②孵育及洗板：封膜，恒溫箱孵育30 min(37 ℃)后用洗板機(jī)洗板3～4次，每次之間靜置15 s；再加入50 μL酶標(biāo)試劑恒溫箱孵育30 min(37 ℃)后，繼續(xù)用洗板機(jī)洗板3～4次，靜置時(shí)間同上；③顯色與終止：依次加入A和B顯色劑液(各50 μL)，混勻，暗室(室溫20 ℃)放置15 min后，加入50 μL的終止液。15 min內(nèi)使用酶標(biāo)儀讀取OD值，并計(jì)算出待測指標(biāo)，Th1細(xì)胞包括：IFN-γ及TNF；Th17細(xì)胞指：IL-17的濃度。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

慢性牙周炎患者中，Th1細(xì)胞IFN-γ表達(dá)為(0.19±0.05)pg/μL，高于對照組(P<0.05)；TNF表達(dá)為(0.33±0.05)pg/μL，高于對照組(P<0.05)；Th17細(xì)胞中IL-17為0.58±0.12 pg/uL，高于對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2 慢性牙周炎與健康者齦溝液標(biāo)本中Th1和Th17細(xì)胞表達(dá)情況(n=70)

3 討論

3.1 慢性牙周炎概述

牙周炎是牙周支持組織的一種感染性的病變，是導(dǎo)致成年人牙缺失的一個(gè)主要因素，并與心血管、糖尿病等多個(gè)系統(tǒng)疾病相關(guān)。臨床研究發(fā)現(xiàn)牙槽骨吸收主要是由于齦溝內(nèi)和牙周袋的齦下菌斑及產(chǎn)物釋放了過多的炎性介質(zhì)及細(xì)胞因子，相互作用引發(fā)炎癥的發(fā)生[6]。

慢性牙周炎為臨床常見的一種牙周炎，其中以牙齦炎癥、慢性炎癥性疾病及牙槽骨的吸收為主要的臨床表現(xiàn)，在35歲以后人群的發(fā)病率會有明顯的升高[7]。此疾病的起病緩慢，活動(dòng)期與靜止期會交替出現(xiàn)，在靜止期，其主要表現(xiàn)為炎癥的反應(yīng)減輕，且骨吸收及附著喪失停止；而在活動(dòng)期，骨吸收和附著喪失明顯加快，牙周袋加深。靜止期和活動(dòng)期交替出現(xiàn)。

既往臨床認(rèn)為，細(xì)菌是導(dǎo)致牙周炎發(fā)生的主要因素，而隨著臨床對有牙齦組織、齦溝液的重視，有關(guān)炎性介質(zhì)、免疫反應(yīng)等逐漸引起重視。

3.2 輔助性T淋巴細(xì)胞

T淋巴細(xì)胞為免疫系統(tǒng)中的一個(gè)高度異質(zhì)性的群體。其中輔助性T淋巴細(xì)胞為T淋巴細(xì)胞的分類，并與微生物所引起的感染性病變有密切的關(guān)系，其能夠輔助其他免疫細(xì)胞的分化，并具有較好的調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的效果，能夠產(chǎn)生不同的細(xì)胞因子。

輔助性T淋巴細(xì)胞根據(jù)其所產(chǎn)生細(xì)胞因子的不同，分為Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞及Th17細(xì)胞，并均來自于Th0細(xì)胞。輔助性T淋巴細(xì)胞的分化與自身的基因調(diào)節(jié)、細(xì)胞因子調(diào)節(jié)和趨化因子調(diào)節(jié)及信號通路有關(guān)，并由T-bt、GATA-3及孤核受體RORγt所決定。不同細(xì)胞亞群之間可以相互抑制和共生，并發(fā)揮各自的功能[8]。

3.3 慢性牙周炎患者Th1和Th17細(xì)胞表達(dá)

Th1細(xì)胞因子可以加重牙周組織的炎癥，并增加牙槽骨的破壞程度，當(dāng)機(jī)體被異己抗原供給，Th1細(xì)胞因子可能會出現(xiàn)功能升高，出現(xiàn)漂移。且牙周破壞主要是由于局部環(huán)境中Th1與Th2的應(yīng)答失衡，表現(xiàn)為Th1細(xì)胞的功能亢進(jìn)[9-10]。

Th17主要在于牙周病組織的破壞階段，其能夠誘導(dǎo)細(xì)胞釋放炎癥因子，并動(dòng)員中性粒細(xì)胞因子，進(jìn)而發(fā)揮作用。且Th17破壞作用較大，其可以作為一個(gè)專門的破骨細(xì)胞源性淋巴細(xì)胞，并將骨吸收與T細(xì)胞活化相聯(lián)系[11]。

本次實(shí)驗(yàn)研究分析了慢性牙周炎與健康者的齦溝液Th1及Th17細(xì)胞。慢性牙周炎患者中，Th1細(xì)胞IFN-γ表達(dá)為(0.19±0.05)pg/μL，高于對照組的(0.11±0.03)pg/μL，P<0.05；TNF表達(dá)為(0.33±0.05)pg/μL，高于對照組的(0.24±0.06)pg/μL，P<0.05；Th17細(xì)胞中IL-17為(0.58±0.12)pg/μL，高于對照組的15.060 pg/μL，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說明患者的免疫系統(tǒng)被打破，患者炎性細(xì)胞因子增加，促炎/抑炎平衡出現(xiàn)失調(diào)，T細(xì)胞的網(wǎng)絡(luò)平衡受到破壞。

高Th1與Th17的應(yīng)答建立會抑制Th2的反應(yīng)。我們認(rèn)為，在慢性牙周炎患者初期階段，宿主反應(yīng)多為保護(hù)性，可以防止細(xì)菌侵入到牙周組織深層，但是由于抗原的持續(xù)刺激，T細(xì)胞增生，會釋放淋巴因子，導(dǎo)致宿主組織的進(jìn)一步損傷，且由于菌斑持續(xù)存在，反應(yīng)持續(xù)時(shí)間長，炎癥控制差，導(dǎo)致了牙周炎的局部炎癥進(jìn)展。

綜上所述，慢性牙周炎患者病損局部均有Th1和Th17細(xì)胞高表達(dá)，提示Th1細(xì)胞及Th17細(xì)胞可能是導(dǎo)致牙周炎發(fā)生的關(guān)鍵因子，共同發(fā)揮致病作用。

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(學(xué)術(shù)編輯：劉英)

The expression of local Th1 and Th17 cells of the patients with chronic periodontitis

CHEN Wei-can，LI Ye

(TheFirstCentralHospitalofBaoding,Baoding071000,Hebei,China)

Objective：To investigate the expression of local Th1 and Th17 cells of the patients with chronic periodontitis,and to provide reference for the clinical diagnosis and treatment of periodontitis.Methods：70 patients with chronic periodontitis from February 2013 to July 2015 in our hospital were selected as the experimental group,70 cases of healthy persons for medical examination at the same period in our hospital were set as the control group,two groups of subjects were given gingival crevicular fluid samples collecting,the expression of Th cell related factors IFN-γ,TNF and IL-17 were observed and compared.Results：The expression of IFN-γ in Th1 cells was 0.19 ± 0.05 in chronic periodontitis patients,higher than that in control group (P<0.05).TNF expression was 0.33±0.05,higher than the control group (P<0.05).IL-17 in Th17 cells 0.58±0.12 pg/μL,higher than the control group,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion：The high expression of local Th1 and Th17 cells of chronic periodontitis lesion in patients,suggests that Th1 and Th17 cells may lead to the key factors of the occurrence of periodontitis and play a pathogenic role.

Chronic periodontitis;Periodontitis;Th1 cell;Th17 cell

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.06.024

2016-03-31

陳瑋粲(1985-)，女，碩士，主治醫(yī)師。E-mail：aishangni1300@163.com

時(shí)間：2017-1-3 22∶01

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20170103.2201.048.html

1005-3697(2016)06-0863-03

R783.3

A