楊治平，孫華棟

（1.山西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，太原 030012；2.山西省農(nóng)業(yè)規(guī)劃設(shè)計(jì)研究院，太原 030002）

山西省2015年部分地區(qū)羊口蹄疫疫病的血清學(xué)調(diào)查

楊治平1，孫華棟2

（1.山西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，太原 030012；2.山西省農(nóng)業(yè)規(guī)劃設(shè)計(jì)研究院，太原 030002）

目的：為了解山西省2015年度羊口蹄疫集中免疫效果。方法：從山西省11個(gè)市14個(gè)縣40個(gè)規(guī)模場(chǎng)和17個(gè)散養(yǎng)戶采集1 010份羊血清樣品。采用酶聯(lián)免疫法吸附試驗(yàn)方法。結(jié)果：山西省11個(gè)市1 010份羊血清樣品的O型口蹄疫血清抗體平均合格率為77.72%，亞洲Ⅰ型口蹄疫血清抗體平均合格率為79.21%。結(jié)論：山西省11個(gè)市調(diào)查的羊口蹄疫免疫抗體全部符合農(nóng)業(yè)部要求，但仍需加強(qiáng)相關(guān)免疫，防止重大疫病發(fā)生。

羊口蹄疫病 血清學(xué)檢測(cè) 調(diào)查

1 口蹄疫發(fā)病特點(diǎn)

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引發(fā)的一種急性發(fā)熱性和傳播極為迅速的接觸性傳染病，在偶蹄獸中發(fā)生。被侵染的動(dòng)物顯著特征為蹄、乳頭、乳房、口腔黏膜等處形成水皰［1］?？谔阋叩牟《局饕峭ㄟ^(guò)消化道、呼吸道等進(jìn)行傳染，病毒的潛伏期比較長(zhǎng)，羊的發(fā)病時(shí)間主要是在春秋兩季，尤其春季風(fēng)和回歸的候鳥(niǎo)都是病毒傳播的主要原因［2］。該病傳播速度快，感染率高，一旦發(fā)病，很難控制和消滅，還會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和政治影響。故OIE將其列為A類傳染病之首，我國(guó)也將其列為一類動(dòng)物傳染病［3］。為了解山西省口蹄疫集中免疫效果，給預(yù)防和控制口蹄疫疫病提供科學(xué)依據(jù)，筆者于2015年全年對(duì)全省11個(gè)市進(jìn)行了口蹄疫病血清學(xué)調(diào)查，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.1 被檢血清

2015年在山西省11個(gè)市14個(gè)縣通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)采集和送樣的方式，隨機(jī)抽取了40個(gè)規(guī)模場(chǎng)和17個(gè)散養(yǎng)戶共1 010份血清樣品（其中規(guī)模場(chǎng)羊血清800份、散養(yǎng)戶血清210份）。

1.2 器材

酶標(biāo)儀（美國(guó)伯騰ELX800）、洗板機(jī)、微量移液器、溫箱等儀器設(shè)備。

1.3 操作步驟

O型和亞洲I型抗體檢測(cè)方法如下。

（1）配洗液：將50 ml洗液加純化水稀釋至1 000 ml，充分搖勻后備用。

（2）編號(hào)：每次試驗(yàn)應(yīng)在包被板上設(shè)空白對(duì)照孔1孔，陰性對(duì)照孔2孔，陽(yáng)性對(duì)照孔2孔，其余為待檢樣品孔。

（3）加樣品稀釋液：用加樣器在包被板的待檢樣品中加入樣品稀釋液，每孔100μl；空白對(duì)照孔、陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔不加樣品稀釋液。

（4）加樣：分別于各待檢樣品孔加入待檢樣品10μl，陰性對(duì)照孔加入陰性對(duì)照血清100μl，陽(yáng)性對(duì)照孔加入陽(yáng)性對(duì)照血清100μl；空白對(duì)照孔不加樣。

（5）溫育：充分混勻，貼上封板膜，37℃溫箱溫育30 min。

（6）洗板：洗板機(jī)洗或手洗，方法如下。

手洗：傾去內(nèi)容物，用洗液注滿反應(yīng)孔，靜置15～30 s后吸去或棄去，在毛巾或吸水紙上拍干。如此洗板重復(fù)5次。

洗板機(jī)洗：洗板次數(shù)為5次，每次洗液在孔中滯留時(shí)間為15～30 s，洗液應(yīng)注滿反應(yīng)孔，確保每次吸凈無(wú)殘留，全部洗完后在毛巾或吸水紙上拍干。

（7）加酶標(biāo)結(jié)合物：除空白對(duì)照孔以外，各孔中加入酶標(biāo)結(jié)合物100μl。

（8）溫育：貼上封板膜，37℃溫箱溫育30 min。

（9）洗板：方法同上洗板。

（10）加顯色劑：每孔加入A顯色劑50μl，全部加完后再在每孔中加入B顯色劑50μl，混勻，封板。

（11）溫育：37℃溫箱顯色10 min。

（12）終止：顯色完畢后立即于每孔加50μl終止液，混勻測(cè)定。

（13）測(cè)定：終止后應(yīng)在10 min內(nèi)完成判讀。對(duì)空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值。或使用雙波長(zhǎng)測(cè)定吸光值，測(cè)定波長(zhǎng)為450 nm，參考波長(zhǎng)可選630 nm或655 nm。

根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié)果與分析

總體檢測(cè)結(jié)果，對(duì)隨機(jī)抽取的40個(gè)規(guī)模場(chǎng)17個(gè)散養(yǎng)戶的1 010份羊血清樣品進(jìn)行O型和亞洲I型抗體檢測(cè)，口蹄疫O型抗體合格數(shù)為785份，平均合格率77.72%；口蹄疫亞洲I型抗體合格數(shù)800份，平均合格率79.21%。也可以看出O型和亞洲I型抗體全部達(dá)到農(nóng)業(yè)部要求，山西省羊的口蹄疫O型和亞洲I型免疫抗體全部合格。

3 討論與分析

（1）該血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，山西省11個(gè)市羊口蹄疫O型和亞洲I型達(dá)到農(nóng)業(yè)部要求，但規(guī)模場(chǎng)優(yōu)于散養(yǎng)戶，散養(yǎng)戶合格率O型為64.29%，亞洲I型為66.67%，處在一個(gè)較低水平，這與各散養(yǎng)戶的衛(wèi)生環(huán)境、管理水平、防疫措施、飼養(yǎng)觀念、疫苗免疫劑量、免疫時(shí)間及疫苗存儲(chǔ)條件等因素有關(guān)。預(yù)防和控制本病任務(wù)仍很艱巨。

（2）羊口蹄疫O型與亞洲I型合格率低的原因主要是這些羊場(chǎng)在日常管理方面存在漏洞；部分散養(yǎng)戶在引進(jìn)種公（母）羊時(shí)未按規(guī)定程序嚴(yán)格檢疫，導(dǎo)致引進(jìn)帶病的種公（母）羊。沒(méi)有及時(shí)進(jìn)行O型與亞洲I型雙價(jià)疫苗補(bǔ)免，部分散養(yǎng)戶消毒工作不到位，存在死角和盲角，個(gè)別散養(yǎng)戶存在人畜、多畜同在一個(gè)院現(xiàn)象。

（3）預(yù)防和控制該病，認(rèn)為預(yù)防口蹄疫的有效辦法是接種疫苗，及時(shí)建立有效的免疫屏障，防止病毒侵入。加大疫苗預(yù)防口蹄疫的宣傳力度，讓散養(yǎng)戶認(rèn)識(shí)到疫苗預(yù)防的重要性。在日常管理中要嚴(yán)格按照國(guó)家規(guī)定的口蹄疫免疫計(jì)劃進(jìn)行免疫。必須做到“鄉(xiāng)不漏村、村不漏戶、戶不漏畜、畜不漏針”。對(duì)免疫不合格的羊要及時(shí)補(bǔ)免。切實(shí)加強(qiáng)流通環(huán)節(jié)的監(jiān)管力度，尤其是產(chǎn)地檢疫和屠宰場(chǎng)的檢疫。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，尤其對(duì)散養(yǎng)戶要求減少混群放牧，經(jīng)常消毒有助于羊群生長(zhǎng)發(fā)育，提高農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收入。

［1］ 阿依古麗.瑪納斯縣六戶地鎮(zhèn)羊口蹄疫疫病的血清調(diào)查.中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2013，29（12）：87～88

［2］ 徐桂平.如何做好牛羊口蹄疫防治工作.中國(guó)動(dòng)物保健，2014.16（7）：36～37

［3］ 迪力拜爾.阿木提.口蹄疫的防控研究進(jìn)展.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2011，47（4）：61～63