孫延芳，張?jiān)葡砂咨绞屑膊☆A(yù)防控制中心，吉林白山　134300

一起由鼠傷寒沙門氏引起食物中毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

孫延芳，張?jiān)葡?br/>白山市疾病預(yù)防控制中心，吉林白山134300

目的 對(duì)食物中毒事件病原菌進(jìn)行檢測(cè)和分析，確定中毒原因。方法 根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查和臨床表現(xiàn)，選擇疑似病原菌，依據(jù)GB4789.4-2010，GB4789/T.5-2012，GB4789.7-2013，GB4789.30-2010，GB/T4789.6-2003對(duì)采集的樣品進(jìn)行病原學(xué)分離和鑒定。結(jié)果 從2份糞便標(biāo)本和1份食物中檢出鼠傷寒沙門氏菌。結(jié)論該次食物中毒為鼠傷寒沙門氏菌污染食物引起。

食物中毒；鼠傷寒沙門氏菌；實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

2016年5月21日晚，白山市疾控中心接到白山市中心醫(yī)院報(bào)告，醫(yī)院接診某一家四口腹瀉患者，疑似食物中毒。接到報(bào)告后白山市疾控中心立即展開流行病學(xué)調(diào)查，樣品采集和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1　流行病學(xué)調(diào)查

2016年5月21日，患者一家中午聚餐，主食是韮菜盒子，菜品有拌黃瓜，醬茄子，尖椒干豆腐和五香咸鴨蛋。晚上5點(diǎn)半相繼出現(xiàn)嘔吐、腹痛、腹瀉等癥狀，6點(diǎn)半入院。臨床癥狀：主要以嘔吐、腹痛、腹瀉為主，重癥者伴有發(fā)熱、頭痛，水樣便?，F(xiàn)場(chǎng)采集剩余食物兩份（吃剩的韮菜盒子和五香咸鴨蛋）、4份患者糞便樣品，立即帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。

2　實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

2.1材料與方法

2.1.1培養(yǎng)基和試劑顯色培養(yǎng)基來自鄭州博賽生物技術(shù)股份有限公司，API20E生化鑒定試劑由法國梅里埃公司提供，沙門氏菌、致病性大腸埃希氏菌診斷血清由泰國進(jìn)口，其他培養(yǎng)基均來自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司，均在有效期內(nèi)使用。

2.1.2方法將4份糞便標(biāo)本和2份剩余食物，按照GB4789.4-2010［1］，GB4789/T.5-2012［2］，GB4789.7-2013［3］，GB4789.30-2010［4］，GB/T4789.6-2003［5］標(biāo)準(zhǔn)中的檢驗(yàn)程序進(jìn)行增菌、分離、生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定。

2.1.3實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控菌株 沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC14028

2.2增菌、分離

將6份樣本（2份剩余食物10倍稀釋液、4份糞便）分別劃線沙門氏顯色，XLD，志賀氏顯色，TCBS，弧菌顯色，李斯特氏菌顯色，PALCAM，O157顯色平板進(jìn)行直接分離，同時(shí)接種BPW，志賀氏增菌肉湯，3%Nacl堿性蛋白胨水，LB1，EC增菌液中，除志賀氏增菌肉湯41.5℃厭氧培養(yǎng)、LB130℃培養(yǎng)外，均36℃培養(yǎng)24 h；24 h培養(yǎng)后，直接分離的平板均無可疑菌落生長(zhǎng)。將BPW接種SC、TTB，志賀氏增菌肉湯劃線志賀氏顯色、XLD，3%Nacl堿性蛋白胨水劃線TCBS、弧顯平板，LB1接種LB2，EC接種O157顯色和MAC平板，除LB230℃培養(yǎng)、TTB42℃培養(yǎng)外，均36℃培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)后志賀氏顯色、TCBS、弧顯平板、O157顯色平板上均無可疑菌落生長(zhǎng)。取MAC平板上粉紅色菌落接種TSI，36℃培養(yǎng)24 h，結(jié)果均為A/ A、產(chǎn)氣+，H2S－，菌株純化培養(yǎng)后與致瀉性大腸埃希氏菌診斷血清均不凝集。LB2接種李顯和PALCAM平板，36℃培養(yǎng)48 h，均無可疑菌落生長(zhǎng)。SC接種沙顯、XLD，TTB接種BS平板，36℃培養(yǎng)24 h。3份樣本（2份糞便、1份五香咸鴨蛋）的XLD上均有無色，中心黑的圓形菌落；沙顯上均有紫色菌落；BS上有棕褐色菌落，挑取可疑菌落接種TSI，36℃培養(yǎng)24 h，結(jié)果均為K/A，產(chǎn)氣+，H2S+。

2.3生化試驗(yàn)

取3株分離菌株的純化培養(yǎng)物，用生理鹽水制成適宜的菌懸液，接種API20E，結(jié)果查編碼99.9%符合沙門氏菌屬。

2.4血清學(xué)鑒定

3株分離菌株的純化培養(yǎng)物均與A-I多價(jià)凝集，與血清O4、O5、O12凝集，與H血清均不凝集，鹽水對(duì)照不凝集。將菌株用0.8%半固體瓊脂平板連續(xù)傳代培養(yǎng)，至第3代時(shí)Hi、H2出現(xiàn)不明顯凝集，至第4代出現(xiàn)明顯凝集，細(xì)菌鞭毛抗原得到恢復(fù)。

3　討論

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果，在病人糞便和剩余食物中檢出同源菌。判定此次事件為一起因食用被鼠傷寒沙門氏菌污染的五香咸鴨蛋而引起的食物中毒事件。沙門氏菌屬是腸桿菌科中常見的一個(gè)重要的病原性菌屬，菌型繁多，廣泛分布于自然界中，是人畜共患的腸道病原菌［6］。鴨蛋的外殼容易被沙門氏菌污染，有時(shí)候細(xì)菌甚至?xí)M(jìn)入鴨蛋內(nèi)部，烹制時(shí)間不夠或運(yùn)輸過程中生熟不分可能是造成本次感染的原因。

①食物中毒病原檢測(cè)時(shí)，首先要了解流行病學(xué)調(diào)查材料，以便確定檢測(cè)方向，縮短檢出時(shí)間，快速報(bào)告，為食品監(jiān)督部門執(zhí)法提供依據(jù)，避免問題食品繼續(xù)流入市場(chǎng)危害群眾健康。

②由于沙門氏菌抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，血清種類繁多，且加工過程中加熱、干燥、高含鹽量、酸和冷凍等因素的作用，以及早期用藥等諸多因素影響，細(xì)菌損傷在所難免。所以現(xiàn)國標(biāo)中用BPW前增菌后用SC、TTB再次增菌非常重要。此次檢測(cè)過程中，病人糞便和可疑食物直接分離XLD、沙顯、BS平板均無沙門氏菌生長(zhǎng)；用SC、TTB增菌再分離的平板，有典型菌落生長(zhǎng)但數(shù)量較少，與雜菌共同生長(zhǎng)；用BPW前增菌，再用SC、TTB增菌再用XLD、沙顯、BS平板分離，整個(gè)平板均為典型菌落，雜菌幾乎不生長(zhǎng)，充分驗(yàn)證了前增菌的重要性。

③檢測(cè)到的沙門氏菌由于未知因素致抗原缺失，按照GB4789.4-2010中方法將菌株接種在0.8%半固體瓊脂平板的中央，24 h后取其邊緣呈蔓延生長(zhǎng)的菌苔進(jìn)行H項(xiàng)凝集，第一代至第二代均不凝集，直至第4代Hi、H2才出現(xiàn)明顯凝集，鞭毛抗原得到恢復(fù)，誘導(dǎo)成功。所以不能單純靠純培養(yǎng)物的H項(xiàng)不凝集，或只誘導(dǎo)一次、兩次就判定H項(xiàng)不凝集。甚至有經(jīng)十七代誘導(dǎo)試驗(yàn)獲得H雙相抗原的報(bào)告［7］。

通過對(duì)該次沙門氏菌食物中毒的檢測(cè)結(jié)果分析得出：除應(yīng)加強(qiáng)早期的流行病學(xué)調(diào)查資料采集和分析以確定檢測(cè)方向外，病原菌的檢測(cè)過程中按新國標(biāo)要求進(jìn)行前增菌、增菌、再分離能提高檢出率。在檢測(cè)過程中一旦發(fā)現(xiàn)可疑病原菌，即使血清或生化不符，也應(yīng)進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)以確定菌型。建議食品安全監(jiān)督部門控制問題食品流入的同時(shí)，要做好宣傳教育工作，購買熟制食品時(shí)要加熱后再食用。

［1］GB4789.4-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn).食品微生物學(xué)檢驗(yàn).沙門氏菌檢驗(yàn)［M］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

［2］GB/T4789.5-2012食品安全國家標(biāo)準(zhǔn).食品微生物學(xué)檢驗(yàn).志賀氏菌檢驗(yàn)［M］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

［3］GB4789.7-2013食品安全國家標(biāo)準(zhǔn).食品微生物學(xué)檢驗(yàn).副溶血性弧菌檢驗(yàn)［M］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013.

［4］GB4789.30-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn).食品微生物學(xué)檢驗(yàn).單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)［M］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

［5］GB/T4789.6-2003食品安全國家標(biāo)準(zhǔn).食品微生物學(xué)檢驗(yàn).致瀉性大腸埃希氏菌檢驗(yàn)［M］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［6］李建棟，陳義忠，楚心唯，等.飲服從業(yè)人員沙門菌耐藥性及質(zhì)粒特征分析［J］.中國公共衛(wèi)生，2005，21（2）：205-206.

［7］傅丹青，孫永祥，丁水軍.營養(yǎng)瓊脂斜面法在沙門菌“H”抗原位相變異中的應(yīng)用［J］.預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇，2009，15（12）：1291-1292.

A Laboratory Test of Food-poisoning Caused by Salmonella Typhimurium

SUN Yan-fang，ZHANG Yuan-xian
Baishan Center for Disease Control and Prevention，Baishan，Jilin Province，134300 China

Objective To determine the poisoning causes by detecting and analyzing the pathogenic bacteria of food poisoning events.Methods The suspected pathogenic bacteria were selected according to the epidemiology survey and clinical manifestations，and the collected samples were given etiological separation and identification according to GB4789.4-2010，GB4789/T.5-2012，GB4789.7-2013，GB4789.30-2010，GB/T4789 6-2003.Results The salmonella typhimurium was detected from 2 pieces of stool samples and 1 piece of food.Conclusion The reason of this food poisoning is that salmonella typhimurium contaminates food.

Food poisoning；Salmonella typhimurium；Laboratory test

R7

A

1672-5654（2016）07（b）-0112-02

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.20.112

孫延芳（1975.3-），女，吉林白山人，本科，主管檢驗(yàn)技師，主要從事微生物學(xué)檢驗(yàn)。

（2016-04-18）