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        豬乙型腦炎疫苗研究新進(jìn)展

        2016-02-01 02:18:37張桂紅喻正軍
        豬業(yè)科學(xué) 2016年5期
        關(guān)鍵詞:乙腦乙型腦炎

        徐 微,張桂紅,喻正軍

        (湖南中岸生物藥業(yè)有限公司,湖南 長沙 410199)

        豬乙型腦炎疫苗研究新進(jìn)展

        徐 微,張桂紅,喻正軍

        (湖南中岸生物藥業(yè)有限公司,湖南長沙410199)

        流行性乙型腦炎簡稱乙腦,是人畜共患急性傳染病。該病可導(dǎo)致豬發(fā)生繁殖障礙性疾病,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大損失。目前,除常用的3種傳統(tǒng)疫苗外,亞單位疫苗等新型疫苗的研究也取得了重大進(jìn)展,在日后的乙腦免疫中,新型疫苗必定會起到更加重要的作用。

        流行性乙型腦炎;傳統(tǒng)疫苗;新型疫苗;免疫反應(yīng)

        流 行 性 乙 型 腦 炎(epidemic encephalitis B)又稱日本乙型腦炎(Japanese encephalitis, JE),是由黃病毒科乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的人畜共患急性傳染病,病毒以蚊蟲為主要傳播媒介,發(fā)病具有季節(jié)性,在蚊蟲滋生的7-9月為發(fā)病高峰期[1]。根據(jù)WHO的數(shù)據(jù)顯示,2014年全球已上報(bào)的乙腦發(fā)病人數(shù)為4 706人,其中我國為858人,該病死亡率高達(dá)30%,另有50%的患者會留下神經(jīng)系統(tǒng)損傷。乙腦也是對養(yǎng)豬業(yè)產(chǎn)生嚴(yán)重危害的重大疫病,可導(dǎo)致豬發(fā)生繁殖障礙性疾病,如妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎,公豬發(fā)生睪丸炎,新生仔豬發(fā)生腦炎,育肥豬持續(xù)高熱[2],給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

        目前尚無治療乙腦的特效方法,主要通過控制蚊蟲傳播和免疫接種來防控,而蚊蟲控制措施在我國有一定的實(shí)施難度,因此疫苗接種成為控制乙腦流行的最有效方法,本文對豬乙型腦炎疫苗的研究現(xiàn)狀綜述如下。

        1 傳統(tǒng)疫苗

        鼠腦純化滅活疫苗、地鼠腎細(xì)胞滅活疫苗和地鼠腎細(xì)胞減毒活疫苗是目前國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的常規(guī)疫苗。鼠腦滅活疫苗主要應(yīng)用于國外,后兩種在國內(nèi)應(yīng)用。

        1.1鼠腦滅活疫苗

        日本于1954年研制出鼠腦滅活疫苗,該疫苗是目前唯一獲得WHO批準(zhǔn)并可商品化的人用乙型腦炎疫苗,該疫苗應(yīng)用在泰國、印度、越南、朝鮮和馬來西亞等乙型腦炎高度流行的國家之后,乙型腦炎的感染率顯著下降。該疫苗接種豬也能產(chǎn)生良好的保護(hù)作用,尤其是對青年妊娠母豬和公豬的安全性好,免疫接種后不會產(chǎn)生病毒血癥、胎內(nèi)感染等不良反應(yīng),對母豬感染豬乙型腦炎后引起的繁殖障礙癥狀保護(hù)率高[3],但該疫苗也存在價(jià)格昂貴,免疫劑量大等缺陷[4]。

        1.2地鼠腎細(xì)胞滅活疫苗

        地鼠腎組織培養(yǎng)的滅活疫苗,目前僅在中國生產(chǎn)和使用。該疫苗毒株源于Beijing-3株,在我國的免疫保護(hù)率可達(dá)85%,但該疫苗在臨床應(yīng)用中常出現(xiàn)一些不良反應(yīng),因此,減毒活疫苗正逐步替代該疫苗。

        1.3地鼠腎細(xì)胞減毒活疫苗

        該疫苗采用減毒株SA14-14-2,具有毒力低、抗原性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),能激發(fā)較強(qiáng)的特異性免疫反應(yīng)。初產(chǎn)母豬接種該疫苗后能抵抗JEV 強(qiáng)毒的攻擊,不產(chǎn)生病毒血癥,對胎兒產(chǎn)生100%的保護(hù),對后備母豬也能產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)作用。2010版《中國獸藥典》已收入該疫苗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。但由于地鼠腎原代細(xì)胞基質(zhì)缺乏WHO的認(rèn)證,使得此種疫苗尚未在國際上使用(韓國除外)。

        2 新型疫苗

        盡管上述幾種傳統(tǒng)疫苗為控制及預(yù)防乙腦貢獻(xiàn)了巨大力量,它們?nèi)杂兄髯缘牟蛔悖又陙?,乙腦病毒的分子生物學(xué)特征研究進(jìn)一步深入,因此開發(fā)乙腦的新型疫苗成為近十幾年乙腦的研究重點(diǎn)。

        2.1亞單位疫苗

        亞單位疫苗是將病原體的抗原基因與表達(dá)載體連接后轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞,在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)具有抗原性的蛋白,經(jīng)抽提純化后制備疫苗,該疫苗只含有病原體的一部分,不會引起動物發(fā)病,安全性較高。

        E蛋白是乙腦主要的抗原蛋白,可誘導(dǎo)動物產(chǎn)生中和抗體,因此一般通過表達(dá)JEV的E基因來制備亞單位疫苗。Xu XG等[5]將JEV的E基因插入桿狀病毒表達(dá)載體構(gòu)建得重組病毒,并利用重組桿狀病毒表達(dá)的E蛋白免疫小鼠和豬,結(jié)果表明可產(chǎn)生中和抗體,保護(hù)其免受JEV的攻擊。

        2.2核酸疫苗

        核酸疫苗又稱DNA疫苗,是將抗原基因轉(zhuǎn)入真核表達(dá)載體,并將重組載體導(dǎo)入動物體內(nèi),在宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)中合成抗原蛋白,從而使宿主的免疫系統(tǒng)識別抗原并誘導(dǎo)產(chǎn)生對該抗原的免疫應(yīng)答。

        Chen等[6]構(gòu)建了包含JEV的E、C、NS1-2A、NS3和NS5基因片段的核酸疫苗,經(jīng)動物免疫試驗(yàn)后證明該疫苗可誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的特異性抗體。Konishi等[7]構(gòu)建了含病毒PrM與E基因的重組質(zhì)粒,免疫動物后同時(shí)刺激產(chǎn)生特異性的CTL細(xì)胞免疫反應(yīng)及體液免疫反應(yīng),并且中和抗體的效價(jià)和維持時(shí)間都高于普通滅活疫苗,說明了核酸疫苗在預(yù)防乙腦感染方面的可行性。

        2.3重組活載體疫苗

        重組活載體嵌合疫苗是通過將外源目的基因連接或替換到活病毒載體中,以基因工程手段改造病原體基因組,從而構(gòu)建表達(dá)多種不同病原體抗原基因的重組病毒。這種技術(shù)是利用一些基因組較大的病毒載體,在其基因組中插入多種其他病毒的抗原基因,使用這種雜交病毒免疫動物可以保護(hù)其免受多種病原體侵害。目前用作“疫苗模式”的病毒載體有黃熱病毒YF17D疫苗株、痘病毒(哥本哈根株(NYVAC)、金絲雀株(ALVAC)和MVA株)。

        賽諾菲巴斯德公司將減毒株(SA14-14-2)的PrM和E基因轉(zhuǎn)入YF17D疫苗株黃熱病毒載體,構(gòu)建得到黃熱-乙腦嵌合病毒。該疫苗經(jīng)三期臨床試驗(yàn)證明,安全性優(yōu)于鼠腦滅活疫苗,一次單劑量接種血清抗體轉(zhuǎn)陽率高達(dá)99.1%[8]。目前該疫苗已經(jīng)在澳大利亞注冊成功[9]。

        Konishi 等[10]以痘病毒ALVAC株為載體,轉(zhuǎn)入乙腦病毒的PrM和E基因,重組病毒免疫小鼠后可以保護(hù)其抵抗致死劑量JEV的攻擊。Konishi 等[11]還將乙腦病毒的PrM和E基因轉(zhuǎn)入痘病毒NYVAC株載體,將重組病毒免疫豬,首免7 d后產(chǎn)生乙腦中和抗體,28 d 加強(qiáng)免疫后,血清中抗體效價(jià)進(jìn)一步升高,可抵抗致死劑量的乙腦病毒攻擊。

        3 結(jié)語

        目前世界衛(wèi)生組織已經(jīng)把乙型腦炎疫苗確定為首要研究和開發(fā)的項(xiàng)目之一,豬乙型腦炎疫苗的研究也成為動物保健領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),但目前用于臨床的仍只有鼠腦滅活疫苗和減毒活疫苗兩種傳統(tǒng)疫苗。相信隨著分子生物學(xué)和生物技術(shù)的發(fā)展,對豬乙型腦炎研究將一步步深入,終將研制出更安全、經(jīng)濟(jì)、有效的乙腦疫苗。

        [1] 彭穎,余開光.流行性乙型腦炎的流行病學(xué)[J].醫(yī)學(xué)綜述,2007,13(2):121-122.

        [2] 殷震,劉景華.動物病毒學(xué)[M].2版.北京:科學(xué)出版社,1997: 631-640.

        [3] 方雨玲, 姜天童, 徐滌平. 乙型腦炎油乳劑滅活疫苗的研制與應(yīng)用綜合報(bào)告[J]. 湖北畜牧獸醫(yī), 1996(1): 1-3.

        [4] NAM J H,WYATT L S,CHAE S L, et al.Protection against lethal Japanese encephalitis virus infection of mice by immunization with the highly attenuated MVA strain of vaccinia virus expressing JEV prM and E genes[J].Vaccine,1999,17(3): 261-268.

        [5] XU X G, WANG Z S, ZHANG Q,et al.Baculovirus surface display of E envelope glycoprotein of Japanese encephalitis virus and its immunogenicity of the displayed proteins in mouse and swine models[J]. Vaccine,2011,29(4):636-643.

        [6] CHEN H W, PAN C H, LIAU M Y,et al.Screening of protective antigens of Japanese encephalitis virus by DNA immunization:a comparative study with conventional viral vaccines[J].J Virol,1999,73(12): 10137-10145.

        [7] K O N I S H I E,Y A M A O K A M,KHIN SANE W,et al.Induction of protective immunityagainst Japanese encephalitis in mice by immunization with a plasmid encoding Japanese encephalitis virus premembrane and envelope genes[J].J Virol,1998,72(6):4925-4930.

        [8] TORRESI J, MC CARTHY K,F(xiàn)EROLDI E, et al. Immunogenicity,safety, and tolerability in adults of a new single - dose, live attenuated vaccine against Japanese encephalitis:randomised controlled Phase 3 trials [J]. Vaccine,2010,28(50): 7993-8000.

        [9] FISCHER M, LINDSEY N, STAPLES J E, et al. Japanese encephalitis vaccines: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practice(ACIP) [J]. MMWR Recomm Rep,2010,59:1-27.

        [10] KONISHI E, PINCUS S, PAOLETTI E, et al. Avipox virus-vectored Japanese encephalitisvirus vaccines:use as vaccine candidates in combination with purified subunit immunogens[J]. Vaccine, 1994(12):633-638.

        [11] KONISHI E, PINCUS S, PAOLETTI E, et al. A highly attenuated host rangerestricted vaccinia virus strain,NYVAC, encoding the pr M, E, and NS1 genes of Japanese encephalitis virus prevents JEV viremia in swine [J]. Virology, 1992(190): 454-458.

        2015-11-24)

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