韋禮斌，謝　寧，玉海玲，嚴(yán)海鳳

(南寧市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科/廣西艾滋病臨床治療中心，廣西南寧 530023)

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白細(xì)胞檢測(cè)的臨床可報(bào)告范圍驗(yàn)證

韋禮斌，謝寧，玉海玲，嚴(yán)海鳳

(南寧市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科/廣西艾滋病臨床治療中心，廣西南寧 530023)

摘要:目的對(duì)sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定白細(xì)胞(WBC)的分析測(cè)量范圍及臨床可報(bào)告范圍進(jìn)行驗(yàn)證。方法參照EP6-A指南的要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和驗(yàn)證。結(jié)果sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定WBC的線性范圍為(0～309.1)×109/L；臨床可報(bào)告范圍為(0～12 364)×109/L。結(jié)論sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定WBC的分析測(cè)量范圍符合廠家聲明的性能，臨床可報(bào)告范圍能滿足臨床工作的需要。

關(guān)鍵詞:白細(xì)胞；分析測(cè)量范圍；臨床可報(bào)告范圍

任何作定量分析的儀器所檢測(cè)的定量分析項(xiàng)目其線性范圍都是要為臨床服務(wù)的，只有結(jié)合臨床實(shí)際才具有實(shí)用價(jià)值[1]。因此筆者參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正案(CLIA)EP6-A指南對(duì)sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定WBC的線性范圍和臨床可報(bào)告范圍進(jìn)行驗(yàn)證[2]，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料高值白細(xì)胞(WBC)標(biāo)本一份。

1.2儀器與試劑sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀及其配套試劑、質(zhì)控物。

1.3方法sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀廠家聲明在允許誤差范圍為±6%時(shí)WBC的線性范圍為(0~310)×109/L(1/2的CLIA,88 規(guī)定的WBC允許誤差范圍為小于±7.5%。),驗(yàn)證其線性范圍和臨床可報(bào)告范圍，在儀器運(yùn)行正常并且完成了每天的常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控的情況下進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。高值WBC的制備：取無(wú)溶血、無(wú)黃疸、無(wú)脂血的當(dāng)天檢測(cè)后的的抗凝血，3 000 r/min離心5 min，棄血漿，收集白膜層移至試管，待收集到的白膜層裝滿試管后再離心10 min，再棄血漿，再次收集濃縮的白膜層，第三次將白膜層移至試管離心5 min，棄血漿后收集的濃縮白膜即形成高值標(biāo)本(H)。如此反復(fù)收集直至足夠量WBC，充分混勻后平行測(cè)定所收集的高值WBC的濃度，再與儀器配套的稀釋液按 0∶500、50∶450、100∶400、200∶300、300∶200、400∶100、500∶0進(jìn)行混合，配制成一系列WBC濃度的待測(cè)標(biāo)本，包含或接近儀器廠家聲明的線性范圍。分別將待測(cè)標(biāo)本平行測(cè)定2次并記錄測(cè)量結(jié)果。在Microsoft Excel2003上以Y軸作為實(shí)測(cè)值，X軸作為預(yù)期值，作直線回歸，同時(shí)獲得兩者的相關(guān)性?；厥諏?shí)驗(yàn)：將高值的WBC標(biāo)本用稀釋液按2、10、20、40、80、160倍稀釋，并將每個(gè)濃度梯度平行測(cè)定2次。計(jì)算出實(shí)測(cè)均值后與預(yù)期值做比較，計(jì)算回收率,回收率=(測(cè)定值/預(yù)期值)×100%?；厥章试?0.0%～110.0%，結(jié)果可接受。

2結(jié)果

系列 WBC濃度(接近廠家聲明的線性)的測(cè)定值與預(yù)期值的結(jié)果見(jiàn)表1。WBC的測(cè)定值與預(yù)期值的散點(diǎn)圖(圖1)顯示散點(diǎn)圖近似一條過(guò)原點(diǎn)的直線，系列WBC濃度的測(cè)定值與預(yù)期值成很好的線性關(guān)系(Y=0.985 3X,R2=0.999 8)，因此由表1、圖1可確認(rèn)sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定WBC的線性范圍為(0～309.1)×109/L。稀釋回收實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果(表2)顯示高值WBC在稀釋倍數(shù)小于和等于40倍時(shí)，回收率均在100.0%～110.0%，因此確定WBC臨床可報(bào)告范圍為(0～12 364)×109/L(309.1×109/L×40=12 364×109/L)。

表1　　系列 WBC濃度的測(cè)定值與預(yù)期值的結(jié)果

圖1　系列WBC濃度(×109/L)的測(cè)定值

稀釋倍數(shù)測(cè)定結(jié)果1(×109/L)測(cè)定結(jié)果2(×109/L)實(shí)測(cè)均值(×109/L)預(yù)期值(×109/L)回收率(%)1∶2157.94160.12159.03154.55102.91∶1032.1131.0131.5630.91102.11∶2016.1515.3315.7415.46101.81∶408.057.457.757.73100.31∶803.583.023.303.8685.51∶1601.681.301.491.9377.2

3討論

美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī) (CLIA)規(guī)定了檢測(cè)系統(tǒng)性能評(píng)估的最基本要求為精密度、準(zhǔn)確度、可報(bào)告范圍和參考區(qū)間[2]。精密度，準(zhǔn)確度的評(píng)估可分別通過(guò)室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)來(lái)實(shí)現(xiàn)，這些工作已經(jīng)成為日常工作的一部分，可報(bào)告范圍和參考區(qū)間的評(píng)估由于各種原因在臨床實(shí)驗(yàn)室中不易操作。筆者通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，WBC檢測(cè)的臨床可報(bào)告范圍的驗(yàn)證不易操作難點(diǎn)主要是高值標(biāo)本的不易獲得，要獲取接近上限范圍高值的混合血高值標(biāo)本(H)的操作的確比較繁瑣；H標(biāo)本系列濃度的稀釋也較繁瑣。我國(guó)頒布的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》明確要求:醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)保證檢測(cè)系統(tǒng)的完整性和有效性。因此為了保證臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)的完整性和有效性，即使再繁瑣也必須實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)4大基本性能的評(píng)估。

線性范圍是指在定量檢測(cè)分析中，由檢測(cè)系統(tǒng)直接測(cè)量未經(jīng)過(guò)任何處理(如稀釋、濃縮或其他預(yù)處理)的分析物得到的可靠結(jié)果范圍，在該范圍內(nèi)，分析物的測(cè)量值與真值呈線性比例關(guān)系。臨床可報(bào)告范圍是指定量檢測(cè)項(xiàng)目向臨床能報(bào)告的檢測(cè)范圍，分析物可作預(yù)處理[3]。

EP6-A指南采用多項(xiàng)式線性回歸分析的方法作為目前分析測(cè)量范圍最好的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。規(guī)定了分析用于驗(yàn)證的材料必須具有該方法的基質(zhì)效應(yīng)，用于驗(yàn)證線性范圍的標(biāo)本類型應(yīng)與臨床測(cè)試的標(biāo)本相似，所有標(biāo)本應(yīng)不含廠家所標(biāo)定的干擾因素，如溶血、黃疸、脂血等。理想的基質(zhì)標(biāo)本類型為患者標(biāo)本，可推薦的稀釋液稀釋患者樣本等。選擇的測(cè)量濃度范圍應(yīng)包含或等于廠家聲明的最低和最高濃度范圍。評(píng)估線性時(shí)至少要求5個(gè)不同濃度水平樣本，每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定2次。然后對(duì)測(cè)量值做線性回歸。

Sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀廠家聲明在允許誤差范圍為±6%時(shí)的線性范圍為(0～310)×109/L。本研究通過(guò)驗(yàn)證后確認(rèn)sysmex XT-2000i全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定WBC在(0～309.1)×109/L之間呈良好的線性關(guān)系，與廠家聲明基本一致。本研究的稀釋回收試驗(yàn)顯示高值標(biāo)本在稀釋倍數(shù)小于和等于40倍時(shí)，回收率均在100.0%～110.0%，并且隨著稀釋倍數(shù)的增大，回收率逐漸下降，當(dāng)稀釋倍數(shù)為80倍時(shí)，回收率85.5%，低于90%，結(jié)果為不可靠了，因此對(duì)于超過(guò)儀器測(cè)定WBC線性范圍的標(biāo)本，可用儀器自帶的稀釋液做稀釋再測(cè)量，然后乘上稀釋倍數(shù)(最大稀釋倍數(shù)不要超過(guò)40倍)所獲得的值完全符合WBC臨床可報(bào)告范圍。

隨著現(xiàn)代科技和全自動(dòng)血細(xì)胞制造技術(shù)的發(fā)展,現(xiàn)代的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)WBC的線性范圍越來(lái)越寬,因此WBC線性范圍驗(yàn)證對(duì)高值標(biāo)本的要求高。在驗(yàn)證過(guò)程中高值標(biāo)本做不到隨處可得，作者通過(guò)查閱資料和自行摸索，參考了楊有業(yè)等[4]推薦的用試驗(yàn)后混合標(biāo)本制備高值WBC標(biāo)本和稀釋高值WBC標(biāo)本的方法,使得驗(yàn)證得以順利進(jìn)行。本方法改良之處在于稀釋液用儀器自配的稀釋液,以盡量保證分析用于驗(yàn)證的材料必須具有適合該方法的基質(zhì)效應(yīng),最大限度地避免基質(zhì)效應(yīng)等影響[5-6]；此外本法縮短了離心時(shí)間,加快了離心速度同樣也制備出了合乎要求驗(yàn)證的高值WBC標(biāo)本,節(jié)約了時(shí)間,簡(jiǎn)化了工序,是制備合乎驗(yàn)證要求的高值WBC標(biāo)本可推薦的改良方法。

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·臨床研究·

收稿日期：(2015-09-25)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.051A

文章編號(hào)：1673-4130(2015)24-3625-02