王　玲，孟高樂，鞠春影，李建路，張桂春，陳麗娜

(1.遼寧省沈陽市興城療養(yǎng)院檢驗科，遼寧沈陽 125105；2.吉林省武警總隊醫(yī)院檢驗科,吉林長春 130052；

3.解放軍第313醫(yī)院檢驗科,遼寧葫蘆島 125000；4.中國人民解放軍93062部隊44分隊,吉林長春 132101；

5.寧波美康生物科技股份有限公司,浙江寧波 315104)

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常規(guī)肝功酶法項目在POCT分析儀上的抗干擾性能初步評價

王玲1，孟高樂2，鞠春影3，李建路4，張桂春5，陳麗娜5

(1.遼寧省沈陽市興城療養(yǎng)院檢驗科，遼寧沈陽 125105；2.吉林省武警總隊醫(yī)院檢驗科,吉林長春 130052；

3.解放軍第313醫(yī)院檢驗科,遼寧葫蘆島 125000；4.中國人民解放軍93062部隊44分隊,吉林長春 132101；

5.寧波美康生物科技股份有限公司,浙江寧波 315104)

摘要:目的對天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)在POCT分析儀上的抗干擾性能進行初步評價。方法根據(jù)CLSI EP7-A2文件，對AST、ALT 和GGT進行干擾評價試驗。結(jié)果配對差異試驗結(jié)果顯示：342 μmol/L 結(jié)合膽紅素(CB)、342 μmol/L 非結(jié)合膽紅素(FB)、0.03 g/L 抗壞血酸(Vc)、2 g/L血紅蛋白(Hb)、1450 濁度乳糜對AST、ALT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對高濃度GGT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對低濃度GGT測定無干擾；Hb 為2 g/L時對低濃度GGT測定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36；進一步的劑量效應試驗顯示，Hb對低濃度的GGT檢測會產(chǎn)生一定的線性干擾效應。結(jié)論POCT分析儀上的AST、ALT、GGT試劑具有較強的抗干擾能力，能夠滿足臨床應用。

關鍵詞:天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶；抗干擾

基于微流控芯片技術(shù)的即時檢驗技術(shù)(POCT)已成為當前檢驗醫(yī)學發(fā)展的潮流和熱點，主要特點是快速得出結(jié)果，操作簡便，容易使用和小型化。隨著診斷和輔助技術(shù)的進步，以及人們對疾病的認識及治療水平提高的要求，POCT逐漸受到關注[1]。微流控芯片技術(shù)是21世紀最為重要的前沿技術(shù)之一，它把生物、化學、醫(yī)學分析過程中的樣品制備、反應、分離、檢測等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上[2]，自動完成分析全過程。將微流控芯片技術(shù)引入到POCT設備，開創(chuàng)了POCT發(fā)展的新局面。結(jié)合微流控芯片技術(shù)的POCT分析儀兼具高準確度、低需血量、操作簡單、檢測試劑用量少、成本低等優(yōu)點，非常適用于中國這樣具有龐大基層醫(yī)療系統(tǒng)且試劑使用量極大的國家。因此建立操作簡易、價格低廉、實時報告的POCT分析系統(tǒng)對發(fā)揮廣大基層醫(yī)院在疾病預防及診療中的作用有重要的意義。

本研究是對寧波美康保生生物醫(yī)學工程有限公司所研發(fā)的POCT分析儀及配套的試劑盤片套餐中的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)項目的抗干擾性能進行評價，確定是否適合臨床推廣使用。

1材料與方法

1.1材料天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)凍干粉末。

1.2儀器與試劑

1.2.1POCT分析儀及試劑寧波美康保生生物醫(yī)學工程有限公司的POCT分析儀及其配套的試劑盤片，其中試劑盤片含有AST、ALT、GGT項目的檢測試劑，試劑以凍干粉末的形式存在，且每一個試劑盤片僅供單人單次使用。

1.2.2POCT分析儀操作將試劑盤放置于POCT分析儀試劑盤倉內(nèi)，用移液槍將170 μL的樣品通過盤片上的樣本孔注入試劑盤片，蓋上儀器的上蓋，執(zhí)行檢測程序以完成檢測，一次測試同時得到AST、ALT、GGT的結(jié)果。

1.2.3干擾物質(zhì)干擾物質(zhì)FB、CB均購于百靈威科技有限公司，Vc、Hb和乳糜分別購于上海生工生物工程有限公司、上海瑞齊生物科技有限公司和華瑞制藥有限公司。

1.2.3.1基礎樣本準備參考EP7-A2文件推薦的分析物水平，每個分析物選擇兩個濃度[3]。AST、ALT低值72～88 U/L，高值360～440 U/L，GGT低值90～100 U/L，高值450～550 U/L的新鮮血清(無溶血、黃疸和脂血)作為基礎樣本。

1.2.3.2干擾物貯存液準備在弱光下，用0.1 mol/L NaOH配制6.84 mmol/L FB、用蒸餾水配制6.84 mmol/L CB溶液，并分裝于棕色試劑瓶中，避免在自然光下長期暴露； 用冰水配制0.6 g/L 的Vc儲存液，配制過程中最大限度避免接觸空氣，兩個小時之內(nèi)所有測試應完成；用蒸餾水分別配制40 g/L 的Hb溶液，29000濁度的乳糜樣本[3]。

1.3方法

1.3.1配對差異試驗

1.3.1.1干擾血清的配制用基礎樣本按照1∶20比例稀釋5種干擾物的貯存液和空白液分別作為測試樣本和對照樣本，稀釋后測試樣本中干擾物質(zhì)FB、CB、Vc、Hb和乳糜的濃度分別是342 μmol/L、342 μmol/L、0.03 g/L、2 g/L和1450濁度。

1.3.1.2重復次數(shù)的確定計算最大允許干擾值(dmax)/批內(nèi)標準差(s)比值(dmax/s)，查dmax/s與重測次數(shù)對應表(見表1)，得出高低2個濃度水平重復測定次數(shù)。其中s由基礎樣本重復測定20次計算得到；dmax為各項目臨床意義差別標準，根據(jù)AST、ALT和GGT的臨床意義差別標準均定為10%[3]。根據(jù)EP7-A2文件要求以交互順序進行測定并進行干擾效應分析。

表1　　95%的置信限和檢驗效能檢測不同的干擾

1.3.2干擾劑量效應試驗參考EP7-A2文件，以高濃度樣本和低濃度樣本按比例混合成5個系列濃度樣本，按照升序-降序-升序順序重復測定3次。根據(jù)EP7-A2文件進行劑量效應分析。

2結(jié)果

2.1配對差異試驗AST低濃度基礎樣本測定均值為75.5 U/L，高濃度基礎樣本測定均值為365.2 U/L；ALT低濃度基礎樣本測定均值為84.1 U/L，高濃度基礎樣本測定均值為434.8 U/L； GGT低濃度基礎樣本測定均值為104.0 U/L，高濃度基礎樣本測定均值為464.8 U/L。計算可得，AST低濃度基礎樣本dmax為7.55，dmax/s為4.91；高濃度基礎樣本dmax為36.51，dmax/s為12.56；ALT低濃度基礎樣本dmax為8.41，dmax/s為4.62；高濃度基礎樣本dmax為42.48，dmax/s為15.02；GGT低濃度基礎樣本dmax為10.40，dmax/s為4.98；高濃度基礎樣本dmax為46.48，dmax/s為10.00。查對應表可知，AST、ALT和GGT高、低濃度水平的重測次數(shù)均為3次。

342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L 抗壞血酸(Vc)、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對AST、ALT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對高濃度GGT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對低濃度GGT測定無干擾；Hb為2 g/L時對低濃度GGT測定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36。結(jié)果見表2～7。

表2　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對低濃度 AST 測定的干擾

表3　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對高濃度 AST 測定的干擾

表4　　FB、CB、Vc、Hb和乳糜對低濃度 ALT 測定的干擾

表5　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對高濃度 ALT 測定的干擾

表6　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對低濃度 GGT 測定的干擾

表7　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對高濃度 GGT 測定的干擾

2.2劑量效應試驗結(jié)果顯示，Hb對高濃度GGT測定可產(chǎn)生線性干擾，干擾效應結(jié)果見表8，其線性方程式為Y=10.133X+101.667，R2=0.961，見表8、圖1。

表8　　Hb對高濃度GGT檢測的干擾劑量效應結(jié)果

-：無數(shù)據(jù)。

圖1　　Hb對低濃度GGT干擾的劑量效應圖

3討論

POCT是一項新興的技術(shù)領域，主要特點是能快速得出結(jié)果，操作簡便，容易使用和小型化。隨著診斷和輔助技術(shù)的進步以及人們對疾病的認識及治療水平要求的提高，POCT逐漸受到關注。近年來，隨著微流控芯片加工技術(shù)的迅速發(fā)展和微流控分析方法研究的不斷深入，微全分析系統(tǒng)已將醫(yī)療檢測試驗室的部分功能轉(zhuǎn)移到便攜式的POCT檢測設備中，基于微流控芯片技術(shù)的POCT技術(shù)可將血球血清分離、血清稀釋、測定等步驟通過芯片自動化作業(yè)完成，可達到多種標記同步檢測的目的，實現(xiàn)了少量樣品即可分析、操作簡便、無交叉污染、可自動化作業(yè)的目標，開創(chuàng)了POCT發(fā)展的新局面[1,4]。

本試驗根據(jù)文件[5-7]，對POCT分析儀配套的試劑盤片套餐中的AST、ALT、GGT項目進行抗干擾試驗，從影響AST、ALT、GGT檢測的樣本中常見的干擾物質(zhì)考慮，選擇342 μmol/L FB、342 μmol/L CB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb和1450濁度的乳糜為干擾物測試濃度，配對差異試驗結(jié)果顯示：342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對AST、ALT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對高濃度GGT測定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對低濃度GGT測定無干擾；Hb 為2 g/L時對低濃度GGT測定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36。進一步的劑量效應試驗顯示，Hb對低濃度的GGT檢測會產(chǎn)生一定的線性干擾效應。

另外，試驗顯示，干擾物質(zhì)乳糜對檢測結(jié)果均沒有影響，這方面還需要進一步商榷。本試驗的POCT分析儀是利用離心力結(jié)合微流控技術(shù)進行檢測分析的，結(jié)合觀察測試后的試劑盤，乳糜樣本均被離心力除去。另外一方面，臨床脂血樣本，猜測也會通過同樣的離心方式被除去部分，不過需要進一步的試驗進行驗證。

Hb在GGT反應波長下有一定程度的吸光度增高[8]，而本試驗結(jié)果顯示Hb對低濃度的GGT檢測會產(chǎn)生一定的線性干擾效應。結(jié)合POCT本身所具有的個性化特點，后期在儀器設計中進行優(yōu)化，即對樣本進行初步篩查，溶血程度嚴重的樣本被判定為不合格樣本，需重新取樣。

綜上所述，POCT分析儀上的AST、ALT、GGT試劑具有較強的抗干擾能力，再結(jié)合POCT儀器的個性化特點，能夠滿足臨床應用。

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·臨床研究·

收稿日期：(2015-07-28)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.045A

文章編號：1673-4130(2015)24-3615-03