鄭愛(ài)麗楊質(zhì)超

(1.云南省水富縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站,云南水富 657800; 2.云南省水富縣兩碗鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心,云南水富 657803)

豬圓環(huán)病毒病的血清學(xué)調(diào)查

鄭愛(ài)麗1楊質(zhì)超2

(1.云南省水富縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站,云南水富 657800; 2.云南省水富縣兩碗鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心,云南水富 657803)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是調(diào)查和了解豬病毒感染的基本方法措施，為了解2013年～2016年水富縣轄區(qū)內(nèi)豬圓環(huán)病毒病的感染情況，對(duì)全縣進(jìn)行了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果：2013、2014、2015、2016年感染率為80%、 65.2%、50%、51.2%，本文詳細(xì)介紹了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)豬圓環(huán)病毒的血清學(xué)調(diào)查試驗(yàn)操作方法、結(jié)果的判定，提出了如何提高水富縣對(duì)豬圓環(huán)病毒病的防控方法以及措施。

水富縣 豬圓環(huán)病毒 血清學(xué)調(diào)查

豬圓環(huán)病毒病是豬圓病毒（圓環(huán)病毒科）引起的一種新型傳染病，病毒抵抗力較強(qiáng)，不易被滅活，可長(zhǎng)時(shí)間存活，該病毒分為PCV-1和PCV-2兩型，PCV-1型無(wú)致病性，該病主要由PCV-2型引起，病主要感染8～13周齡豬，臨床診斷為體質(zhì)下降，消瘦、皮發(fā)白，腹瀉，呼吸困難，有的豬有黃膽。但不會(huì)引起免疫抑制性，降低飼料轉(zhuǎn)化率，從而影響?zhàn)B豬經(jīng)濟(jì)效益。

水富縣是云南的北大門，與四川交界，交通發(fā)達(dá)，畜禽流動(dòng)性較大，豬圓環(huán)病毒防控工作難度較大。只有真實(shí)了解水富縣這幾年的豬圓環(huán)病毒的感染情況，提出合理的防控建議，才能更好地做好豬圓環(huán)病毒的防控工作，從根本上消滅豬圓環(huán)病毒的發(fā)生。

1 材料和方法

1.1 被檢血清

分別于2013年至2016年采自云富街道辦、向家壩鎮(zhèn)、太平鎮(zhèn)、兩碗鎮(zhèn)和3個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)（站）及散養(yǎng)戶100戶的豬血清332份進(jìn)行了檢測(cè)。

1.2 豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)試劑盒

由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院動(dòng)物病毒室研制，武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供。

1.3 檢測(cè)儀器

檢測(cè)儀器為酶標(biāo)儀，單道、多道移液器等。

1.4 檢測(cè)方法

豬圓環(huán)病毒病試驗(yàn)操作步驟及判定標(biāo)準(zhǔn)，按照診斷試劑盒內(nèi)說(shuō)明書對(duì)被檢血清進(jìn)行檢測(cè)，并記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.5 操作步驟

（1）實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

A.將試劑恢復(fù)到室溫，避免強(qiáng)光直射；

B.將洗滌液作20倍稀釋；

C.取出樣品稀釋板，A1、B1兩孔作為陰性對(duì)照孔，C1、D1作為陽(yáng)性對(duì)照孔，在稀釋板的檢3孔加入195 μl樣品稀釋液后加入5 μl待檢血清，將血清做40倍稀釋，在對(duì)照孔加入180 μl樣品稀釋液后加入60 μl對(duì)照血清，將對(duì)照血清做4倍稀釋；

（2）取出抗原包被板，每孔加入稀釋好的洗滌液200 μl，靜置3min倒掉液體，并拍干，共計(jì)洗滌2次；

（3）向板中加入100 μl以上相對(duì)應(yīng)的已稀釋血清（陰性和陽(yáng)性對(duì)照各兩孔）輕輕振勻孔中樣品（注意不要溢出孔外），封膜，放入濕盒中置37℃溫育30min；

（4）倒掉板孔中溶液，用洗滌液洗板5次，200μl/孔，每次靜置3min倒掉，每次在干凈吸水紙上拍干，然后每孔加酶標(biāo)二抗（抗豬IgG-HRP結(jié)合物）100μl，封膜，將板放入濕盒中，置37℃ 溫育30min。

（5）倒掉板孔中溶液，用洗滌液洗板5次，200μl/孔，每次靜置3min倒掉，每次在干凈吸水紙上拍干.每孔加底物A液、B液各1滴（約50ul），混均，室溫避光顯色10分鐘；每孔加終止液1滴（約50ul），并在10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

2 結(jié)果判定

用空白孔調(diào)零，在酶標(biāo)儀上檢測(cè)各孔OD630值。在在陽(yáng)性孔OD630值≥1.0，陰性對(duì)照孔平均OD630值必須＜0.2的前提下，樣品孔OD630值＜0.38則判為陰性，待檢孔OD630值〉0.42判定為陽(yáng)性；樣品孔OD630值在0.38到0.42之間判為可疑；具體檢測(cè)結(jié)果表見(jiàn)附表1。

3 討論與建議

（1）通過(guò)ELISA檢測(cè)豬血清中抗圓環(huán)病毒QRF2蛋白的抗體，由于目前尚無(wú)豬圓環(huán)病毒病疫苗，所以對(duì)水富縣近四年來(lái)對(duì)豬圓環(huán)病毒病的檢測(cè)結(jié)果看。豬圓環(huán)病毒病平均陽(yáng)性率達(dá)48.49%；說(shuō)明該病在水富縣范圍內(nèi)有不同程度的感染。

（2）豬圓環(huán)病毒病在水富縣不同年齡的豬、規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)豬都有不同程度的感染；受感染的主要原因：一是水富縣位于云南北大門，交通四通八達(dá)，近年來(lái)由于“兩站兩路”等大型工程的建設(shè)，人流量增加，對(duì)畜禽需求量增加，市場(chǎng)流通快，再加上引種和外調(diào)商品豬未經(jīng)嚴(yán)格檢疫，對(duì)該地區(qū)的豬只疫病沒(méi)有進(jìn)行認(rèn)真詳細(xì)了解而帶入病源；其次是近年來(lái)養(yǎng)豬效益高，市場(chǎng)流通快很多農(nóng)戶從市場(chǎng)上購(gòu)回仔豬飼養(yǎng)育肥，上市豬又未經(jīng)嚴(yán)格檢疫而帶入病源。據(jù)進(jìn)一步調(diào)查分析該病在水富縣并未顯臨床癥狀；檢出陽(yáng)性豬成為隱性帶毒豬。

4 防治措施

（1）為有效控制豬圓環(huán)病毒病的發(fā)生，種豬場(chǎng)和各供精網(wǎng)點(diǎn)應(yīng)建立嚴(yán)格的定期的檢驗(yàn)、消毒制度，淘汰（屠宰）病畜和抗體檢測(cè)陽(yáng)性牲畜，盡快培養(yǎng)健康豬群。

（2）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，及時(shí)清理糞便，消滅蚊蠅，并定期進(jìn)行徹底消毒。

（3）有針對(duì)性地通過(guò)飼料或飲水添加藥物進(jìn)行預(yù)防，增強(qiáng)豬只抗病力。

（4）目前尚無(wú)特效的預(yù)防及治療藥物，應(yīng)早發(fā)現(xiàn)、早確診早治療。

（5）定期監(jiān)測(cè)，及時(shí)淘汰陽(yáng)性豬，對(duì)不合格種豬不得向外供種。