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        重慶渝東部分地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)調(diào)查與藥敏試驗(yàn)

        2016-01-30 23:38:24芳譚
        中國畜牧獸醫(yī)文摘 2016年7期
        關(guān)鍵詞:嗜血區(qū)縣豬場(chǎng)

        袁 芳譚 波

        (1.重慶市潼南區(qū)小渡鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,重慶 402681;2.重慶市潼南區(qū)經(jīng)形鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,重慶 402672)

        重慶渝東部分地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)調(diào)查與藥敏試驗(yàn)

        袁 芳1譚 波2

        (1.重慶市潼南區(qū)小渡鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,重慶402681;2.重慶市潼南區(qū)經(jīng)形鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,重慶402672)

        1 材料與方法

        1.1主要藥品和試劑

        副豬嗜血桿菌正向間接血凝試劑盒,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所產(chǎn)品;胰蛋白大豆培養(yǎng)基、嗜血桿菌屬培養(yǎng)用 V 因子試劑盒、微量生化發(fā)酵管、藥敏試紙盒,均為杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品。

        1.2調(diào)查區(qū)域和待檢樣本

        重慶市渝東地區(qū)云陽縣、梁平縣、萬州區(qū)3個(gè)區(qū)縣存欄30~200頭左右母豬的規(guī)模豬場(chǎng) 30~70 日齡仔豬。采用前腔靜脈采血方法收集血液樣本。分離病料來自疑似病仔豬跗關(guān)節(jié)液。

        1.3試驗(yàn)動(dòng)物

        購自重慶市種豬場(chǎng)榮昌縣石河麒豪分場(chǎng)健康正常的 6 頭體重12 kg/頭左右榮昌小公豬。

        1.4臨床調(diào)查

        采取描述流行病學(xué)調(diào)查法對(duì) 16個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌免疫、感染及防控措施等進(jìn)行臨床調(diào)查;編號(hào),登記,備用。同時(shí),按 5個(gè)/區(qū)縣規(guī)模豬場(chǎng)對(duì)被調(diào)查的 3 個(gè)區(qū)縣共 15 個(gè)30~200 頭母豬的規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行電話采訪,編號(hào)并記錄調(diào)查結(jié)果,備用。

        1.5渝東地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)檢測(cè)

        1.5.1血液樣本采集和制備 按 3~6 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)/區(qū)縣、10~25個(gè)血樣/規(guī)模豬場(chǎng)、3~5 mL/頭仔豬對(duì)被采樣豬場(chǎng)的 30~70 日齡保育仔豬前腔靜脈采血,編號(hào),靜置 15~30 min,4 ℃靜置傾斜過夜。取上層液體 5 000 r/min 離心 15 min,取上清液,編號(hào)4 ℃保存,備用。

        1.5.2血清樣本的副豬嗜血桿菌血清學(xué)檢測(cè) 采用副豬嗜血桿菌正向間接血凝試驗(yàn)診斷試劑盒。具體操作及判定標(biāo)準(zhǔn)參照魏光河等的報(bào)道。

        1.6疑似菌株的分離和藥敏試驗(yàn)

        1.6.1培養(yǎng)基的制備 參照莎莎等制備胰蛋白大豆瓊脂(TSA)、胰蛋白大豆肉湯、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基,37 ℃培養(yǎng)24 h,無菌檢驗(yàn)并4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.6.2疑似菌株的分離鑒定 參照魏光河、莎莎等對(duì)副豬嗜血桿菌正向血凝試驗(yàn)呈強(qiáng)陽性及陽性豬只的關(guān)節(jié)液樣品從顯微形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、生化反應(yīng)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)等作實(shí)驗(yàn)室副豬嗜血桿菌分離鑒定。統(tǒng)計(jì)并記錄分離菌株數(shù)量,命名及編號(hào),備用。

        1.6.3分離菌株藥敏試驗(yàn) 參照魏光河對(duì)疑似菌株作紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn),重復(fù)1次,取其平均值作為試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參考杭州天和微生物試劑有限公司《藥敏實(shí)驗(yàn)紙片法的抑菌范圍解釋標(biāo)準(zhǔn)》推薦的紙片擴(kuò)散標(biāo)準(zhǔn)。

        1.7渝東地區(qū)三區(qū)縣及各規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌陽性率差異分析

        采用 SPSS17.0.1 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)3 區(qū)縣副豬嗜血桿菌感染率作單因子方差分析,判定標(biāo)準(zhǔn):P>0.05,差異不顯著;P<0.05,判定為差異顯著;P<0.01,差異極顯著。

        2 結(jié)果

        (1)重慶渝東地區(qū)副豬嗜血桿菌病的臨床調(diào)查調(diào)查可知,三區(qū)縣養(yǎng)豬業(yè)集約化程度、養(yǎng)殖水平總體均偏低;青霉素類、四環(huán)素類、氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類藥品及中草藥提取物注射液為該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)使用頻率較高的藥品。

        (2)渝東地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌血清學(xué)調(diào)查結(jié)果 3 個(gè)區(qū)縣 16 個(gè)規(guī)?;i場(chǎng)共制備 312份待檢血清樣本,副豬嗜血桿菌陽性及強(qiáng)陽性血清樣本60份,陽性率19.23%,規(guī)模豬場(chǎng)平均陽性率為1.2%。單因素方差分析可知,云陽縣、梁平縣、萬州區(qū)3區(qū)縣間及3區(qū)縣內(nèi)各規(guī)模豬場(chǎng)間副豬嗜血桿菌血清學(xué)陽性率差異不顯著,P=0.08>0.05。

        (3)疑似副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥敏比較表1 重慶渝東地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌臨床調(diào)查結(jié)果(單位:個(gè))調(diào)查指標(biāo)實(shí)地調(diào)查數(shù)量 個(gè)數(shù) 百分率 / % 電話采訪數(shù)量 個(gè)數(shù) 百分率 / % 被調(diào)查豬場(chǎng)總數(shù) 總百分率 / %規(guī)模≥100頭母豬。

        3 討論

        (1)整個(gè)被調(diào)查地區(qū)副豬嗜血桿菌陽性率平均為19.2%,初步說明該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的感染總體偏低,這和該地區(qū)養(yǎng)豬水平較低下,還處于傳統(tǒng)養(yǎng)殖的散養(yǎng)至初步集約化發(fā)展的過渡階段,各種豬只的貿(mào)易相對(duì)較滯后,外源性疾病尤其以圓環(huán)病毒感染、豬繁殖與呼吸綜合征等免疫抑制性疾病相對(duì)較少有關(guān)。本文80.6%的自繁自養(yǎng)及種豬大部分購自本地區(qū)的臨床調(diào)查結(jié)果印證了該地區(qū)養(yǎng)豬水平較低。3區(qū)縣各規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌陽性率差異不顯著P>0.05,與3區(qū)縣75%的被調(diào)查豬場(chǎng)均為非標(biāo)準(zhǔn)化豬舍及粗放式養(yǎng)殖直接關(guān)。

        (2)4份副豬嗜血桿菌血清學(xué)陽性關(guān)節(jié)液共分離鑒定出 3 株疑似副豬嗜血桿菌,75%的一致性證實(shí)了副豬嗜血桿菌正向血凝診斷試劑盒的靈敏和準(zhǔn)確性。由于跗關(guān)節(jié)液的采集相對(duì)不易操作及應(yīng)激較大,豬場(chǎng)負(fù)責(zé)人不配合采集工作是本次關(guān)節(jié)液樣本數(shù)相對(duì)較少的直接原因,沒能較全面反應(yīng)和了解渝東3區(qū)縣副豬嗜血桿菌的實(shí)驗(yàn)室診斷感染率為本次研究的不足。

        (3)藥物使用頻率直接影響規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌耐藥程度。3株疑似副豬嗜血桿菌分離菌株對(duì)第3代頭孢類藥物高度敏感;對(duì)四環(huán)素類、喹諾酮類及青霉素類明顯耐藥,這與本文臨床調(diào)查獲知四環(huán)素類、喹諾酮類及青霉類為該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)高頻率使用藥品結(jié)果一致。該3株分離菌株與魏光河分離的重慶渝西株、徐成剛分離的廣東株藥敏譜各異,這與副豬嗜血桿菌血清型多、易耐藥等病原特點(diǎn)有關(guān)。

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