袁 芳譚 波

（1.重慶市潼南區(qū)小渡鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶　402681；2.重慶市潼南區(qū)經(jīng)形鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶　402672）

重慶渝東部分地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)調(diào)查與藥敏試驗(yàn)

袁 芳1譚 波2

（1.重慶市潼南區(qū)小渡鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶402681；2.重慶市潼南區(qū)經(jīng)形鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶402672）

1　材料與方法

1.1主要藥品和試劑

副豬嗜血桿菌正向間接血凝試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所產(chǎn)品；胰蛋白大豆培養(yǎng)基、嗜血桿菌屬培養(yǎng)用 V 因子試劑盒、微量生化發(fā)酵管、藥敏試紙盒，均為杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品。

1.2調(diào)查區(qū)域和待檢樣本

重慶市渝東地區(qū)云陽縣、梁平縣、萬州區(qū)3個(gè)區(qū)縣存欄30～200頭左右母豬的規(guī)模豬場(chǎng) 30～70 日齡仔豬。采用前腔靜脈采血方法收集血液樣本。分離病料來自疑似病仔豬跗關(guān)節(jié)液。

1.3試驗(yàn)動(dòng)物

購自重慶市種豬場(chǎng)榮昌縣石河麒豪分場(chǎng)健康正常的 6 頭體重12 kg/頭左右榮昌小公豬。

1.4臨床調(diào)查

采取描述流行病學(xué)調(diào)查法對(duì) 16個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌免疫、感染及防控措施等進(jìn)行臨床調(diào)查；編號(hào)，登記，備用。同時(shí)，按 5個(gè)/區(qū)縣規(guī)模豬場(chǎng)對(duì)被調(diào)查的 3 個(gè)區(qū)縣共 15 個(gè)30～200 頭母豬的規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行電話采訪，編號(hào)并記錄調(diào)查結(jié)果，備用。

1.5渝東地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)檢測(cè)

1.5.1血液樣本采集和制備 按 3～6 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)/區(qū)縣、10～25個(gè)血樣/規(guī)模豬場(chǎng)、3～5 mL/頭仔豬對(duì)被采樣豬場(chǎng)的 30～70 日齡保育仔豬前腔靜脈采血，編號(hào)，靜置 15～30 min，4 ℃靜置傾斜過夜。取上層液體 5 000 r/min 離心 15 min，取上清液，編號(hào)4 ℃保存，備用。

1.5.2血清樣本的副豬嗜血桿菌血清學(xué)檢測(cè) 采用副豬嗜血桿菌正向間接血凝試驗(yàn)診斷試劑盒。具體操作及判定標(biāo)準(zhǔn)參照魏光河等的報(bào)道。

1.6疑似菌株的分離和藥敏試驗(yàn)

1.6.1培養(yǎng)基的制備 參照莎莎等制備胰蛋白大豆瓊脂（TSA）、胰蛋白大豆肉湯、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，無菌檢驗(yàn)并4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6.2疑似菌株的分離鑒定 參照魏光河、莎莎等對(duì)副豬嗜血桿菌正向血凝試驗(yàn)呈強(qiáng)陽性及陽性豬只的關(guān)節(jié)液樣品從顯微形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、生化反應(yīng)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)等作實(shí)驗(yàn)室副豬嗜血桿菌分離鑒定。統(tǒng)計(jì)并記錄分離菌株數(shù)量，命名及編號(hào)，備用。

1.6.3分離菌株藥敏試驗(yàn) 參照魏光河對(duì)疑似菌株作紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)，重復(fù)1次，取其平均值作為試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參考杭州天和微生物試劑有限公司《藥敏實(shí)驗(yàn)紙片法的抑菌范圍解釋標(biāo)準(zhǔn)》推薦的紙片擴(kuò)散標(biāo)準(zhǔn)。

1.7渝東地區(qū)三區(qū)縣及各規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌陽性率差異分析

采用 SPSS17.0.1 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)3 區(qū)縣副豬嗜血桿菌感染率作單因子方差分析，判定標(biāo)準(zhǔn)：P＞0.05，差異不顯著；P＜0.05，判定為差異顯著；P＜0.01，差異極顯著。

2　結(jié)果

（1）重慶渝東地區(qū)副豬嗜血桿菌病的臨床調(diào)查調(diào)查可知，三區(qū)縣養(yǎng)豬業(yè)集約化程度、養(yǎng)殖水平總體均偏低；青霉素類、四環(huán)素類、氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類藥品及中草藥提取物注射液為該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)使用頻率較高的藥品。

（2）渝東地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌血清學(xué)調(diào)查結(jié)果 3 個(gè)區(qū)縣 16 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)共制備 312份待檢血清樣本，副豬嗜血桿菌陽性及強(qiáng)陽性血清樣本60份，陽性率19.23%，規(guī)模豬場(chǎng)平均陽性率為1.2%。單因素方差分析可知，云陽縣、梁平縣、萬州區(qū)3區(qū)縣間及3區(qū)縣內(nèi)各規(guī)模豬場(chǎng)間副豬嗜血桿菌血清學(xué)陽性率差異不顯著，P=0.08＞0.05。

（3）疑似副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥敏比較表1 重慶渝東地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌臨床調(diào)查結(jié)果（單位：個(gè)）調(diào)查指標(biāo)實(shí)地調(diào)查數(shù)量 個(gè)數(shù) 百分率 / % 電話采訪數(shù)量 個(gè)數(shù) 百分率 / % 被調(diào)查豬場(chǎng)總數(shù) 總百分率 / %規(guī)模≥100頭母豬。

3　討論

（1）整個(gè)被調(diào)查地區(qū)副豬嗜血桿菌陽性率平均為19.2%，初步說明該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的感染總體偏低，這和該地區(qū)養(yǎng)豬水平較低下，還處于傳統(tǒng)養(yǎng)殖的散養(yǎng)至初步集約化發(fā)展的過渡階段，各種豬只的貿(mào)易相對(duì)較滯后，外源性疾病尤其以圓環(huán)病毒感染、豬繁殖與呼吸綜合征等免疫抑制性疾病相對(duì)較少有關(guān)。本文80.6%的自繁自養(yǎng)及種豬大部分購自本地區(qū)的臨床調(diào)查結(jié)果印證了該地區(qū)養(yǎng)豬水平較低。3區(qū)縣各規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌陽性率差異不顯著P＞0.05，與3區(qū)縣75%的被調(diào)查豬場(chǎng)均為非標(biāo)準(zhǔn)化豬舍及粗放式養(yǎng)殖直接關(guān)。

（2）4份副豬嗜血桿菌血清學(xué)陽性關(guān)節(jié)液共分離鑒定出 3 株疑似副豬嗜血桿菌，75%的一致性證實(shí)了副豬嗜血桿菌正向血凝診斷試劑盒的靈敏和準(zhǔn)確性。由于跗關(guān)節(jié)液的采集相對(duì)不易操作及應(yīng)激較大，豬場(chǎng)負(fù)責(zé)人不配合采集工作是本次關(guān)節(jié)液樣本數(shù)相對(duì)較少的直接原因，沒能較全面反應(yīng)和了解渝東3區(qū)縣副豬嗜血桿菌的實(shí)驗(yàn)室診斷感染率為本次研究的不足。

（3）藥物使用頻率直接影響規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌耐藥程度。3株疑似副豬嗜血桿菌分離菌株對(duì)第3代頭孢類藥物高度敏感；對(duì)四環(huán)素類、喹諾酮類及青霉素類明顯耐藥，這與本文臨床調(diào)查獲知四環(huán)素類、喹諾酮類及青霉類為該地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)高頻率使用藥品結(jié)果一致。該3株分離菌株與魏光河分離的重慶渝西株、徐成剛分離的廣東株藥敏譜各異，這與副豬嗜血桿菌血清型多、易耐藥等病原特點(diǎn)有關(guān)。