朱艷萍 李彥民
(赤峰寶山中醫(yī)院檢驗(yàn)科,內(nèi)蒙古 赤峰 024070)
?
ELISA檢測(cè)梅毒抗體導(dǎo)致老年人產(chǎn)生假陽(yáng)性的分析
朱艷萍 李彥民
(赤峰寶山中醫(yī)院檢驗(yàn)科,內(nèi)蒙古 赤峰 024070)
【摘要】目的 討論使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)檢測(cè)梅毒抗體致老年人產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果的原因。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分別檢測(cè)450例老年人及1912例中青年患者血清中的梅毒特異性抗體,陽(yáng)性者再使用已被CDC定為確診方法的梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)診斷試劑進(jìn)行復(fù)檢確診。結(jié)果 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)法檢測(cè)出的老年組的假陽(yáng)性率明顯高于中青年組,兩組間具有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論 年齡與疾病因素是造成TP-ELISA法檢測(cè)老年人梅毒特異性抗體導(dǎo)致假陽(yáng)性的重要因素。
【關(guān)鍵詞】TP-ELISA;老年人;梅毒;假陽(yáng)性
梅毒是一種以母嬰垂直傳播以及性傳播為主的一種傳染性疾病,主要由蒼白密螺旋體感染引起。在全球范圍內(nèi)廣泛分布,近年來(lái)全國(guó)發(fā)病率不斷上升,發(fā)病人數(shù)高居全球第五位。梅毒的診斷主要依賴病史,臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室篩查。而實(shí)驗(yàn)室檢查的項(xiàng)目包括直接查梅毒螺旋體抗體(暗視野顯微鏡.直接熒光抗體),血清學(xué)檢查(查抗體)以及梅毒螺旋體核酸測(cè)定。其中血清學(xué)檢查,特別是TP-ELISA檢測(cè)因其對(duì)IgG以及IgM的檢測(cè)能力強(qiáng),靈敏度高,操作方法簡(jiǎn)便而被二級(jí)醫(yī)院廣泛采用。但是,由于梅毒抗體主要是蒼白密螺旋體,故此對(duì)試劑的純度要求較高恰恰由于這個(gè)因素,導(dǎo)致試劑檢測(cè)的特異度只能達(dá)到99%左右,這就導(dǎo)致了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)陽(yáng)性而患者并沒(méi)有臨床癥狀的情況。由于梅毒屬于性病范疇,是十分敏感的醫(yī)學(xué)問(wèn)題和社會(huì)問(wèn)題,錯(cuò)誤的報(bào)告容易引起家庭糾紛甚至醫(yī)療糾紛,為此,筆者從2011年1月至2014年12月對(duì)此做了深入調(diào)查,結(jié)果如下。
1.1對(duì)象:在本院就診的所有門診及住院體檢病例,共2362例。其中年齡≥65歲的老年人共450例,對(duì)照組即年齡在18~60歲的病例共1912例。
1.2方法及試劑:初檢采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)。試劑盒由北京萬(wàn)泰生物科技有限公司生產(chǎn)。確診試驗(yàn)采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TP-PA)方法,試劑盒為珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)。
1.3真陽(yáng)性的判斷:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)和梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TP-PA)同時(shí)呈陽(yáng)性反應(yīng)即為真陽(yáng)性。
1.4假陽(yáng)性的判斷:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)陽(yáng)性而梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TP-PA)陰性,并且2周以后復(fù)查結(jié)果沒(méi)有改變的即為假陽(yáng)性。
1.5儀器的選擇:酶標(biāo)儀選用深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司生產(chǎn)的RT-6000,洗板機(jī)為深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司生產(chǎn)的RT-3000。
1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用卡方檢驗(yàn),P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
受檢的450例老年組患者中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)陽(yáng)性者11例,其中假陽(yáng)性者為9例,假陽(yáng)性率為81.8%(9/11),平均S/C.O (S代表樣品孔的OD值,C.O代表臨界值,如樣品的S/C.O的計(jì)算值≥1則判定為陽(yáng)性。反之,如果S/C.O的計(jì)算值<1則判定為陰性)值為3084。真陽(yáng)性兩例(均為男性),平均S/C.O值為1080,老年組中假陽(yáng)性者均無(wú)臨床癥狀,也無(wú)接觸史,只有真陽(yáng)性的2例患者承認(rèn)年輕時(shí)有過(guò)不潔接觸史。而中青年組的1912例患者中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)陽(yáng)性的是78例,假陽(yáng)性者為8例,假陽(yáng)性率是10.3% (8/78),平均S/C.O值為3043,真陽(yáng)性者均符合梅毒診斷行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS 273—2007)。這兩個(gè)參檢組的酶聯(lián)免疫法假陽(yáng)性率差異非常大,P<0.01,兩個(gè)參檢組間酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)檢測(cè)假陽(yáng)性率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
梅毒的確診臨床表現(xiàn)是一方面,更多的也要依賴實(shí)驗(yàn)室的報(bào)告結(jié)果。梅毒螺旋體暗視野檢查是最直接的診斷方法,可是這種方法的檢出率太低所以臨床一般不常用。一般情況下,人體感染梅毒螺旋體后約14 d就能檢測(cè)出特異性抗體。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的靈敏度高于梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TP-PA),所以采用2周后復(fù)檢的方法即可避免早期感染患者因?yàn)榭贵w濃度低而被凝集法TP-PA漏檢的情況,并且本次試驗(yàn)假陽(yáng)性的S/C.O值均較高基本可以排除靈敏度差異而引起的誤差[1-2]。然而我們?cè)诠ぷ髦邪l(fā)現(xiàn),由于TP-ELISA實(shí)驗(yàn)影響因素較多,所以本法存在一定的假陽(yáng)性,很多老年人TP-ELISA陽(yáng)性,但臨床無(wú)癥狀,主訴無(wú)發(fā)病史及接觸史,且65歲以上的老年人因接觸而患病的概率非常小。筆者發(fā)現(xiàn)這2例真陽(yáng)性老年患者的平均S/C.O值為1080,說(shuō)明老年人可能存在梅毒螺旋體抗體。但是9例假陽(yáng)性患者中,TP-PA未能檢測(cè)出梅毒螺旋體抗體,我們認(rèn)為不能單純地用TP-PA假陽(yáng)性來(lái)解釋,也可能查到的本來(lái)就不是梅毒特異性抗體。由于他們沒(méi)有不潔性生活史、性病史、流產(chǎn)史、抗梅治療史,而這種差異的出現(xiàn)筆者認(rèn)為有兩種可能:一是有別的物質(zhì)干擾了ELISA的檢測(cè),另一種因素是兩種方法的抗原有所不同。而目前的ELISA試劑盒主要是采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理,在微孔條上預(yù)包被梅毒螺旋體抗體的基因重組抗原,配以酶標(biāo)記抗原及TMB顯色劑等其他試劑,檢測(cè)人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。而TP-PA試劑是由梅毒螺旋體(Nichols株)的精制菌體成分制成,它與血清中的梅毒螺旋體抗體發(fā)生凝集反應(yīng)。實(shí)際上老年人易使TP-ELISA檢測(cè)產(chǎn)生較高的假陽(yáng)性,是因?yàn)殡S著年齡的增大使其生理功能慢慢退化,從而導(dǎo)致免疫功能異常或患有一系列疾病,如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、丙型肝炎、冠心病等,疾病的因素使機(jī)體誘導(dǎo)產(chǎn)生并釋放某些交叉抗原,從而干擾了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。老年人也是惡性腫瘤,糖尿病,肝硬化,風(fēng)濕性疾病等自身免疫疾病的高發(fā)人群,這些疾病也能讓老年人體內(nèi)產(chǎn)生一些治療性抗體及免疫性蛋白等,這些特殊成分在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)反應(yīng)中具有一定的吸附作用,使試驗(yàn)發(fā)生顯色反應(yīng),從而產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。
中圖分類號(hào):R759.1;R446
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B
文章編號(hào):1671-8194(2016)04-0090-02