徐國榮 葉 紅廣東省江門市人民醫(yī)院，廣東江門 529000

子宮肌瘤組織中survivin的表達分析

徐國榮 葉 紅
廣東省江門市人民醫(yī)院，廣東江門 529000

目的 探討Survivin在子宮肌瘤組織中的表達及其意義。 方法 用ELISA法檢測2015年6～10月在我院因子宮肌瘤而行子宮切除的患者40例，對子宮肌瘤組織及其周邊肌肉組織中Survivin蛋白含量進行監(jiān)測對比。 結(jié)果 Survivin在子宮肌瘤瘤體組織中的含量是（310.78±25.93）ng/L，在瘤旁肌肉組織含量是（186.09±23.31）ng/L，二者差異有統(tǒng)計學意義（t=13.356，P＜0.01）；Survivin在單發(fā)子宮肌瘤瘤體組織含量是（312.54±28.78）ng/L，多發(fā)子宮肌瘤瘤體組織中含量（309.60±24.42）ng/L，二者之間無明顯差異（t=1.0213，P＞0.05）。 結(jié)論 凋亡調(diào)節(jié)因子Survivin與子宮肌瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關。

子宮肌瘤；Survivin；發(fā)生機制；凋亡調(diào)節(jié)因子

子宮肌瘤是女性生殖器最常見的良性腫瘤，生育年齡女性其發(fā)生率約20%～25%，然而迄今為止其發(fā)病機制仍未完全明了。生物化學檢測證實雌激素、孕激素是子宮肌瘤發(fā)生和發(fā)展的主要促進因子[1]。也有人研究認為胰島素樣生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子均與子宮肌瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切[2-3]。但在細胞凋亡和增殖方面的研究較少。本研究采用ELISA法定量檢測子宮肌瘤瘤體組織以及其周邊肌肉組織中survivin蛋白的表達情況，初步探討其在子宮肌瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選擇2015年6～10月在我院因子宮肌瘤而行子宮切除的患者40例，年齡36～55歲，平均年齡（45±4.36）歲，其中31例患者為單發(fā)性子宮肌瘤[單發(fā)性子宮肌瘤患者年齡36～52周歲，平均年齡（44±2.15）歲]，9例患者為多發(fā)性子宮肌瘤[單發(fā)性子宮肌瘤患者年齡36～55周歲，平均年齡（46±2.89）歲]，患者術前均未接受過激素等相關治療。在子宮切除后立即切取肌瘤核心組織約1cm×1cm×1cm為研究組，另取同樣大小瘤體包膜外2cm處子宮肌層組織為對照組，分別加入少量PBS液體，放入液氮中速凍備用。所有病例經(jīng)術后病理證實均為子宮平滑肌瘤。

1.2 試劑和實驗方法

用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）法定量檢測組織中survivin蛋白含量。人生存素（survivin）ELISA試劑盒購自上海酶研生物科技有限公司。將低溫保存的組織標本解凍，加入一定量PBS（PH 7.4），用組織勻漿機勻漿化，離心20min左右，收集上清。操作步驟嚴格按照說明書。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 Survivin在子宮肌瘤組織和瘤旁肌肉組織中的表達

Survivin在子宮肌瘤瘤體組織中的含量

是（310.78±25.93）ng/L，在 瘤 旁 肌 肉 組 織 含量是（186.09±23.31），二者差異有統(tǒng)計學意義（t=13.356，P＜0.01）。

2.2 單發(fā)子宮肌瘤瘤體組織和多發(fā)子宮肌瘤瘤體組織中Survivin的表達

Survivin在單發(fā)子宮肌瘤瘤體組織含量是（312.54±28.78）ng/L，多發(fā)子宮肌瘤瘤體組織中含量是（309.60±24.42）ng/L，二者之間無明顯差異（t=1.0213，P＞0.05）。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、進展和預后與腫瘤微環(huán)境、機體的免疫狀態(tài)以及細胞凋亡和增殖平衡紊亂直接相關。細胞有增殖、分化、凋亡三種狀態(tài)，在正常情況下，三者相互協(xié)調(diào)，保持平衡，這種平衡在細胞的衰老與更新、機體生長起著重要作用。只有當抑制凋亡和促進凋亡的基因的比例處于動態(tài)平衡時，機體才能保持正常的形態(tài)結(jié)構和生理功能。以往認為只有惡性腫瘤與細胞凋亡調(diào)控因子有關，近些年的研究發(fā)現(xiàn)屬于良性腫瘤范疇的子宮肌瘤也與凋亡調(diào)控密切相關。

細胞凋亡是基因誘導狀態(tài)下細胞的有序性死亡，在組織分化、個體發(fā)育、個體成長、以及衰老等相關生物學過程中具有非常重要的影響。誘導細胞凋亡的因素眾多，但導致凋亡的主要途徑包括兩個方面，其一是內(nèi)源性凋亡途徑，其二是外源性凋亡途徑。其中，內(nèi)源性凋亡途徑是指線粒體途徑，以線粒體為主要介導，在Caspase-9作用下進行驅(qū)動，而外源性凋亡途徑則屬于死亡受體途徑，主要經(jīng)由細胞膜上方死亡受體進行介導反應，在Caspase-8以及Caspase-10的驅(qū)動作用下產(chǎn)生凋亡反應。內(nèi)源性凋亡途徑與外源性凋亡途徑在下游效應分子Caspase-3，7中匯合，該研究結(jié)果提示Caspase-3，7為細胞凋亡途徑的主要交叉點。Survivin作為迄今為止所發(fā)現(xiàn)的作用效果最為確切的凋亡抑制因子之一，近年來大量研究中顯示Survivin可通過多種機制對細胞凋亡反應進行有效抑制，以促進腫瘤病灶細胞的發(fā)生與發(fā)展。

Survivin即生存素，屬于哺乳類IAP家族全新成員之一。Ambrosini等研究人員于1997年應用效應細胞蛋白酶受體-1的cDNA基因在人類基因組文庫中以篩選克隆的方式發(fā)現(xiàn)了Survivin基因，其基因位于17號染色體q25區(qū)域內(nèi)，靠近端粒，序列內(nèi)構成包括3個內(nèi)含子以及4個外顯子，與EPR-1序列呈反向互補狀態(tài)。相關研究報道中顯示[4]：Survivin基因全長為14.7kb，成熟狀態(tài)下mRNA基因全場為1629nt，編碼共有142個氨基酸組成的分子質(zhì)量約16.5×103的胞漿蛋白。也有研究人員報道顯示[5]：大鼠模型與人體所提取Survivin基因中均含有4個外顯子，但其所對應cDNA全長有3種類型，根據(jù)該研究預測存在有3種不同類型的Survivin蛋白質(zhì)基因成分。

在近來臨床研究報道中所發(fā)現(xiàn)并已得到證實的凋亡抑制性基因中，Survivin基因表達的Survivin蛋白是迄今為止分子量最小，但同時抗凋亡作用最為確切的凋亡抑制類蛋白。Survivin凋亡抑制基因可以借助于如下兩種方式使細胞凋亡進程得到有效抑制：第一，Survivin凋亡抑制基因能夠?qū)毎蛲龅鞍酌竎aspase-3以及細胞凋亡蛋白酶因子casapase-7終末期活性水平進行抑制的方式控制細胞凋亡進程，其二，經(jīng)由Survivin凋亡抑制基因并在Fas因子的持續(xù)刺激作用下以易位的方式滲透至細胞核內(nèi)，并直接面向細胞周期調(diào)節(jié)因子cdk4產(chǎn)生抑制作用，加速細胞調(diào)節(jié)因子下cyclinE因子的活化，誘導Rb細胞的磷酸化反應，在磷酸化反應過程中生成ckd4復合物，該復合物能夠引導P21的獨立釋放，并以易位方式進入線粒體內(nèi)并參與與caspase3因子的結(jié)合反應，進而使其活性水平得到有效抑制，從而發(fā)揮阻止細胞凋亡進程的目的[6]。作為凋亡抑制蛋白家族中非常重要的成員組織之一，其廣泛的表達與大多數(shù)腫瘤組織、分泌期子宮內(nèi)膜組織、造血干細胞組織、以及人類胚胎發(fā)育組織中，而在成人終末分化成熟組織中Survivin多呈低表達或不表達狀態(tài)，這一表達特點能夠為相關腫瘤疾病的診斷治療提供全新靶點。Zannoni[7]和Erkanli[8]研究證實， survivin在宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌中高表達，認為其在婦科惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，使其已逐漸成為婦科惡性腫瘤疾病診斷表達中的一大研究熱點。

綜合國內(nèi)外有關Survivin抑制細胞凋亡反應機制的研究認Survivin凋亡抑制基因可以借助于如下兩種方式使細胞凋亡進程得到有效抑制：（1）Survivin凋亡抑制基因可以參與到Fas/Caspase-8以及Bax/細胞色素C誘導下Caspase的活化反應以及凋亡過程中，發(fā)揮其獨特的抑制性功效，從而作用于Fas/Caspase-8各個凋亡途徑下的下游匯集點，通過發(fā)揮特殊作用機制的方式直接抑制終末效應蛋白Caspase-3因子以及Caspase-7因子從而達到抑制凋亡作用的效果[9]；（2）Survivin凋亡抑制基因可以與周期蛋白激酶因子CDK4產(chǎn)生大量結(jié)合反應，并對Caspase細胞因子抗凋亡反應產(chǎn)生間接作

用。有相關研究報道中顯示：在抗凋亡反應過程中，Survivin信號途徑的產(chǎn)生與反應機制以Fas以及細胞增殖細胞為主，通過對Survivin產(chǎn)生應激性反應的方式最終進入細胞核內(nèi)。從這一角度上來說，細胞核內(nèi)CDK4細胞因子能夠與Survivin基因進行相互性反應與作用，使受體CDK4/CyclinE參與細胞因子激活過程中，并為Rb成分的磷酸化反應提供驅(qū)動，促進細胞因子進入G1期內(nèi)并快速轉(zhuǎn)換至S期狀態(tài)。在此過程中，還能夠使CDK4中p21Wafl/ Cip1因子被大量釋放，其中的有效成分能夠快速向線粒體發(fā)生易位反應，并通過與Procaspase-3大量結(jié)合的方式的形成復合性物質(zhì)，該物質(zhì)相對于活性Caspase-3細胞因子有一定的抑制性功效，F(xiàn)as參與介導過程的細胞凋亡反應也會在一定程度上受到影響，進而發(fā)揮Survivin抑制細胞凋亡反應的有效機制；（3）既往相關報道中分別以離體對象以及活體對象展開研究，研究結(jié)果顯示Survivin與細胞有絲分裂過程中的p34cdc2周期蛋白激酶成分有密切相關性關系。Survivin細胞因子可以通過P34edc2-CyclinBl的途徑促進Thr34的磷酸化反應，經(jīng)磷酸化反應誘導后Survivin細胞因子可以與Caspase-9因子產(chǎn)生結(jié)合反應，所形成的復合物能夠?qū)aspase - 9所依賴的細胞信號傳導途徑產(chǎn)生阻斷作用，進而起到對細胞凋亡進行抑制的價值。但反向來說，在Survivin細胞因子中的Caspase - 9因子與Thr34的脫磷酸化反應會造成Caspase-9與Survivin細胞因子在有絲分裂過程中的復合物發(fā)生解體反應，進而導致與Caspase-9有依賴性關系的細胞因子大量凋亡。同時，細胞因子作為Caspase-9與周期蛋白激酶p34cdc2-CyclinBl成分的重要底物之一，可以在磷酸化反應的過程中使細胞分裂的穩(wěn)定性得到可靠保障[10]；（4）Survivin結(jié)合SMAG間接作用于Caspase的抗凋亡作用：Survivin凋亡抑制基因可與輔助性線粒體源性Caspase激活因子（second mitochondria-derived activator of caspase， SMAG）產(chǎn)生結(jié)合反應，輔助性線粒體源性Caspase激活因子作為一種借助于結(jié)合IAP而保護Caspase自身活性水平的蛋白因子，Survivin凋亡抑制因子與輔助性線粒體源性Caspase激活因子結(jié)合并通過誘導激活對抗機制的方式使Caspase蛋白因子活性水平得到有效控制[11-13]。除此以外，Survivin作為典型凋亡抑制因子，能夠快速發(fā)揮相對于輔助性線粒體源性Caspase激活因子的對抗作用，從而使其他IAP家族成員的抑制進程得到有效保護，確保其抗凋亡功能的合理進展。除此以外，也有報道中指出：Survivin凋亡抑制因子能夠經(jīng)非Caspase依賴細胞凋亡的方式使細胞凋亡進程的抑制功能得到有效發(fā)揮，例如通過與核因子K（3 （ nuclear factorkappa B ， NF-KB}的相互調(diào)控，對促凋亡激酶的抑制或者與絲氨酸/蘇氨酸激酶受體的相互作用，抑制凋亡。

本研究顯示，子宮肌瘤組織中Survivin表達顯著高于周邊肌肉組織（P＜0.001），與徐建平[14]和汪愛華[15]的研究一致，因此筆者認為Survivin可以通過上述機制抑制子宮肌瘤細胞凋亡，同時促進細胞增殖導致肌瘤發(fā)生和發(fā)展。

關于子宮多發(fā)肌瘤和子宮單發(fā)肌瘤中Survivin的表達有無差異，未見報道。本研究結(jié)果提示二者在單發(fā)和多發(fā)子宮肌瘤組織中的表達無明顯差異。

綜上所述，我們認為Survivin與子宮肌瘤的發(fā)生和發(fā)展關系密切，具體作用機制有待于進一步研究[16]。

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Expression analysis of Survivin in uterine leiomyoma

XU Guorong YE Hong
Jiangmen Municipal People's Hospital, Guangdong, Jiangmen 529000, China

Objective To explore the expression and significance of Survivin in uterine leiomyoma. Methods ELISA method was used to detect the 40 cases of patients underwent hysterectomy due to uterine fibroids in our hospital from June 2015 to October 2015. Survivin protein content in uterine leiomyoma tissue and its peripheral muscle tissue were Monitored and compared. Results The content of Survivin in the uterine leiomyoma tissues was (310.78 + 25.93) ng/L, the content of Survivin in muscle tissue was (186.09 ± 23.31) ng/L, and the difference was statistically significant (t=13.356, P＜0.01). The content of Survivin in the tissue of solitary uterine leiomyoma was (312.54±28.78) ng/L, the content of Survivin in multiple uterine fibroids (309.60 ± 24.42) ng/L, and there was no significant difference between the two groups (t=1.0213, P＞0.05). Conclusion Apoptosis regulatory factor Survivin is closely related to the occurrence and development of uterine leiomyoma.

Uterine leiomyoma; Survivin; Occurrence mechanism; Apoptosis regulatory factor

R737.33

B

2095-0616（2016）16-81-04

2016-06-06）