朱雅寧 （吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院130000）

禽衣原體病及綜合防控措施研究

朱雅寧 （吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院130000）

禽衣原體疾病是一種以鸚鵡熱嗜性衣原體以及流產(chǎn)嗜性衣原體為病原的疾病，主要的癥狀有肺炎、心包炎、氣囊炎等。衣原體能夠寄生在任何年齡段的家禽體內(nèi)，給養(yǎng)禽業(yè)造成難以估量的經(jīng)濟(jì)損失，因此我們必須給予更多的關(guān)注和重視，降低其所造成的經(jīng)濟(jì)損失，推動(dòng)養(yǎng)禽業(yè)走向可持續(xù)發(fā)展道路。

禽衣原體?。蝗诵蠊不疾。痪C合防控

禽衣原體病 (Avian Chlamydiosis，AC)是一種能夠通過接觸在禽類個(gè)體中傳播的疾病。本病能引起肺炎、流產(chǎn)、腸炎、腦炎、眼結(jié)膜角膜炎或多發(fā)性關(guān)節(jié)炎等多種疾病。國(guó)際獸疫局 (OIE)將此病列為二類傳染病。目前已確定有190多種鳥類動(dòng)物體內(nèi)存在衣原體，包括雞、鴨、火雞、鴿等。本病在世界范圍均有分布。其中在美國(guó)以火雞感染后傳播給人類的案例很多，西歐地區(qū)人口感染這種疾病主要是因?yàn)辂W鵡等觀賞鳥類傳播的，而在東歐以及當(dāng)時(shí)的蘇聯(lián)，主要的病源來自于鴨和火雞。國(guó)內(nèi)針對(duì)這種疾病最早的報(bào)道可以追溯到上世紀(jì)中期，當(dāng)時(shí)研究人員對(duì)北京一家養(yǎng)鴨場(chǎng)肺炎員工展開調(diào)查，結(jié)果表明有14人鸚鵡熱血清呈陽(yáng)性。家禽衣原體感染造成的危害不但影響家禽的生產(chǎn)性能，而且經(jīng)垂直傳播途徑危害子代。因此，家禽衣原體病的防治工作相當(dāng)重要。

1 病原學(xué)

鸚鵡熱衣原體是衣原體科 (Chlalmydiaceae)衣原體屬(Chlalmydia)，這種微生物寄生在細(xì)胞里面。根據(jù)其體積大小，可以將其分為兩種，一種是直徑在0.2～0.5μm之間的原體 (Elementary body，EB)，它是一種最小的原核生物，EB處于感染形態(tài)，主要存在于靶柱狀上皮細(xì)胞外表和細(xì)胞中；另一種是網(wǎng)狀體 (Reticular body，RB)，它是細(xì)胞代謝最為活躍的形態(tài)，直徑達(dá)到0.6～1.5μm之間，以球形或不規(guī)則形狀為主，通透性很低。

2 生物學(xué)性狀

2.1 基本形態(tài)

鸚鵡熱衣原體為革蘭氏陰性，光學(xué)顯微鏡下可見，直徑0.3～0.4μm。細(xì)胞壁上存在多糖抗原。細(xì)胞質(zhì)中有DNA和RNA，并有不完全的酶系統(tǒng)，在宿主細(xì)胞質(zhì)的空泡內(nèi)增生，具有特異性包涵體。

2.2 培養(yǎng)特性和生化特性

人工培養(yǎng)衣原體，即把衣原體注入到一周齡雞胚卵黃囊里面，放置在36～37℃溫度環(huán)境進(jìn)行孵育，5～6d后雞胚死亡。此時(shí)黃膜里面布滿血液，能夠輕易地剝離下來。部分胚體出現(xiàn)了小的出血口。制成涂抹片后能夠觀察到大量的衣原體。有些胞漿里面能夠發(fā)現(xiàn)包涵體。將上述雞胚放置在-70℃溫度環(huán)境下，衣原體的壽命超過10年。此外也能在McCoy細(xì)胞、鼠L細(xì)胞、Hela細(xì)胞、Vero細(xì)胞、BHK21細(xì)胞、BGM細(xì)胞、Chan早氏人肝細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。

鸚鵡熱衣原體和理化物質(zhì)接觸后，性質(zhì)會(huì)發(fā)生很大的變化，甚至直接死亡。將其置于70%乙醇、2%NaOH、1%HCl等環(huán)境下，只需幾分鐘就會(huì)徹底喪失感染力，而將其置于0.5%石碳酸或0.1%的福爾馬林中，它會(huì)在24h內(nèi)死亡。相比高溫條件，其對(duì)低溫的耐受力更強(qiáng)，在56℃環(huán)境下僅能生存5min，在37℃環(huán)境下能夠生48h，但在-70℃溫度下其壽命長(zhǎng)達(dá)10年左右。如果其所處的環(huán)境中水分較少，會(huì)在5周后死亡。在室溫、陽(yáng)光條件下生存期不超過6d，紫外線對(duì)衣原體有很強(qiáng)的殺滅作用。在水中可存活17d。四環(huán)素、氯霉素和紅霉素等抗生素有抑制其繁殖作用。

2.3 毒性

鸚鵡衣原體可在其眾多宿主動(dòng)物中引起廣譜疾病，典型癥狀有高熱、惡寒、頭痛、咳嗽等。從癥狀上來看，和感冒、呼吸道疾病有很多相同之處，因此容易發(fā)生誤診。

3 衣原體流行情況

上世紀(jì)60～70年代，歐美禽衣原體大范圍傳播，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)內(nèi)針對(duì)這種疾病最早的報(bào)道可以追溯到上世紀(jì)中期，當(dāng)時(shí)研究人員對(duì)北京一家養(yǎng)鴨場(chǎng)肺炎員工展開調(diào)查，結(jié)果表明有14人鸚鵡熱血清呈陽(yáng)性。2001年，劉棋及其研究小組從廣西采集1568份雞血清并對(duì)其衣原體抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明呈陽(yáng)性比例達(dá)到了20.66%。2003年，京津地區(qū)爆發(fā)了一場(chǎng)大規(guī)模肉雞呼吸道疾病，石巖及其研究小組對(duì)此次疫情中的病雞的血清進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，10～30%的肉雞血清呈衣原體陽(yáng)性。2004年，北京某賽鴿養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了大規(guī)模的傳染疾病，大量賽鴿出現(xiàn)結(jié)膜炎、鼻炎等癥狀。在過去的幾年間，人們對(duì)衣原體的危害有了更加全面的認(rèn)識(shí)，相關(guān)的研究成果也逐漸豐富起來。

4 衣原體診斷技術(shù)研究進(jìn)展

4.1 光學(xué)顯微鏡檢查

在無菌環(huán)境下收集病料，比如血液、患有相關(guān)疾病的內(nèi)臟、流產(chǎn)胎兒、分泌物等，制片并通過Gimenez進(jìn)行染色處理，包涵體里面的原生小體 （EB）經(jīng)過染色后變成紅色、紫紅色，網(wǎng)狀體 （EB）變成藍(lán)綠色。對(duì)病理組織切片進(jìn)行觀察，能夠看到的組織細(xì)胞胞漿李曼的包涵體，形狀以圓形為主，也有部分呈不規(guī)則形。

4.2 雞胚分離法

取樣品懸液0.2～0.5ml，接種到6～7日齡的雞胚卵黃囊中，放置在39℃環(huán)境下孵育。3～10d后死亡的雞胚卵黃囊血管達(dá)到充血狀態(tài)。在無菌狀態(tài)下，將雞胚卵黃囊取出并涂片，顯微鏡下觀察，如果存在很多衣原體原生小體的話，就能夠進(jìn)一步確定。

4.3 血清學(xué)診斷方法

4.3.1 間接血凝試驗(yàn) (IHA)

通過高純度的衣原體對(duì)綿羊紅細(xì)胞處理后，進(jìn)行動(dòng)物血清衣原體抗體的檢測(cè)，這種方法即IHA。IHA的優(yōu)勢(shì)在于檢測(cè)效率高、敏感性好。

4.3.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA）

用ELISA檢查衣原體脂多糖 （LPS）抗原，可以揭示出各種衣原體是否存在。不過考慮到LPS和部分革蘭氏陰性菌的表位是一致的，因此會(huì)因?yàn)榻徊娣磻?yīng)導(dǎo)致假陽(yáng)性問題。要解決這一問題，可以采取含有特異性單克隆抗體的ELISA試劑盒，不過這又會(huì)導(dǎo)致敏感性降低的問題。

4.4 熒光PCR方法

已被廣泛用于鸚鵡熱衣原體的外膜主要蛋白基因的檢測(cè)和多形態(tài)膜蛋白基因的檢測(cè)，使用PCR技術(shù)在特異性方面的表現(xiàn)令人滿意，不過如果要達(dá)到敏感性要求，必須對(duì)樣品進(jìn)行前PCR處理，以獲得短的DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增，或用套式PCR擴(kuò)增，可以提高本方法的敏感度。

5 天津地區(qū)禽衣原體綜合防控措施研究

5.1 合理選場(chǎng)

在確定養(yǎng)殖場(chǎng)所時(shí)，必須兼顧養(yǎng)殖禽類和人的雙方安全。在設(shè)計(jì)和建造養(yǎng)殖場(chǎng)時(shí)，必須建造環(huán)保處理系統(tǒng)，布置消毒設(shè)備。

5.2 建立嚴(yán)格的防疫消毒制度

應(yīng)用比較廣泛的消毒液主要是5%來蘇兒溶液、3%NaOH溶液、10%漂白粉溶液等。對(duì)圈舍進(jìn)行大范圍的消毒，一旦發(fā)現(xiàn)疑似病例，馬上對(duì)一定區(qū)域內(nèi)實(shí)施重點(diǎn)消毒處理，采取滅蚊、蠅、鼠措施。

5.3 定期監(jiān)測(cè)

繁殖用禽類必須全部接受檢測(cè)，隨機(jī)抽取10%進(jìn)行檢測(cè)。一旦發(fā)現(xiàn)衣原體陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，或者是疑似病例，馬上采取隔離措施并淘汰，避免傳染。

5.4 藥物預(yù)防和治療

最常用的藥物是四環(huán)素和土霉素，在感染早期，連續(xù)5d以上投給大劑量的四環(huán)素，可使疫病得到控制。在精液中發(fā)現(xiàn)衣原體的種雞，應(yīng)以治療量四環(huán)素連續(xù)投藥3～4d，間隔5d再重復(fù)一個(gè)療程。

6 討論

禽衣原體防控工作是畜牧業(yè)實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定健康發(fā)展的重要保障。我們要實(shí)施以監(jiān)測(cè)、防控為主的綜合措施，不斷探索符合天津?qū)嶋H的動(dòng)物疾病防治體系，為疫病的有效防治創(chuàng)造更好的條件，逐步實(shí)現(xiàn)重點(diǎn)疫病從控制到消滅的目標(biāo)。

天津市農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化與推廣項(xiàng)目 （201204040）。

朱雅寧 （1982-），女，獸醫(yī)師，本科，主要從事動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作。

雷連成。