王鵬 張丹 宋永欣 冉德軍 孫德義

·臨床醫(yī)學·

Mcm2和Survivin在鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤中的表達及意義的研究

王鵬 張丹 宋永欣 冉德軍 孫德義

目的探討Mcm2和Survivin在鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤(SNIP)中的表達及其相互關系。方法采用免疫組織化學技術分別檢測Mcm2及Survivin在40例SNIP、20例鼻腔鱗狀細胞癌(NSCC)及40例正常鼻腔黏膜(NM)組織標本中的表達。結果Mcm2和Survivin在NM、SNIP、NSCC 中的表達呈遞增趨勢,兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。SNIP中Mcm2和Survivin的表達呈正相關(r=0.913,P＜0.01)。結論Mcm2和Survivin均參與SNIP的發(fā)生、發(fā)展過程,可作為衡量SNIP惡變與復發(fā)的參考指標之一。

鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤；Mcm2；Survivin；增殖；凋亡

SNIP是鼻科常見的良性腫瘤,其在性質上雖屬良性,但具有侵襲性、高復發(fā)率、易惡變和多中心的臨床特點［1］。本實驗采取免疫組織化學方法檢測Mcm2和Survivin在NM、SNIP及NSCC中的表達情況,并對兩者在SNIP中的表達進行了相關分析,探討兩者在SNIP中表達的臨床意義,現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集大慶油田總醫(yī)院耳鼻喉科2009年1月～2012年9月手術切除的SNIP組織40例,2010年9月～2012年9月切除的40例慢性單純性鼻炎的部分NM組織以及本院2006年1月～2012年9月手術切除的20例NSCC組織。所有標本均經病理證實。

1.2 試劑 S-P免疫組化試劑盒,鼠抗人Mcm2單克隆抗體,兔抗人Survivin多克隆抗體。

1.3 方法 將三種組織類型蠟塊標本制作成病理切片后,按S-P免疫組織化學試劑盒操作方法進行染色,所有病理切片染色均在相同條件下進行,每種組織類型染色均設陽、陰性對照。用已確認染色陽性切片做陽性對照,用PBS替代一抗孵育切片做陰性對照。

1.4 染色結果及計數方法 Mcm2的表達產物定位于細胞核,凡細胞核染成棕黃色或棕褐色者為染色陽性細胞。同時按以下方法計算Mcm2標記指數：每張切片于高倍鏡下隨機選5個高倍視野計數陽性細胞的平均值作為其標記指數,然后進行評級：標記指數＜5%為(-)；標記指數6%～25%為(+)；標記指數26%～50%為(++)；標記指數＞50%為(+++)。

Survivin的表達產物定位于細胞漿,凡細胞漿呈黃色、棕黃色、棕褐色者為染色陽性細胞。同時按以下方法計算Survivin的陽性表達結果：每張切片于高倍鏡下隨機選5個高倍視野計數陽性細胞的平均數,根據染色陽性細胞數和染色強度獨立評判后綜合判定：①陽性細胞數：≤5%記為0分,6%～25%記為1分,26%～50%記為2分,51%～75%記為3分,＞75%記為4分；②染色強度：無染色記為0分,淡黃色記為1分,黃色記為2分,棕黃色記為3分。兩項結果乘積＞1分為陽性,≤1分為陰性。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差(±s)表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗；相關性采用Spearman法進行分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Mcm2和Survivin在三種組織類型中的陽性表達情況 Mcm2和Survivin在NM、SNIP、NSCC中的表達呈遞增趨勢,兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。見表1,表2。

2.2 SNIP中Mcm2和Survivin表達相關性分析 本研究顯示,Mcm2與Survivin表達之間呈正相關(r=0.913,P＜0.01)。Survivin蛋白表達呈陽性的組織標本與Survivin蛋白表達呈陰性的組織標本相比,前者的Mcm2中位標記指數明顯高于后者(P＜0.01)。見表3。

3 討論

細胞增殖與細胞凋亡狀態(tài)的平衡,是維持機體組織細胞數量穩(wěn)定、清除突變細胞、防止細胞癌變所必須的。細胞增殖與凋亡狀態(tài)平衡的紊亂與腫瘤的發(fā)生關系密切,如損傷的細胞不能啟動相應的凋亡機制,體內細胞的增殖與凋亡兩者間的狀態(tài)就會失去平衡,兩者平衡的破壞使存在基因缺陷的細胞獲得生存優(yōu)勢,促使細胞基因突變的發(fā)生和惡性轉化,最終促使腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此,細胞的增殖與凋亡狀態(tài)的異?？赡茉赟NIP的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。

Mcm2是近年來發(fā)現的一種較好地反映細胞增殖活性的標志物。在所有進入細胞周期的細胞中均有表達,但在靜止期及分化成熟的細胞中則不表達,因此,在突變和增殖發(fā)育異常的細胞中,Mcm2可作為細胞增殖標記物來標記細胞所處的狀態(tài)［2］。且Ramnath等［3］研究證實,Mcm2的細胞表達陽性度與細胞變異的嚴重程度相關。

本實驗結果表明,Mcm2在NM中表達較少,但在SNIP、NSCC中表達范圍和層次廣泛、染色強度明顯增強。Mcm2的蛋白標記指數也呈一遞增趨勢,符合三者細胞增殖活性逐一遞增的規(guī)律。Gonzalez等［4］研究指出,Mcm2高表達,意味著隨后的細胞突變轉化增加。本實驗中有些SNIP病例的Mcm2的標記指數較高,甚至達到NSCC的Mcm2中位標記指數,這說明在某些SNIP中存在有惡變傾向或惡變的病灶,這些Mcm2的標記指數較高的SNIP病例可能比Mcm2標記指數低的SNIP病例易發(fā)生復發(fā)或惡變。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的新成員。它可以抑制細胞凋亡和調節(jié)細胞有絲分裂,對細胞周期和細胞凋亡界面的聯系起重要作用。Survivin除了在胸腺、生殖腺中微弱表達外,在其他正常組織中均未表達,而在幾乎所有惡性腫瘤中都有高表達［5］。研究表明,Survivin在幾種前惡性損傷(如結腸息肉、乳腺腺瘤等)中表達,表明Survivin的表達可能出現于細胞惡性轉化的早期［6］。因此,Survivin的檢測可為診斷腫瘤及預測腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預后提供新的指標。

本實驗結果顯示,Survivin蛋白在NM中無明顯表達,在SNIP及NSCC中表達逐漸升高,統(tǒng)計分析顯示三者之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。SNIP中Survivin蛋白含量較高,并且Survivin在不同SNIP病例的染色表達強弱不等,Survivin強表達可能提示該腫瘤更趨向復發(fā)、惡變。

本實驗中,Survivin蛋白陽性表達與陰性表達相比,Mcm2中位標記指數前者明顯高于后者。這表明在SNIP的發(fā)生發(fā)展中高增殖和低凋亡可能同時存在,Mcm2促增殖作用和Survivin的凋亡抑制作用相互促進,使細胞增殖和凋亡之間的差距進一步擴大,使得腫瘤細胞獲得生長優(yōu)勢。因此,SNIP中Mcm2與Survivin的表達水平有可能作為衡量SNIP惡變與復發(fā)的參考指標之一。

［1］鄔旭,韓德民.鼻腔、鼻竇內翻性乳頭狀瘤的研究進展.國外醫(yī)學耳鼻咽喉科學分冊,2002 ,26(2):95-97.

［2］Gakiopoulou H,Korkolopoulou P,Levidou G,et al.Minichromosome maintenance proteins 2 and 5 in non-benign epithelial ovarian tumours: relationship with cell cycle regulators and prognostic implications.Br J Cancer,2007,97(8):1124-1134.

［3］Ramnath N,Hernandez FJ,Tan DF,et al.MCM2 is an independent predictor of survival in patients with non-small-cell lung cancer.Clin Oncol,2001,19(22):4259-4266.

［4］Gonzalez MA,Pinder SE,Callagy G,et al.Minichromosome maintenance protein 2 is a strong independent prognostic marker in breast cancer.J Clin Oncol,2003,21(23):4306-4313.

［5］Athanassiadou AM,Patsouris E,Tsipis A,et al.The significance of Survivin and Nectin-4 expression in the prognosis of breast carcinoma.Folia Histochem Cytobiol,2011,49(1):26-33.

［6］Kobayashi Y,Yukiue H,Sasaki H,et al.Developmentally regulated expression of survivin in the human thymus.Hum Immunol,2002,63(2):101-107.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.011

2015-12-10］

163000 大慶油田總醫(yī)院耳鼻喉科

王鵬