郭玲娣，徐名，張旭艷，陳敏

(1 濰坊醫(yī)學(xué)院，山東濰坊 261000；2 郯城縣第一人民醫(yī)院)

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宮頸鱗癌組織中HIF-2 、ABCG2的表達(dá)及意義

郭玲娣1，徐名2，張旭艷1，陳敏1

(1 濰坊醫(yī)學(xué)院，山東濰坊 261000；2 郯城縣第一人民醫(yī)院)

摘要：目的觀察宮頸鱗癌組織中缺氧誘導(dǎo)因子2(HIF-2 )、腺苷三磷酸結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2(ABCG2)的表達(dá)，并探討其意義。方法采用免疫組化法檢測(cè)88例宮頸鱗癌組織(觀察組)、47例正常宮頸組織(對(duì)照組)中的HIF-2 、ABCG2，分析其與宮頸鱗癌臨床病理特征的關(guān)系及二者表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果觀察組HIF-2、ABCG2的陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組(P均<0.05)。HIF-2 、ABCG2表達(dá)均與宮頸鱗癌FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程相關(guān) (P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P均>0.05)；HIF-2 與ABCG2的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.316，P=0.003)，且二者均與宮頸鱗癌患者預(yù)后有關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論宮頸鱗癌組織中ABCG2、HIF-2 呈高表達(dá)，二者可能參與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展。

關(guān)鍵詞：宮頸鱗癌；缺氧誘導(dǎo)因子-2 ；腺苷三磷酸結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2

宮頸癌是女性第二大常見(jiàn)惡性腫瘤，發(fā)病機(jī)制尚不明確。缺氧誘導(dǎo)因子2(HIF-2)是腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)錄水平適應(yīng)缺氧環(huán)境最主要的調(diào)控因子，其在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等過(guò)程中起重要作用[1]。腺苷三磷酸結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2(ABCG2)屬于ATP結(jié)合組件蛋白G亞家族成員，在維持干細(xì)胞及多種細(xì)胞的穩(wěn)定性以及耐藥性等方面有重要的意義[2]。近年來(lái)HIF-2 、ABCG2在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展中的作用成為研究熱點(diǎn)，但在宮頸鱗癌中的相關(guān)報(bào)道較少。2012年10月～2015年5月，我們檢測(cè)了宮頸鱗癌組織中HIF-2、ABCG2的表達(dá)水平，探討其在宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及相關(guān)性。現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2012年10月～2013年2月于濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院行手術(shù)切除并經(jīng)病理組織切片證實(shí)為宮頸鱗癌的標(biāo)本88例(觀察組)，患者年齡27～64歲，平均52.9歲；患者術(shù)前均未行放、化療等治療。根據(jù)2009年FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ期37例，Ⅱ期30例，Ⅲ+Ⅳ期21例；其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，62例未見(jiàn)轉(zhuǎn)移；腫瘤分化程度為高分化42例，中分化28例，低分化18例；隨訪2年時(shí)間，存活24例、病死16例、失訪48例。選取同期因子宮肌瘤行全子宮切除的正常宮頸組織47例作為對(duì)照組，患者年齡30～59歲，平均49.7歲，術(shù)前TCT、HPV檢測(cè)均陰性。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象簽署知情同意書(shū)。兩組一般資料具有可比性。

1.2宮頸組織HIF-2 、ABCG2檢測(cè)采用免疫組化法。所有操作嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。兔抗人HIF-2 單克隆抗體購(gòu)于北京博奧森公司(工作濃度為1∶200)、鼠抗人ABCG2單克隆抗體購(gòu)于武漢博士德公司(工作濃度為1∶100)。通用型免疫組化試劑盒(SP9000)購(gòu)于北京中衫金橋公司。免疫組化步驟按照一抗說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。參照Giatromanolaki方法[3]，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，HIF-2 陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞核，ABCG2表達(dá)主要位于胞質(zhì)，胞核也有少量表達(dá)。按照陽(yáng)性細(xì)胞百分比：細(xì)胞陽(yáng)性率<5%計(jì)0分, 5%～<25%計(jì)1分, 26%～<50%計(jì)2分, ≥50%計(jì)3分。根據(jù)切片染色強(qiáng)弱：無(wú)染色計(jì)0分, 中等染色(棕黃色)計(jì)2分, 強(qiáng)染色(黃褐色)計(jì)3分。上述二項(xiàng)得分相加, 0分為-,1～2分為+, 3～4分為++, 5～6分為+++。以+、++、+++之和計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，HIF-2 表達(dá)和ABCG2的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。采用Kaplan-Meier法計(jì)算生存率，以Log-rank法比較組間生存率的差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組HIF-2 、ABCG2蛋白表達(dá)觀察組、對(duì)照組HIF-2 陽(yáng)性表達(dá)率分別為29.7%(14/47)、63.6%(56/88)， ABCG2陽(yáng)性表達(dá)率分別為23.4%(11/47)、52.3%(46/88)，P均<0.05。

2.2HIF-2 、ABCG2表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見(jiàn)表1。

表1　HIF-2 、ABCG-2表達(dá)與宮頸鱗癌

2.3宮頸鱗癌組織中ABCG2、HIF-2 表達(dá)的關(guān)系 相關(guān)性分析顯示，宮頸鱗癌組織中ABCG2、HIF-2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.316，P=0.003)。

2.4宮頸癌組織中HIF-2 、ABCG2表達(dá)對(duì)生存率的影響18例ABCG2陰性表達(dá)者2年累計(jì)生存率(83.3%) 明顯高于22例陽(yáng)性表達(dá)者(53.8%)，P=0.025；14例HIF-2 陰性表達(dá)者2年累計(jì)生存率(71.4%)明顯高于26例陽(yáng)性表達(dá)者(53.8%)，P=0.043。

3討論

低氧環(huán)境不僅在腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移及血管生成等過(guò)程中發(fā)揮作用，而且還與腫瘤干細(xì)胞的自我更新和多分化潛能有關(guān)[4]。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞可通過(guò)活化HIF來(lái)適應(yīng)微環(huán)境的變化[5]。HIF-2是由HIF-2 與HIF-1β組成的轉(zhuǎn)錄因子，是HIF-2的調(diào)節(jié)亞基與功能亞基。研究發(fā)現(xiàn)，HIF-2 在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目的增多、癌組織分化程度的降低而增高，且與不良預(yù)后密切相關(guān)[6～8]。另有研究發(fā)現(xiàn)，HIF-2 的表達(dá)與宮頸鱗癌呈顯著正相關(guān)，且隨宮頸癌分期提高其陽(yáng)性表達(dá)率亦增加[9，10]。本研究結(jié)果顯示，觀察組HIF-2 陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組,且 HIF-2 表達(dá)與宮頸鱗癌分化程度、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者2年生存率有關(guān)。這提示HIF-2 的陽(yáng)性表達(dá)可增強(qiáng)宮頸鱗癌的局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力，并可用于初步推測(cè)宮頸癌患者的預(yù)后。

ABCG2基因于1998年首先從耐藥乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，以往研究主要認(rèn)為ABCG2的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的化療耐藥有關(guān)。近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道，ABCG2基因與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)侵襲轉(zhuǎn)移和生存關(guān)系密切[11]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，抑制ABCG2基因的表達(dá)治療腦膠質(zhì)瘤效果較好[12]。另有學(xué)者認(rèn)為，ABCG2的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，高表達(dá)者預(yù)示預(yù)后較差[13]。本研究顯示,觀察組ABCG2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，且其表達(dá)與腫瘤FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度有關(guān)；ABCG2陽(yáng)性表達(dá)者2年累計(jì)生存率明顯低于陰性表達(dá)者，提示ABCG2表達(dá)情況可能是影響宮頸癌患者預(yù)后的重要因素。

相磊等[14]采用RNA干擾技術(shù)沉默乳腺癌中的HIF-2基因，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞中ABCG2 mRNA水平及蛋白表達(dá)水平明顯降低。Xiang等[15]在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中研究顯示，HIF-2 在低氧環(huán)境下與啟動(dòng)子功能區(qū)的低氧反應(yīng)元件結(jié)合，啟動(dòng)了ABCG2的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療耐藥。本研究結(jié)果顯示，在宮頸鱗癌組織中ABCG2、HIF-2 的表達(dá)呈正相關(guān)，HIF-2 陽(yáng)性表達(dá)者ABCG2表達(dá)率明顯高于HIF-2 陰性表達(dá)者，提示二者共同參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。

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通信作者：張旭艷

中圖分類號(hào)：R737.33

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2015)46-0077-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.46.034